超高效液相色谱-串联质谱法检测人微量血清中9种胆汁酸及其临床意义

目的 :分析糖尿病患者与正常对照组微量血清中胆汁酸各组分水平的差异,并探讨与血糖的关系。方法 :建立测定微量血清中9种胆汁酸的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)方法。选取15例糖尿病患者和10名正常对照者作为研究对象。血清样本经乙腈沉淀蛋白,采用Waters Atlantis T3柱分离,以甲醇-水(含乙酸)为流动相,用负离子多反应监测模式分析,检测空腹血清胆汁酸浓度。并且分析血清胆汁酸水平在2组间的差异及其与血糖和胰岛素的关系。结果:正常人体血清中以游离型胆汁酸和甘氨结合型胆汁酸为主。相比于健康对照组,糖尿病患者血清中甘氨鹅脱氧胆酸[7.24(3.34,10.83)mg/L比15.71(11.39,27.12)mg/L,P<0.05]和甘氨胆酸[1.41(0.96,1.88)mg/L比2.38(1.50,3.45)mg/L,P<0.05]显著升高,而2组甘氨脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、胆酸无显著性差异。空腹血糖与甘氨鹅脱氧胆酸及甘氨胆酸水平呈正相关(r=0.470,r=0.405,均P<0.05)。结论:建立了一种在微量血清中同时检测9种胆汁酸的灵敏、有效的UHPLC-MS/MS方法,为深入研究胆汁酸在疾病中的作用提供了一定的基础。利用该方法初步发现甘氨酸结合型胆汁酸(甘氨鹅脱氧胆酸和甘氨胆酸)水平在糖尿病患者血清中比例增加,提示胆汁酸组分的改变可能与糖代谢异常有关。