上海地区汉族人群脑出血患者脂蛋白酯酶Hind Ⅲ基因多态性的研究

目的 探讨脂蛋白酯酶（LPL） HindⅢ基因多态性与脑出血的相关性.方法 采用病例对照研究方法、PCR-RFLP方法以及基因扩增产物测序方法,检测120例脑出血患者（脑出血组）和147例健康体检者（对照组）LPLHindⅢ基因多态性,并测定血脂和血糖.结果 脑出血组T和G等位基因频率分别为90.8％和9.2％;对照组分别为82.3％和17.7％.脑出血组G等住基因频率和GG基因型检出率明显低于对照组,TG、LDL-C、空腹血糖、收缩压、舒张压明显高于对照组（P＜0.05,P＜0.01）.TT基因型人群TG水平较TG＋ GG基因型人群明显升高（P＜0.05）.调整年龄、高血压、高血糖等相关因素,应用多元logistic回归分析显示,LPL HindⅢG等位基因可能是一个保护性因素（OR=0.392,95％CI：0.191～0.805,P=0.011）.结论 LPL HindⅢ基因多态性与脑出血有一定关联,LPL HindⅢG等位基因突变可能是脑出血发病的一个保护因素.

诱骗受体3在HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者中的表达及意义

目的探讨诱骗受体3(DcR3)在乙型肝炎病毒(HBV)e抗原(HBeAg)阴性的慢性乙型肝炎(CHB)患者中的表达及意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测80例血清HBeAg阴性的CHB患者和96名正常人血清DcR3;全自动生化分析仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT);聚合酶链反应(PCR)检测HBV DNA。结果 HBeAg阴性的CHB患者血清DcR3水平[1.58(0.48～3.23)ng/mL]明显高于正常对照组[0.83(0.16～2.32)ng/mL,P<0.000 1)]。HBeAg阴性的CHB患者血清DcR3水平与HBV DNA和ALT水平呈正相关(r=0.704、0.732,P均<0.000 1)。结论 DcR3在HBeAg阴性的CHB患者中高表达,并与HBV DNA和ALT强相关,具有潜在的作为HBeAg阴性CHB患者诊断、治疗观测的新指标的应用价值。

血尿酸降低对2型糖尿病早期肾损伤的诊断价值

目的:探讨血尿酸降低对2型糖尿病早期肾损伤的诊断价值。方法:测定83例2型糖尿病患者血尿酸(UA)水平,同时检测其尿微量白蛋白(U-mALB)和尿β2微球蛋白(U-β2M),并分组进行统计学分析。结果:2型糖尿病患者早期的肾小管功能有受损,肾小球功能未明显受损伤时,U-β2M升高,并且U-mALB正常时尿酸值才低于两者正常组和正常对照组(P<0.05和P<0.01)。结论:血尿酸可作为2型糖尿病患者早期肾损伤预示指标。

脓毒症大鼠小肠上皮PepT1的表达变化及其与Ghrelin的相关性研究

目的探讨脓毒症对大鼠小肠上皮短肽载体1(PepT1)表达的影响以及PepT1表达与Ghrelin水平的关系。方法雄性SD大鼠48只,随机分为对照组(n=8)和脓毒症组(n=40)。脓毒症组大鼠采用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立脓毒症模型,模型建立后4、8、12、16、20h分别处死8只小鼠,留取小肠黏膜和全血标本。光镜下观察空肠黏膜的病理学变化,ELISA方法检测血清及肠黏膜Ghrelin水平,Real-time PCR及Western Blotting分别检测肠上皮PepT1 mRNA及蛋白的表达。结果 CLP所致脓毒症导致大鼠小肠黏膜明显损伤,主要表现为黏膜短缩、脱落,毛细血管扩张出血和溃疡形成。脓毒症8、12、16、20h各亚组小肠上皮PepT1 mRNA表达水平均较对照组明显下降(P<0.05),但各亚组间表达水平无明显差异(P>0.05);脓毒症12、16、20h亚组小肠上皮PepT1蛋白表达较对照组及脓毒症4h和8h亚组减少(P<0.05);血清和肠黏膜Ghrelin水平均在建模4h时达高峰,之后逐渐下降,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);血清和肠黏膜Ghrelin水平与PepT1蛋白表达均呈正相关(r=0.792、r=0.756,P<0.001)。结论脓毒症时Ghrelin表达水平在短暂上升后显著下降,与小肠上皮PepT1蛋白表达密切相关,可能是导致脓毒症时小肠上皮PepT1表达下降的原因之一。

脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体生物学功能的变化

目的:探讨脓毒症对大鼠小肠上皮短肽载体(PepT1)的表达和功能变化影响。方法:将60只大鼠分为对照组(n=10)和脓毒症组(n=50),采用盲肠结扎穿刺术(CLP)动物模型。模型建立后4、8、12、16和20 h留取血标本和小肠黏膜,行肠黏膜病理检查,用Elisa方法检测血清、肠黏膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平,实时定量PCR和蛋白印迹法分别检测肠上皮PepT1 mRNA和蛋白表达。采用高效液相色谱法检测PepT1的摄取功能。结果:CLP所致的脓毒症大鼠小肠黏膜明显损伤,表现为黏膜短缩、脱落,毛细血管扩张出血和溃疡形成。血清和肠黏膜TNF-α、IL-1β水平均在建模4 h时达高峰,之后逐渐下降,显著高于对照组(P<0.05)。脓毒症8、12、16和20 h组小肠上皮PepT1 mRNA表达水平较对照组明显下降(P<0.05),PepT1蛋白表达也较对照组显著减少(P<0.05)。脓毒症12、16和20 h组小肠上皮PepT1对底物的摄取功能较对照组明显下降(P<0.05),摄取量也较脓毒症4 h和8 h组明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:CLP所致的脓毒症大鼠小肠上皮PepT1 mRNA和蛋白表达明显下降,机体在基因和蛋白水平下调了肠上皮PepT1生物学功能。

脂多糖对U937细胞中microRNA-107与NF-κB信号通路的影响

目的分析单核细胞在炎症状态下microRNA-107与NF-κB信号通路的相关性。方法经50ng/ml佛波酯(PMA)诱导成熟的U937细胞随机分为对照组和LPS(10μg/ml)刺激组,LPS刺激时间为1、3、6h,采用qRT-PCR检测各组细胞中microRNA-107、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL^(-1)β)的mRNA表达量;Western blot法检测细胞NF-κB(p65)与磷酸化p65(p-p65)蛋白含量。结果与对照组比较,LPS组细胞microRNA-107、TNF-α、IL^(-1)βmRNA表达量明显升高(P<0.05);p-p65/p65蛋白含量比值明显升高(P<0.01)。Spearman相关性分析显示,microRNA-107表达量与p-p65/p65蛋白含量比值呈中度正相关(r=0.69,P<0.01);与TNF-αmRNA表达量(r=0.835,P<0.01)、IL^(-1)βmRNA表达量(r=0.839,P<0.01)呈高度正相关。结论脂多糖刺激PMA诱导的U937细胞后microRNA-107的表达升高可能与NF-κB信号通路有关。

Caveolin在糖尿病神经病理性疼痛中的研究进展

陷窝蛋白(Caveolin)是细胞质膜微囊(Caveolae)的结构蛋白,参与胞物质转运、信号转导等。其家族有三种亚型,各亚型结构、分布以及生物学功能不同。Caveolin-1的下调导致表皮生长因子受体家族ErbB2受体上调,从而导致糖尿病神经病理性疼痛的发生,而磷酸化的Caveolin-1、突变后的Caveolin-3在周围神经病变中也发挥着重要作用。研究Caveolin家族分子在糖尿病神经病理性疼痛中的作用,可能为临床治疗提供新的思路,且具有重要的转化医学意义。

