生物节律相关基因Cry1与肝癌的相关性探讨

目的研究生物节律相关基因Cry1与肝癌发生发展的相关性。方法逆转录PCR、Northernblot和免疫组织化学方法检测Cry1在各种肿瘤细胞系、人正常组织及人肝癌与配对的癌旁组织中的表达。构建Cry1重组的真核表达质粒并转染肝癌细胞SMMC-7721。生长曲线和软琼脂克隆形成试验检测Cry1过表达的SMMC-7721细胞的体外增殖速度。逆转录PCR检测与Cry1相互作用的生物节律基因在Cry1过表达的SMMC-7721中的表达。结果Cry1在人各种正常组织中均有不同程度的表达。Cry1在人肝癌癌旁组织中的表达水平高于癌组织中的表达。过表达Cry1对SMMC-7721细胞的体外增殖没有明显影响。结论生物节律相关基因Cry1与肝癌发生发展可能有一定的相关性。

抑癌基因及人原发性肝癌中抑癌基因研究进展（Ⅱ）

抑癌基因及人原发性肝癌中抑癌基因研究进展（Ⅱ）顾健人上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室（上海２０００３２）五、研究新的抑癌基因／癌基因的战略目前各国有关的科学家都在为寻找新的抑癌基因／癌基因而努力，为此必须有新的战略，其中之一是与人基因组...

利用集落形成实验和成瘤实验初步研究新基因的成瘤作用

目的 探讨新基因尤其是肝癌相关新基因的功能。方法 利用集落形成实验和成瘤实验初步分析HC90和HC3898基因的功能。结果 ①HC90基因的转染能增加SMMC 772 1肝癌细胞形成的集落数量 ;②注射转染了HC90基因的SMMC 772 1细胞形成的肿瘤平均瘤重大于注射SMMC 772 1细胞的自身对照组 ;③HC3898全长cDNA转染SMMC 772 1细胞能显著抑制集落的形成 ;④注射转染HC3898基因的SMMC 772 1细胞组平均瘤重小于注射SMMC 772 1细胞的自身对照组的瘤重 ,抑瘤率为 5 0 % ;⑤HC3898实验组瘤块切片检查可见凋亡细胞及凋亡小体 ,瘤块的组织DNA经 1.5 %琼脂糖电泳分析 ,可发现典型的凋亡“阶梯状DNA条带”。结论 HC90可能是与肝癌恶性表型相关的新基因 ,转染SMMC 772 1肝癌细胞后能促进肝癌细胞的生长。HC3898基因可能诱导凋亡并抑制肝癌细胞的生长。集落形成实验和成瘤实验是对基因功能进行初步分析的有效方法 。

HCAP1基因对Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的作用

目的 :研究外源HCAP1基因产物对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl- 2的作用。方法 :用脂质体介导的基因转移方法 ,把外源HCAP1基因转染到Raji细胞中 ,用流式细胞术和Hochest 332 58荧光染色检测细胞凋亡 ;用Westernblot检测外源HCAP1基因对凋亡相关蛋白Bax和Bcl- 2蛋白表达的调节。结果 :外源HCAP1基因导入Raji细胞 2 4、4 8和 96h后 ,细胞凋亡率增加。Westernblot显示Bax/Bcl- 2蛋白表达比值明显增高。结论 :转染外源性HCAP1基因可诱导Raji细胞凋亡 ,使Bax/Bcl- 2蛋白表达比例上调可能是HCAP1诱导凋亡的机制之一。

转染外源HC56基因对Jurkat细胞足叶乙甙作用敏感性的研究

目的 探讨HC5 6基因与化疗敏感性的关系。方法 把HC5 6基因转染Jurkat细胞 ,经G418筛选 ,获得稳定表达外源HC5 6基因的细胞克隆后 ,应用MTT法 ,观察HC5 6基因产物对Jurkat细胞拓扑异构酶Ⅱ抑制剂足叶乙甙 (etoposide ,VP16)敏感性的影响。结果 HC5 6基因转染Jurkat细胞 ,在 1μg ml、10 μg ml、5 0 μg ml浓度的VP16作用下 ,对细胞生长的相对抑制率分别为 5 1.7%± 4.2 % ,45 .1%± 3 .7% ,79.6%± 6.2 % ,明显高于在相应的VP16浓度作用下的PBK CMV空载体转染的对照细胞(分别为 9.5 %± 0 .6% ,7.0 %± 0 .5 % ,10 .2 %± 0 .9% ) (P <0 .0 1)。结论 HC 5

多结节原发性肝癌和癌旁组织中多个癌基因表达的分析

为寻找肝癌发生过程中较为重要的癌基因，并用于基因诊断作者应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法分析８例多结节肝癌及相应癌旁组织中的ＩＧＦ－Ⅱ，ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ３种癌基因的表达水平，结果发现３种癌基因在８例癌结节中呈不同程度的过量表达。其中１例的各个癌结节中３个癌基因表达程度基本平行。ＩＧＦ－Ⅱ和ｃ－ｍｙｃ在癌旁组织呈过量表达，其中３例ＩＧＦ－Ⅱ的表达超过癌组织，而Ｎ－ｒａｓ在癌旁组织的表达都接近正常。提示ＩＧＦ－Ⅱ和ｃ－ｍｙｃ基因与肝细胞增生有关，而Ｎ－ｒａｓ过量表达具有诊断意义。

