1号染色体扩增区MEF2D基因在肝细胞癌组织中的表达

目的探讨1号染色体扩增区基因MEF2D mRNA在正常肝组织、肝癌细胞系及肝细胞癌(HCC)与癌旁组织中的表达并探讨其意义。方法利用逆转录聚合酶链反应方法对正常肝组织、13个肝癌细胞系及40例HCC癌组织与癌旁组织中MEF2D mRNA的表达情况进行初步分析。结果MEF2D mRNA在正常肝组织、13个肝癌细胞系及40例HCC癌组织与癌旁组织中均为高表达,其表达阳性率分别为100.0%(2/2)、92.3%(12/13)、95.0%(38/40)和97.5%(39/40)。MEF2D在各组的表达阳性率与-βactin相类似,差异无统计意义,均为P>0.05。结论染色体扩增区域常常存潜在的癌基因,由于染色体具有不稳定性,1号染色体扩增区MEF2D基因非HCC发生的癌基因,MEF2D mRNA高表达与HCC发生、发展无相关性。

HBx基因转染对Huh7细胞中基因转录的影响

目的:研究HBx基因对肝癌细胞Huh7中基因表达的影响,为探讨HBx在肝癌发生发展中的分子机制提供依据。方法:以pcDNA3.1b质粒为载体,将HBx转入Huh7细胞中,同时将pcDNA3.1b作空白对照。用Western印迹法证实基因转染成功。应用Affymetrix公司的人类全基因组寡核苷酸基因芯片分析转染HBx基因前后,Huh7细胞的基因表达谱。随机选择转染前后有明显差异的6个基因(3个上调,3个下调),用荧光定量PCR技术进行验证。结果:从基因芯片结果分析中发现,与对照组相比,HBx转染后Huh7细胞中明显上调的基因有88个,下调的基因有111个,这些差异基因的功能涉及多个方面。结论:HBx基因对肝癌细胞的影响是双向的,既有转录激活的作用,同时又有转录抑制的功能。这些数据对于理解HBx基因在肝癌发生发展中的作用具有重要的参考意义。

染色体10q25位点多态性与中国非综合征性唇腭裂的关联研究

目的：研究染色体10q25上2个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNP）位点rs7078160、rs4752028与中国人群非综合征性唇腭裂（non-syndromic cleft lip with or without cleft palate,NSCL/P）发病的相关性。方法：收集180例NSCL/P患者作为病例组,并按照表型分为单纯唇裂组、唇腭裂组、单纯腭裂组,将单纯唇裂组和单纯腭裂组合并为唇/腭裂组;选取360名健康人作为对照组。采集病例组和对照组的外周血血样并提取DNA。对上述2个SNP设计引物,PCR扩增其序列,通过二代测序进行基因型分型。利用SPSS19.0软件包中的χ2检验对病例组与对照组的基因型以及等位基因频率进行分析。结果：rs7078160的等位基因频率在唇/腭裂组与对照组中的差异最为显著（P=0.008,OR=1.500,95%CI=1.116~2.016）,rs4752028位点的等位基因频率在唇/腭裂组和对照组间亦存在显著差异（P=0.028,OR=1.424,95%CI=1.041~1.948）。结论：染色体10q25区域的rs7078160和rs4752028位点与中国人群非综合征性唇腭裂的发病相关。

ING5在肝癌中表达的研究

背景：生长抑制因子（ING）家族基因对多种肿瘤的发生具有抑制作用。目的：研究ING5基因在肝癌发生、发展中的作用。方法：构建表达ING5的真核和原核质粒，制备ING5多克隆抗体。以实时荧光定量RT-PCR检测肝癌组织中ING家族基因mRNA表达以及肝癌组织和肝癌细胞株中ING5mRNA表达，分别以蛋白质印迹法和免疫组化染色检测肝癌细胞株和肝癌组织中ING5蛋白表达。结果：肝癌组织中ING家族基因mRNA表达均下调。肝癌组织和肝癌细胞株中ING5mRNA和蛋白表达均下调。结论：ING5在肝癌中表达下调．对其发生、发展可能起抑制作用。

马尔尼菲青霉环腺苷酸依赖性蛋白激酶基因的功能研究

从本实验室早期建立的马尔尼菲青霉cDNA文库中,筛选到了一个编码环腺苷酸依赖性蛋白激酶(cAMP dependent protein kinase)基因cdpk.为了研究这个基因的功能,构建了相应的RNA干扰表达盒(利用gus基因将cdpk基因313 bp的反向重复序列片段隔开,并由受木糖诱导的xylP启动子来调控RNA干扰),通过根癌农杆菌介导转化到马尔尼菲青霉中.对转化子的研究发现,cdpk基因的沉默对菌体细胞的形态、孢子的萌发过程无明显影响,但是却减弱了菌落的生长速度、降低了红色色素的产量、并使马尔尼菲青霉几乎丧失了产孢功能.这暗示着cdpk基因对该青霉孢子的形成是必需的.

肝癌组织CT抗原基因CSAG1表达及体外对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨CSAG1(chondrosar-coma associated gene 1)基因在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞生长增殖的影响,为了解肝癌发生的分子机制奠定理论基础。方法:利用半定量RT-PCR技术检测CSAG1基因在12例肝癌和癌旁组织中的表达差异;RNA干扰技术沉默肝癌细胞株(Focus)内CSAG1基因的表达;利用CCK-8、克隆形成实验以及流式细胞仪分别定量分析内源性CSAG1基因被沉默前后的Focus细胞生长曲线、克隆形成能力以及细胞周期的变化。结果:与癌旁组织相比较,CSAG1基因在75%(9/12)肝癌组织中的表达量明显上调;沉默肝癌细胞株Focus中内源性CSAG1基因表达后,Focus细胞的生长明显减慢,克隆形成能力明显降低,S期细胞明显减少。结论:CSAG1可能是一个新的肝癌相关的促进基因,对其进行深入的研究有可能发现肝癌发病的新机制,也有可能发现肝癌治疗的新靶点。

肝癌相关基因DLK1转基因小鼠的构建与鉴定

目的构建并鉴定肝脏特异性表达的DLK1转基因小鼠。方法通过基因重组方法，将小鼠DLK1 cDNA片段置于小鼠白蛋白基因增强子和启动子序列下游，构建肝脏特异性表达的DLK1重组质粒，酶切重组质粒得到转基因片段，转基因在体外进行表达鉴定后，显微注射获得DLK1转基因首建小鼠，对首建小鼠进行传代，利用F1代小鼠进行DLK1转基因表达的鉴定。结果逆转录（RT）-PCR和细胞免疫荧光显示，转基因DLK1片段可在小鼠肝癌细胞系Hep1-6中表达。RT-PCR和免疫组化结果显示，DLK1在F1代成年转基因小鼠肝脏中特异性表达。结论成功构建了肝脏特异性表达的DLK1转基因小鼠。