富马酸替诺福韦二吡呋酯治疗对乙型肝炎肝硬化患者T细胞免疫及细胞因子水平的影响

目的探讨富马酸替诺福韦二吡呋酯治疗乙型肝炎肝硬化的疗效及对患者外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子水平的影响。方法选取上海市松江区中心医院2017年1月至2018年12月收治的慢性乙型肝炎肝硬化患者36例作为观察组,选取同期健康体检人员30名作为对照组。分析观察组富马酸替诺福韦二吡呋酯治疗前和治疗后肝肾功能、HBV DNA等临床指标,对比分析两组患者T淋巴细胞亚群和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10)的水平。结果治疗后,观察组患者ALT为(28.32±17.19)U/L较治疗前的(76.23±38.21)U/L明显下降(t=13.728,P<0.05),肾功能无明显变化,HBV DNA均由阳性转为阳性。治疗后的CD3+T淋巴细胞为(68.6±12.3)%、CD4+T淋巴细胞为(40.6±9.3)%和CD4+/CD8+为(1.3±0.6),较治疗前显著增高(t=9.382、14.175、9.753,均P<0.05),但仍低于对照组(t=4.947、6.598、7.329,P<0.05);观察组CD8+T淋巴细胞百分比(30.3±6.2)%相比治疗前显著降低(t=12.368,P<0.05),但仍高于对照组(t=5.986,P<0.05)。乙肝肝硬化组患者治疗后IL-2(32.24±16.55)pg/mL和IFN-γ(9.08±5.23)pg/mL水平比治疗前明显下降(t=7.615、18.763,P<0.05),但仍高于对照组(t=5.784、13.643,P<0.05);治疗后IL-4(45.90±18.27)pg/mL和IL-10(19.85±5.63)pg/mL水平比治疗前明显升高(t=11.249、17.452,P<0.05),观察组治疗后水平明显低于对照组水平(t=10.476、9.415,P<0.05)。结论富马酸替诺福韦二吡呋酯能有效改善乙肝肝硬化患者肝功能和病毒学指标,改善T淋巴细胞亚群的免疫状态,对血清中细胞因子的分泌水平有明显的影响,抗病毒治疗后患者免疫功能部分恢复。

乙型肝炎肝硬化抗病毒治疗前后抗原特异性CD8^(+)T细胞功能分析

目的观察乙型肝炎肝硬化抗病毒治疗前后外周血HBV抗原特异性T细胞的数量功能与临床预后的相关性。方法经HLA-A2分型检测选取46例患者,采用主要组织相容性复合物(MHC)-抗原肽四聚体标记技术,经流式细胞仪检测乙型肝炎肝硬化患者抗病毒治疗前后外周血HBV抗原特异性CD8^(+)T细胞百分比,并对其细胞因子分泌能力及表型进行检测分析。结果46例人类白细胞相关抗原HLA-A2阳性者中,检出抗原特异性CD8^(+)T细胞表达的为22例。TDF治疗后患者ALT为(31.29±18.42)U/L,较治疗前(124.05±29.18)U/L明显下降(t=72,P=0.015),HBV DNA全部转阴,转阴率为100%。治疗后抗原特异性的CD8^(+)T细胞数量为(1.15±0.37)%,明显高于治疗前的(0.65±0.25)%(t=59,P<0.01);治疗后γ干扰素为(6.86±2.08)%,明显高于治疗前(3.58±1.26)%(t=46,P<0.01);抗病毒治疗后HBV表位特异性的CD8^(+)T细胞表达抑制性因子PD-1的细胞百分比为(0.43±0.19)%,低于治疗前的(0.76±0.43)%(t=131,P=0.0084);HBV表位特异性的CD8^(+)T细胞表达活性因子CD28的细胞百分比为(1.03±0.45)%,高于治疗前的(0.56±0.26)%(t=100,P=0.0006)。结论乙型肝炎肝硬化患者外周血中抗原特异性CD8^(+)T细胞存在功能缺陷,经抗病毒治疗后抗原特异性CD8^(+)T细胞数量和功能有一定程度的增强。