增强子结合蛋白家族一个新基因的3′-非编码区序列对肝癌细胞7721生长的影响

目的观察所获得的增强子结合蛋白家族一个新基因ＨＰ８的３′┐非编码区（３′ＵＴＲ）对肝癌细胞生长的影响。方法将３′ＵＴＲ序列亚克隆至真核表达载体ｐＢＫＣＭＶ中，运用磷酸钙沉淀法转染肝癌细胞７７２１。结果观察到细胞的生长受到较明显抑制。结论表明该基因参与真核细胞转录调控，结合以前的实验结果（该基因在肝癌细胞中普遍高表达）。

FL6:一个肝癌内高表达的新基因的cDNA克隆

ＦＬ６：一个肝癌内高表达的新基因的ｃＤＮＡ克隆李宝安１万大方２刘彦仿１顾健人２（１第四军医大学病理学教研室西安７１００３３２上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室）关键词基因肝肿瘤分子克隆中图号Ｑ７５１癌基因和抑癌基因是细胞生长和转化的正负调...

人类染色体17p13.3位点新克隆基因HC56、HC71和HC90对Jurkat细胞活力的作用

目的 探讨人类染色体 17p13.3位点新克隆基因HC5 6、HC71和HC90对T淋巴瘤细胞株Ju rkat细胞活力的作用。方法 应用脂质体介导的基因转染方法 ,将外源基因HC5 6、HC71和HC90分别导入Jurkat细胞 ,用苔盼兰拒染试验 ,观察基因的瞬时表达对细胞活力的作用。结果 Jurkat细胞瞬时转染HC5 6和HC71基因后 ,与转染PBK/CMV空载体的实验对照组比较 ,第 2 4、4 8、72和 96h ,细胞的活力明显受抑制 (P <0 .0 1) ;Jurkat细胞瞬时转染HC90基因后 ,仅在第 96h细胞的活力受抑制 (P <0 .0 5 ) ,而第 2 4、4 8和 72h ,未发现细胞的活力受抑制 (P >0 .0 5 )。结论 外源HC5

传染性法氏囊病病毒VP2基因高变区序列分析

根据传染性法氏囊病病毒 (IBDV)VP2基因cDNA序列 ,在VP2基因高变区设计一对引物 ,用RT_PCR方法扩增IBDV分离株JS3和JS4。将扩增片段克隆后以双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列。JS3和JS4的同源性最高达 98% ,与已发表的vvIBDV、IBDV变异株、IBDV经典株及IBDV弱毒株核苷酸序列的同源性在 92 %～ 98%之间。根据IBDV的大ORF推导出该片段编码蛋白的氨基酸序列 ,JS3和JS4的同源性最高达 97% ,与上述其它病毒的同源性在 91 %～ 97%之间 ;七肽区的氨基酸序列 ,在强毒株完全相同 ,而在弱毒株有一个丝氨酸突变成了其它氨基酸。

人类染色体17p13.3位点新克隆基因HC56,HC71和HC90在白血病细胞的表达

为研究人类染色体 1 7p1 3 .3位点新克隆的基因HC56 ,HC71和HC90在白血病细胞中的表达 ,应用同位素标记的、以 βM 2基因作为内参的半定量RT PCR法 ,检测 35例急性白血病和 4株白血病细胞系的HC56 ,HC70和HC90基因的表达。结果显示 ,急性淋巴系白血病病人的HC90基因和T淋巴系白血病细胞系Jurkat细胞HC90基因表达水平降低。急性髓系白血病病人HC71基因表达水平降低。HC56基因表达在急性白血病和正常对照间未见显著差异。结论 :在人类白血病有HC70和HC90的基因表达异常。

Jurkat细胞转染外源HCAP1基因后的增殖抑制

HCAP1基因系人类染色体 17p13 .3区带克隆的新肝癌相关基因。已发现人类多种肿瘤存在此区带的杂合性缺失。本研究应用脂质体介导法将HCAP1基因转染T淋巴瘤Jurkat细胞系 ,经G418筛选 ,获得稳定表达外源HCAP1基因的细胞。用台盼蓝拒染试验计数活细胞 ,绘制生长曲线 ,进行软琼脂集落形成试验。结果显示 :与转染空载体质粒 pBK/CMV的细胞比较 ,转染外源HCAP1基因的Jurkat细胞增殖速率明显减慢 ,细胞倍增时间延长 ,在软琼脂上的集落形成能力下降 (P <0 .0 1)。结论 :外源HCAP1基因产物对Jurkat细胞的增殖有明显的抑制作用。

