高水平稳定表达人睫状神经营养因子细胞株的建立

目的 建立能稳定且高水平表达人睫状神经营养因子(CNTF)的永久细胞株。方法 采用阳离子脂质体介导CNTF表达质粒转染C2C12、NIH3T3、HLF、CRL－2302细胞,经氨甲喋呤筛选出抗性克隆后,分别采用原位杂交检测细胞中CNTF mRNA的表达,采用免疫组织化学染色、Western blot方法检测细胞浆中CNTF蛋白质的表达,采用ELISA法检测培养液中CNTF的分泌水平。结果 不同的克隆产生和分泌CNTF的能力不同,但其中产生和分泌CNTF能力最强的克隆其培养液中CNTF的质量浓度分别是C2C12－CNTF 114OOpg/ml、NIH3T3－CNTF 9069.071pg/ml、HLF-CNTF 91046.15pg/ml及CRL-2302－CNTF 77 578.4 pg/ml。 结论 构建的多株细胞株均能持续、稳定、高水平表达和分泌CNTF。