(E)-4-(β-溴乙烯基)苯酚酯类化合物的合成及其IDO抑制活性研究

目的合成(E)-4-(β-溴乙烯基)苯酚酯系列化合物并评价其吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)抑制活性。方法化学合成(E)-4-(β-溴乙烯基)苯酚和一元羧酸,通过两者的酯化反应获得一系列(E)-4-(β-溴乙烯基)苯酚酯新型化合物;运用基因工程方法表达、纯化重组人IDO(rhIDO),建立酶活性检测体系;同时检测(E)-4-(β-溴乙烯基)苯酚酯化合物的IDO抑制活性。结果化学合成6个(E)-4-(β-溴乙烯基)苯酚酯新型化合物,检测出其中3个具有高效的IDO抑制活性。结论 (E)-4-(β-溴乙烯基)苯酚酯类化合物是一类新型的具有发展潜能的IDO抑制剂。

IDO抑制剂黄连碱对Aβ与IFN-γ联用诱导的PC12细胞凋亡的影响

阿尔兹海默症（Alzheimer′s disease,AD）,又称原发性老年痴呆症,是一种致死性慢性中枢神经系统退行性疾病,发病机制复杂,主要特征包括细胞外β淀粉样斑块（amyloidβ-protein,Aβ）、细胞内神经元纤维缠结以及神经元功能紊乱或丢失。

深海耐盐杆菌来源酯酶PE8的表达纯化、结晶和晶体X-ray衍射研究（英文）

从深海耐盐杆菌Pelagibacterium halotolerans B2T中分离鉴定的酯酶PE8隶属于酯酶第六家族.因具有耐盐、较高的热稳定性、高手性选择性,PE8是工业上高效生产手性药物前体(R)-3-(4-氟苯基)戊二酸单甲酯((R)-3-MFG)很有开发潜力的催化剂,但其分子催化机理并不清楚.PE8在大肠杆菌中体外表达,并通过镍柱亲和层析,以及凝胶过滤层析纯化,最终通过悬滴结晶方法获得了PE8蛋白晶体.晶体经过X-ray衍射分析获得1.66的分辨率,属于空间群P21,晶胞参数为a=41.772,b=73.398,c=66.403,β=102.37°.一个异构单元包含2个蛋白分子,溶剂(水)含量为35%.

组蛋白H3K4甲基转移酶复合物亚基Ash2参与裂殖酵母产孢

在氮源缺乏及信息素存在的条件下,裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)进行减数分裂并完成产孢。在此过程中,信息素介导的MAPK(Mitogen-activated protein kinases)信号通路调控减数分裂相关基因的表达。Spk1是MAPK通路的核心成员,通过蛋白磷酸化的方式激活转录因子Ste11,从而激活mei2+、mam2+和map3+等减数分裂相关基因的表达。尽管组蛋白H3K4甲基化参与基因转录激活、染色质重塑等诸多生物学过程,但其在裂殖酵母产孢过程中的作用并不清楚。文章通过序列比对,发现裂殖酵母Ash2作为H3K4甲基转移酶复合物COMPASS的亚基具有两个保守的结构域,定位于细胞核内参与H3K4的甲基化修饰。ash2+的缺失引起裂殖酵母在氮源缺乏时产孢过程的延迟及产孢率下降。ChIP、定量PCR分析结果显示,ash2+的缺失降低了spk1+编码区H3K4的二甲基化水平,造成spk1+mRNA水平的明显下调。在ash2Δ细胞中,虽然ste11+的转录水平没有变化,但Ste11的靶基因mei2+、mam2+和map3+的转录水平明显下降。在裂殖酵母中,组蛋白H3K4甲基转移酶复合物COMPASS的亚基Ash2通过调控二甲基化水平修饰从而调节MAPK信号通路,参与裂殖酵母的有性生殖,为建立表观遗传修饰与减数分裂之间的联系提供了新的线索。

烟曲霉Asp f3和Asp f4线性B细胞抗原表位最小基序鉴定

烟曲霉(Aspergillus fumigatus)是一种广泛存在于自然界中的条件致病菌,其产生的分生孢子被易感人群吸入后定植于肺部,引起3种曲霉病:致咯血的曲霉肿、致肺纤维化的变应性支气管肺曲霉病、致较高死亡率的侵袭性曲霉病。目前临床上用于诊断烟曲霉感染的血清免疫学指标有半乳甘露聚糖和1,3-β-D-葡聚糖,但特异度和灵敏度方面存在一定的局限性。Asp f3和Asp f4为烟曲霉主要抗原,在感染者血清中存在相应的循环抗体。本研究分别用兔抗Asp f3和Asp f4抗血清对其进行抗原表位扫描,鉴定了8个Asp f3和6个Asp f4最小表位基序肽。用所鉴定的最小表位基序与烟曲霉其他抗原的最小表位基序构建嵌合肽,可能有助于提高烟曲霉感染诊断的特异度和灵敏度。

4种禽流感病毒M2e多肽的串联表达和小鼠口服免疫效果

为研制广谱性禽流感口服疫苗,将4种禽流感病毒特异的基质蛋白2胞外区(matrix protein 2ectodomain,M2e)多肽与黏膜免疫佐剂CTA1-DD串联,原核表达并纯化CTA1DD-AVI4M2e融合蛋白。以200μg融合蛋白CTA1DD-AVI4M2e口服免疫BALB/c小鼠,结果显示实验组肠液IgA抗体效价和血清IgG抗体效价比对照组显著升高,血清中特异性IgG抗体效价达约360倍。分割的3段肠样中:第1段浸出液IgA抗体效价约为360倍,第2段约为120倍,第3段约为9 720倍。结果表明,本研究制备的CTA1DDAVI4M2e具有显著口服免疫效果,为后续研究提供了基础。