肢体抖动短暂性脑缺血发作的血压变异性研究

目的本研究拟探讨血压变异性(BPV)与肢体抖动短暂性脑缺血发作(LS-TIA)的关系。方法对19例LS-T1A患者(LS-TIA组)、32例TIA患者(TIA组)和33名体检者(对照组)进行动态血压监测,记录24h平均收缩压(24hSBP)、白天平均收缩压(d-SBP)、夜间平均收缩压(n-SBP)、24h平均舒张压(24hDBP)、白天平均舒张压(d-DBP)和夜间平均舒张压(n-DBP),并计算24h收缩压变异性(24h-SBPV)、白天收缩压变异性(chSBPV)、夜间收缩压变异性(n-SBPV)、24h舒张压变异性(24h-DBPV)、白天舒张压变异性(d-DBPV)和夜间舒张压变异性(n-DBPV)。结果与正常对照组比较,LS-TIA组和TIA组的24h-SBP、d-SBP、n-SBP、24h-DBP、d-DBP、n-DBP和脉压指数均显著升高(均P<0.05)。与TIA组比较,LS-TIA组患者脉压指数显著升高(P<0.05)。与对照组比较,LS-TIA组的24h-SBPV、d-SBPV、n-SBPV、24h-DBPV、d-DBPV和n-DBPV显著增高,TIA组的24h-DBPV、d-DBPV和n-DBPV显著增高(P<0.05或P<0.01)。与TIA组比较,LS-TIA组的24h-SBPV、d-SBPV、24h-DBPV和d-DBPV显著增高(均P<0.05)。结论LS-TIA患者较TIA患者BPV升高,BPV升高可能是LS-TIA发病的诱因之一。LS-TIA患者较对照组血压升高,可能是LS-TIA低灌注后代偿性血压升高。LS-TIA较T1A患者脉压指数升高,表明LS-TIA患者血管硬化更为严重。

钩端螺旋体对血管内皮细胞单层的侵袭性研究

目的比较不同毒力的钩端螺旋体(钩体)对血管内皮细胞单层的侵袭能力和通透性改变的影响。方法利用Transwell小室和EAhy926细胞构建完整血管内皮细胞单层模型,分别加入钩体有毒株56606v株、减毒株56606 a株、腐生型PatocⅠ株、伤寒沙门菌14028菌株和大肠埃希菌DH5α菌株,作用2、4、8 h后在暗视野显微镜下计数到达Transwell下室细菌的数量,并检测内皮细胞单层对荧光颗粒的通透性改变。56606v株和56606 a株分别与EAhy926细胞共同孵育24 h,流式细胞术Annexin V和PI染色检测内皮细胞凋亡率。透射电镜下观察钩体穿透内皮细胞单层过程中的形态特征。结果感染后2 h,56606v和14028菌株开始在下室出现,而56606 a株和PatocⅠ株到4 h后才出现。随时间的延长,下室的细菌数目持续增加;感染8 h后,56606v株到达下室的数量最多,且明显多于56606 a株和PatocⅠ株(P<0.05)。不同毒力的钩体均未引起内皮细胞单层通透性明显改变;流式细胞术检测表明,钩体56606v株和56606 a株均未引起内皮细胞凋亡;电镜观察显示,钩体穿透内皮细胞单层主要是通过穿透内皮细胞胞体而非细胞间紧密连接处。结论有毒株钩体对内皮细胞单层的穿透能力明显强于减毒株和腐生型钩体;不同毒力的钩体对内皮细胞单层通透性及内皮细胞凋亡无明显影响。

糖尿病周围神经病变患者多伦多神经症状评分与炎症状态的相关性研究

目的探讨糖尿病周围神经病变(DPN)患者多伦多神经症状评分(TCSS)与炎症状态的相关性。方法收集2017年8月至2018年8月受试者132名,分为体检正常人群(NC组)33名、T2DM无神经病变(NDPN)组34例、DPN轻度(DPN+)组23例、DPN中度(DPN++)组21例和DPN重度(DPN+++)组21例。ELISA检测血浆TNF-α和IL-1β水平。比较各组临床资料、FPG、HbA1c、C-RP、红细胞沉降率(ESR)、HOMA-IR等指标,并进行相关性分析。结果 99例T2DM患者完成TCSS评分检查,平均检查时间为(13±2)min,DPN患病率为65. 7%。DPN组C-RP、TNF-α及IL-1β高于NDPN组及NC组,且随着病变程度加重而逐渐上升(P<0. 05)。Spearman相关分析显示,TCSS评分与C-RP、TNF-α和IL-1β呈现正相关(r=0. 243、0. 273、0. 558,P<0. 05),与ESR无相关性(r=-0. 035,P=0. 786)。多元线性回归分析显示,糖尿病病程、FPG、C-RP及IL-1β是TCSS的独立影响因素。结论 TCSS评分作为DPN简便、有效的严重程度分级指标,与C-RP、TNF-α和IL-1β密切相关。

