慢性肾功能衰竭中医不同证型患者尿液相关蛋白研究

目的研究慢性肾功能衰竭(CRF)中医不同证型患者的尿液蛋白差异。方法选择251例2009年1月—2010年1月上海中医药大学附属龙华医院肾病科住院的CRF患者,其中肝肾阴虚组34例,脾肾气虚组75例,脾肾气阴两虚组56例,脾肾阳虚组32例,阴阳两虚组54例,另选择健康人50名作为对照组。应用SELDI-TOF-MS技术,采用H4蛋白芯片技术进行尿液蛋白质组学研究,用蛋白芯片阅读器PBSⅡ对芯片进行扫描、分析。结果 CRF中医各证型组与对照组间发现49个差异蛋白峰,差异有统计学意义(P<0.01)。各证型组间ROC曲线下面积显示:肝肾阴虚组和脾肾气虚组、脾肾气阴两虚组、脾肾阳虚组、阴阳两虚组以及脾肾气阴两虚组和脾肾阳虚组组间差异度较明显,脾肾气虚组和脾肾气阴两虚组、脾肾阳虚组,脾肾气阴两虚组和阴阳两虚组及脾肾阳虚组和阴阳两虚组差异度一般,脾肾气虚组和阴阳两虚组差异度不明显。结论尿液蛋白标志物能在一定程度上反映CRF各证型组间生物学特点的区别。

基于表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术的慢性肾衰竭中医湿证尿液中相关蛋白研究

目的采用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术研究慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)中医湿证患者的尿液蛋白标志物。方法采集CRF湿证患者90例和非湿证患者60例的尿液,采用H4蛋白芯片技术进行尿液蛋白质组学研究,用蛋白芯片阅读器PBSⅡ对芯片进行扫描、分析。结果 (1)湿证组与非湿证组尿液样本的蛋白质图谱在质荷比1000-20000范围内检测到25个差异蛋白峰(P<0.01)。(2)经生物信息学分析建立CRF中医湿证尿液蛋白预测模型,得到M/Z8654.96、M/Z2081.65、M/Z18667.3和M/Z2242.14共4个差异蛋白峰组成的生物标记物可以将湿证组和非湿证组样本较好地分类,其正确率84.7%,灵敏度为92.2%,特异性为73.3%。(3)湿证组与非湿证组尿液中差异蛋白峰经SwissProt数据库鉴定,可能为7种蛋白质。结论初步筛选出CRF中医湿证的尿液蛋白标志物,建立了CRF中医湿证尿液蛋白预测模型,通过数据库对尿液蛋白标志物进行了鉴定,为CRF中医湿证的临床辨证提供了一定的实验依据。

遗传性疾病预防技术体系建设

我国遗传性疾病发病率在20%以上,治疗效果非常有限,预防需要较强大技术体系支撑。2003年SARS暴发后的疾病预防控制（疾控）中心增添了不少先进检测仪器,但距真正信任疾病病因或致病因素检测分析结果仍然有一定距离。

基于SELDI-TOF-MS技术的慢性肾衰竭4种舌苔相关蛋白研究

目的:采用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)技术研究慢性肾衰(CRF)患者4种类型舌苔中的差异蛋白标志物。方法:采集CRF患者的舌苔102例,其中腻苔组56例(白腻苔组24例、黄腻苔组32例)、非腻苔组46例,正常对照组的薄白苔38例,采用NP20蛋白芯片技术进行舌苔蛋白质组学研究,用蛋白芯片阅读器PBSⅡ对芯片进行扫描、分析。结果:在质荷比1 000-20 000范围内,腻苔组与正常对照组有17个差异蛋白峰(P<0.01),非腻苔组与正常对照组有19个差异蛋白峰(P<0.01),腻苔组与非腻苔组有9个差异蛋白峰(P<0.01),白腻苔组与正常对照组有9个差异蛋白峰(P<0.01),黄腻苔组与正常对照组有11个差异蛋白峰(P<0.01)。结论:初步筛选出了CRF 4种类型的舌苔蛋白标志物,为CRF中医舌诊的客观化研究提供了一定的实验依据。