红树林土壤微生物模块化聚酮合酶基因(簇)及其多样性研究

聚酮类化合物(Polyketide)是一类重要的具有药用价值的生物活性分子.通过宏基因组学技术获得了红树林土壤微生物中模块化聚酮合酶(Polyketide Synthase,PKS)基因(簇),并对其多样性进行了研究.首先构建了该红树林土壤微生物的16SrDNA文库,初步分析了红树林土壤样本的细菌群落组成,发现许多菌群曾经被报道存在PKS基因簇,约占整个细菌群落的75%.利用相关菌群的PKS酮基合成酶结构域(Ketosynthase,KS)的保守区域序列信息设计简并引物,并构建了KS DNA序列文库.经测序获得131条新型KS序列,该结果表明红树林土壤微生物中蕴含了许多新型的聚酮类化合物合成酶.为了进一步获得聚酮合酶基因(簇),我们通过土壤微生物宏基因组Cosmid文库的构建与筛选,得到了13个属于trans-AT PKS,cis-AT PKS,NRPS/PKS Hybrid等类型的聚酮合酶的基因(簇),并通过构建KS序列的系统进化树分析了样本中聚酮合酶的多样性组成.

烟曲霉Asp f3和Asp f4的表达纯化与多克隆抗体的制备

侵袭性曲霉病以烟曲霉在肺部定植、侵袭为主,具有较高的致死率.治疗侵袭性曲霉病的关键是早期确诊.目前临床上用于诊断侵袭性曲霉病的血清学方法是检测血清中半乳甘露聚糖循环抗原的GM试验,在敏感性和特异性方面存在局限性.为了用抗重组蛋白多克隆抗体鉴定和分析烟曲霉Asp f3和Asp f4特异性和曲霉广谱性表位,构建检测可疑血清样本中相应抗体的表位嵌合肽,以诊断侵袭性曲霉病.本研究表达纯化了烟曲霉Asp f3和Asp f4重组蛋白,制备了IgG抗体滴度均在1.28×106以上的高滴度的兔抗重组蛋白多克隆抗体.

长链非编码RNA LINC01126异常高表达促进前列腺癌发生发展

长链非编码RNA(lncRNA)在疾病的发生发展过程中发挥着重要的作用.LncRNA的异常表达与许多肿瘤的发生发展密切相关.本研究通过分析肿瘤基因图集(TCGA)数据库首次鉴定出了在前列腺癌中高表达的长链非编码RNA LINC01126,并在前列腺癌样本和前列腺癌细胞系中得到了验证.通过进一步分析发现,LINC01126的表达量在肿瘤中显著上调(419例前列腺癌组织样本和52例癌旁组织样本,P<0.001),LINC01126表达与临床病理分级的相关性分析中,相比于癌旁组织,Gleason 8样本和Gleason 9样本中的LINC01126表达水平显著增加(52例癌旁组织样本;Gleason 8,n=44,P<0.001;Gleason 9,n=71,P<0.001).进一步的分析结果表明,LINC01126能够较好地指示前列腺癌的Gleason分级.相比于Gleason 6样本,Gleason 8样本和Gleason 9样本中的LINC01126表达水平上调(Gleason 6,n=30;Gleason 8,n=44,P<0.01;Gleason 9,n=71,P<0.05).同样,相比于Gleason 7样本,Gleason 8样本和Gleason 9样本中的LINC01126表达水平也显著增加(Gleason 7,n=193;Gleason 8,n=44,P<0.001;Gleason 9,n=71,P<0.001).LINC01126的表达水平与前列腺癌病理分期的相关性结果提示,LINC01126在发生转移的前列腺癌中的表达量更高,差异显著(T2a,T2b,T2c样本共144例,T3a,T3b,T4样本共194例,P<0.01).另外,还分析了与LINC01126共表达或相反表达的mRNA,作为其可能的调控基因,及其这些基因的生物学进程和相关的信号通路,表明LINC01126与前列腺癌发生发展具有潜在的生物学关联,有望成为前列腺癌的生物标志物.

非编码RNA(ncRNA)在前列腺癌发生发展中的作用机制

人类基因组计划的研究结果显示,仅有2.5万~3万个蛋白质编码基因,占总基因组序列不到3%,其余基因组序列转录产生的RNA都是非编码RNA（non-coding RNA,ncRNA）.ncRNA与恶性肿瘤发生发展关系密切.近年来,关于ncRNA中的长链非编码RNA（lncRNA）以及环状RNA（circRNA）的研究进展迅速.本文就lncRNA以及circRNA在前列腺癌中作用机制的研究进展作一综述.

HPV58型E2蛋白表达纯化与多克隆抗体制备

目的:表达纯化重组人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)58型E2蛋白,制备多克隆抗体。方法:构建重组质粒p ET-28b-E2,转化至BL21(DE3)p Lys S中诱导表达,包涵体洗涤后经镍柱亲和层析分离得到纯化目的蛋白。用纯化的重组E2蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗HPV58型E2蛋白多克隆抗体,ELISA分析多克隆抗体的效价,免疫印迹检测抗体的特异性。结果:表达纯化了重组HPV58型E2蛋白,制备了高滴度和高特异性的多克隆抗体。结论:制备的多克隆抗体可用于对HPV58型E2蛋白进行精细B细胞线性表位鉴定。