幽门螺杆菌ureA、ureB基因克隆、序列分析及在E.coli中表达

目的 构建含幽门螺杆菌 (Hp) ure A、ure B基因重组质粒 ,测定、分析其核酸序列及推定的氨基酸序列 ,在 E.coli中高效表达两基因 ,为检测试剂和疫苗研究提供基础依据和抗原。方法 PCR法扩增 Hp菌株 HPSH4的 ure A、ure B基因 ,分别与 p GEX- 2 T载体连接并转化大肠杆菌JM10 5 ,测定克隆基因的核酸序列并与 Gen Bank公布的国外 5株 Hp菌株 (2 6 6 95 ,HPK 5 ,J99,CPM6 30 ,M6 0 398)的 ure A、ure B基因作序列比较 ,以 IPTG诱导 ,ure A、ure B基因在 E.coli中高效表达。结果 ure A核酸同源性 96 .3%～ 98.1% ,氨基酸同源性 98.3%～ 10 0 % ;ure B核酸同源性95 .8%～ 98.0 % ,氨基酸同源性 96 .4 %～ 99.6 %。以 IPTG诱导 ,在 E.coli中表达 rure A融合蛋白5 5 6 0 0 D,rure B融合蛋白 85 5 0 0 D。结论 不同地区 Hp菌株的 ure A、ure B存在程度不同的变异 ,克隆并表达 HPSH4的 ure A、ure B与 Gen Bank已公布的多数 Hp菌株有极高同源性 ,在 E.coli以融合蛋白高效表达 rure A和 rure