基于SELDI-TOF-MS技术的慢性胃炎患者腻苔相关蛋白标志物研究

目的研究慢性胃炎患者腻苔相关蛋白标志物。方法采集慢性胃炎患者的舌苔100例、正常人的舌苔38例,根据舌苔色质将慢性胃炎患者分为腻苔组50例,非腻苔组50例,其中腻苔组又分为白腻苔组17例,黄腻苔组33例。采用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术对各组舌苔进行蛋白质组学研究。利用NP20蛋白芯片技术进行舌苔蛋白质组学研究,用蛋白芯片阅读器PBSII对芯片进行扫描、分析。结果在质荷比1000～20000范围内,腻苔组与正常对照组有69个差异蛋白峰(P<0.01),非腻苔组与正常对照组有63个差异蛋白峰(P<0.01),腻苔组与非腻苔组有4个差异蛋白峰(P<0.01),白腻苔组与正常对照组有52个差异蛋白峰(P<0.01),黄腻苔组与正常对照组有62个差异蛋白峰(P<0.01),白腻苔组与黄腻苔组有2个差异蛋白峰(P<0.01)。结论该研究初步筛选出了慢性胃炎患者腻苔的蛋白标志物,为慢性胃炎中医舌诊的客观化研究提供了一定的实验依据。

慢性肾衰竭患者尿液相关蛋白标志物研究

目的采用表面增强激光解吸离子化-飞行时间-质谱（surface enhanced laser desorption and ionizationtime of flight mass spectrometry，SELDI-TOF—MS）技术研究慢性肾衰竭（CRF）患者的尿液相关蛋白标志物。方法采集150例CRF患者和50例健康人的尿液，采用H4蛋白芯片技术进行尿液蛋白质组学研究；用蛋白芯片阅读器PBSII对芯片进行扫描、分析。结果CRF组与健康对照组尿液样本的蛋白质图谱在质荷比（M／Z）1000—20000范围内检测到141个差异有统计学意义的蛋白峰（均P〈0．01）。经生物信息学分析建立CRF尿液蛋白预测模型，得到M／Z4649．81和M／Z9536．92两个差异蛋白峰组成的生物标记物可以将CRF组和健康对照组样本较好地分类，其正确率为96．0％，敏感性为100．0％，特异性为94．7％。CRF组与健康对照组尿液中差异蛋白峰经SwissProt数据库鉴定，可能为17种蛋白质。结论筛选出CRF的尿液候选蛋白标志物并建立了CRF尿液蛋白预测模型，通过数据库对尿液候选蛋白标志物进行了鉴定，为CRF的早期临床诊断提供了依据。

纳米二氧化钛颗粒诱导人肺Ⅱ型上皮细胞活性氧的研究

[目的]观察纳米二氧化钛(Nano-TiO2)颗粒诱导细胞内活性氧(ROS)的产生情况。[方法]采用直径5nm锐钛型Nano-TiO2颗粒和直径<10nm、长度40nm金红石型Nano-TiO2颗粒为研究材料,选择细胞质和线粒体部位ROS特异荧光探针二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)及双氢罗丹明123(DHR123),用流式细胞仪测定10、20、40μg/mL不同晶型和粒径的Nano-TiO2颗粒在人肺Ⅱ型上皮(A549)细胞作用不同时间所产生的荧光强度。并在5～160μg/mL浓度下,用中性红方法测定两种Nano-TiO2颗粒的细胞毒性。[结果]锐钛型Nano-TiO2颗粒和金红石型Nano-TiO2颗粒诱导细胞质和线粒体内ROS结果基本相同,作用5min就可检测到ROS,一直持续到2h,而高剂量组诱导ROS大于低剂量组。锐钛型Nano-TiO2颗粒产生ROS峰值在30min,而金红石型Nano-TiO2颗粒产生ROS峰值在60min。用流式细胞仪检测ROS实验中意外出现纳米颗粒峰,峰值高低与纳米颗粒诱导ROS荧光强度反应一致,表明ROS反应与染毒剂量成正比关系,可在同一检测中得到证明。而在实验中未发现两种Nano-TiO2颗粒存在细胞毒性。[结论]Nano-TiO2颗粒可以诱导细胞质和线粒体内ROS产生。