脑肠肽Ghrelin对脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体1调节作用的研究

目的探讨脑肠肽Ghrelin对脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体1（PepT1）表达及功能的影响。方法雄性SD大鼠80只，按随机数字表法分为正常组、假手术组、脓毒症组和Ghrelin干预组4组，每组20只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症大鼠模型；制模后即静脉给予Ghrelin干预。各组术后20h随机取10只大鼠，进行小肠黏膜病理观察，实时定量聚合酶链反应（PCR）和蛋白质免疫印迹试验分别检测PepT1的mRNA和蛋白表达，同时检测小肠上皮PepT1对底物Gly—Sar的摄取浓度；另10只大鼠记录7d生存率。结果与正常组和假手术组相比，脓毒症组小肠黏膜受损明显，PepT1mRNA表达（21．43±1．37比23．29±1．24、23．23±1．48）、蛋白表达（7832．55±699．74比13584．74±360．66、13152．51±605．72）以及Gly—Sat浓度（60min：3．23±0．30比6．67±0．51、6．52±0．47）均明显降低（均P〈0．05）；与脓毒症组比较，Ghrelin干预组大鼠小肠黏膜损伤较轻，生存率（40％比20％）、PepT1mRNA表达（22．73±1．16比21．43±1．37）、蛋白表达（10506．26±850．59比7832．55±699．74）及Gly—Sar浓度（60min：4．83±0．32比3．23±0．30）均显著升高（均P〈0．05）。正常组与假手术组各指标比较无显著差异。结论脓毒症大鼠小肠上皮PepTlmRNA及蛋白表达明显下降，机体在基因及蛋白水平下调了小肠上皮PepT1生物学功能；Ghrelin干预对脓毒症小肠上皮PepT1mRNA、蛋白表达以及摄取能力均有上调作用。

胰腺炎相关性腹水对单核细胞的炎性损伤作用

重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）可产生大量的胰腺炎相关性腹水（pancreatitis associated ascetic fluid，PAAF），其中所含诸多致炎物质如细胞因子、胰酶等对SAP的病情发展及多器官功能衰竭起促进作用。动物实验表明对SAP模型进行腹腔灌洗可明显改善症状；而在临床治疗中，对SAP患者行腹腔灌洗亦能有效改善症状，减少并发症发生。然而，PAAF如何发挥促炎作用至今尚不清楚。本研究拟采用SAP患者腹水作用于人单核细胞，观察其对单核细胞的炎性损伤作用，进一步探究PAAF对SAP的炎性损伤机制。

乙型肝炎病毒x蛋白通过激活p38和JNK信号通路促进肝癌细胞增殖

目的探讨乙型肝炎病毒x(HBx)蛋白对人肝癌细胞增殖的分子作用机制。方法构建HBx蛋白的绿色荧光蛋白真核表达载体HBx-pEGFP-C1,利用脂质体转染技术将质粒HBx-pEGFP-C1转染人肝癌细胞系HepG2细胞株,荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,RT-PCR和Western blot方法检测X基因的表达情况。采用生长曲线和TUNEL染色检测HBx蛋白对HepG2细胞增殖和凋亡的作用。采用Western blot方法检测caspase3、p-p38、p-JNK、p-Akt的表达变化。结果成功构建HBx-pEGFP-C1真核表达载体并转染HepG2细胞,转染HBx蛋白的HepG2细胞与对照组相比增殖率明显升高(t=-0.8999,P=0.012),但细胞凋亡率和caspase3表达水平无明显变化。HBx组p-p38(24 h)(t=-11.058,P=0.0004)、p-JNK(48 h)(t=-15.022,P=0.0001)与对照组相比表达升高明显。结论HBx蛋白通过激活p38和JNK信号通路促进人肝癌细胞HepG2增殖。