靶基因xylE质粒载体转基因小鼠的建立

目的建立在基因组中整合有ｐＵＣ１１８ＮＸ质粒的转基因小鼠致突变检测模型。方法将含ｘｙｌＥ靶基因的ｐＵＣ１１８ＮＸ质粒ＤＮＡ显微注射至Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠３７６枚受精卵雄性原核中，存活的２２５枚受精卵移入１１只假孕母鼠双侧输卵管内发育成个体后，用ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、质粒回收转化试验和酶切鉴定方法筛选存活仔鼠。结果假孕母鼠中有７只妊娠，共产仔鼠２９只，存活２５只，其中ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测阳性小鼠１８只，阳性率为７２％。最后选择２只在基因组中完整整合ｐＵＣ１１８ＮＸ质粒的健康雄性小鼠作为Ｆｏｕｎｄｅｒ鼠，进行转基因小鼠致突变检测和建系工作。结论成功地建立了在基因组ＤＮＡ中整合有ｐＵＣ１１８ＮＸ质粒的Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ转基因小鼠。

乙基亚硝基脲诱发转基因小鼠体内基因突变及微核形成

目的 用致突变剂乙基亚硝基脲 (ENU)验证基于pUC 118NX质粒的转基因小鼠用于体内诱变研究的可行性。方法 用酶切、环化方法从经过和未经过ENU诱变处理的xylE ,C5 7BL 6J转基因小鼠脾脏组织DNA中重新分离pUC 118NX质粒 ,使其转化DH10B宿主菌并铺氨苄青霉素抗性平板培养后喷洒邻苯二酚溶液 ,通过菌落颜色不同筛选突变体 ,并对突变靶基因xylE测序分析以确定突变类型。同时取该转基因小鼠外周血及骨髓细胞 ,观察ENU对转基因小鼠微核形成率的影响。结果 转基因小鼠脾脏组织xylE基因自发突变率 <4 79× 10 - 5,经ENU( 5 0mg kg× 5 )处理后 ,脾组织基因诱发突变率为 19 83× 10 - 5,两者差异有显著性。ENU诱发小鼠脾组织基因突变的类型包括颠换( 5 0 % )、单 /双碱基插入 ( 3 7 5 % )和转换 ( 12 5 % )。经ENU( 5 0mg kg× 5 )处理后 ,转基因小鼠外周血细胞微核率 ( 7 6‰ )和骨髓细胞微核率 ( 8 8‰ )均明显高于溶剂对照组 ,表明ENU可诱发该转基因小鼠染色体畸变。结论 基于pUC 118NX质粒的xylE ,C5 7BL 6J转基因小鼠可用于同时测定体内基因突变和染色体畸变 ,有望成为一种新的评价化学物遗传毒性的检测系统。