HC56基因转染对淋巴瘤或白血病细胞株活力的作用

目的:探讨外源HC56基因产物对B淋巴瘤细胞株Raji和髓系白血病细胞株K562细胞活力的作用。方法:应用脂质体介导的基因转染方法,将外源基因HC56分别导入Raji和K562细胞,用苔盼兰拒染试验,观察外源基因的瞬时表达对细胞活力的作用。结果:Raji和K562细胞转染HC56基因后,与转染PBK/CMV空载体的实验对照组比较,细胞的活力明显受到抑制(P<0.05)。结论:外源HC56基因产物可明显抑制淋巴瘤或白血病细胞株的活力。

HP8：增强子结合蛋白家族的一个新基因的cDNA克隆

以大鼠增强子结合蛋白（Ｃ／ＥＢＰ）ｃＤＮＡ为探针，筛选人胎肝ｃＤＮＡ文库，得到一个含有２４８０碱基命名为ＨＰ８的ｃＤＮＡ克隆，其中８４～１１０９位碱基属编码区，经基因数据库（ＥＭＢＬ，９５．６版本）查对未发现同源基因。该基因编码的蛋白Ｃ－末端含有亮氨酸拉链结构（ｌｅｕｃｉｎｅｚｉｐｐｅｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅ），和Ｃ／ＥＢＰ功能区（Ｃ－末端６０个氨基酸）同源性高达９７％，而上游编码区则与Ｃ／ＥＢＰ及其已知家族同源性很低，表明该基因属Ｃ／ＥＢＰ基因家族新成员。基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实该基因为单拷贝基因，在１４种胎儿组织中显示小肠、皮肤高表达，肾上腺中度表达，肝、肺、肾、甲状腺、胆囊低表达。在５例正常成人肝组织中仅２例低表达，而在１３对肝癌及癌旁肝组织中显示９例癌组织及７例癌旁组织高表达。以上结果提示该基因可能与细胞增殖有关。它的详尽功能的研究正在进行中。

传染性法氏囊病病毒不同分离株vp2基因部分核酸序列分析

根据已报告的传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)cDNA序列,设计引物,用RT-PCR扩增CH(鸡)、DU(鸭)、GE(鹅)和SP(麻雀)四种不同源IBDV分离株的vp2基因高变区。核酸序列测定分析表明,四种不同源IBDV分离株vp2基因高变区的同源性为97％.推导编码蛋白氨基酸序列的同源性98％,两个亲水区和七肽区的氨基酸序列完全一致。本研究结果提示,自然感染IBDV的鸭、鹅和麻雀不仅可成为病毒携带者或传染源,而且在病毒变异中起一定作用。

转染外源HCAP1基因对Raji细胞化疗敏感性的作用

目的 探讨外源HCAP1基因产物对B淋巴瘤 /白血病细胞系Raji细胞化疗敏感性的作用。 方法 用脂质体介导法 ,把HCAP1基因转染Raji细胞 ,经G4 18筛选后 ,分别与化疗药物DNR(daunoru bicin ,柔红霉素 )、VP16 (etoposide ,足叶乙甙 )和VCR(vincristine,长春新碱 )联合培养 2 4小时 ,用苔盼兰拒染试验计数活细胞。结果 转染HCAP1的Raji细胞 ,在不同浓度的DNR(0 .0 1～ 10 .0 μg/ml)和VP16 (5～ 80 μg/ml)作用下 ,与转染空载体和未转染对照细胞比较 ,细胞活力的抑制作用明显增强 (P <0 .0 5 )、IC50 (半数抑制浓度 )值明显降低 ;但与不同浓度的VCR(12 .5～ 10 0 μg/ml)作用 ,细胞活力的抑制和IC50 值与对照细胞相似。结论 HCAP1过表达可明显增加Raji细胞对DNR、VP16作用的敏感性 。

转染外源HCAP1基因对B淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖的作用

目的:HCAP1基因定位于人类染色体17p13．3,此区域在多种肿瘤组织呈杂合性缺失,本研究旨在探 讨HCAP1外源基因产物对B淋巴瘤细胞系Raji细胞增殖的作用。方法:应用脂质体介导法,将HCAP1基因转染Raji 细胞,经G418筛选、获得稳定表达外源HCAP1基因的细胞,用台盼蓝活细胞计数、绘制生长曲线、软琼脂集落培养及 BrdU(5溴-2’脱氧尿嘧啶)标记法,观察HCAP1基因产物对Raji细胞增殖的作用。结果:与转染空载体的对照细胞 比较,稳定表达外源HCAP1基因的细胞生长速度明显减慢,倍增时间明显延长,细胞集落形成数明显减少,BrdU掺 人细胞比例降低。结论:外源HCAP1基因产物的过表达对Raji细胞的增殖有抑制作用。

表达质粒pdBHhIL-4转化小鼠C127细胞的实验研究

为了使真核基因在真核细胞进行表达,我们将携带人白细胞介素4基因的表达质粒pdBHhIL-4转化哺乳动物细胞小鼠的C127细胞,该表达质粒由原始质粒pdKCR和牛乳头瘤病毒(pdBPV-1)及人IL-4 cDNA构建而成,再经酶切和凝胶电泳分析加以证实。细胞转化采用改进的磷酸钙沉淀法和甘油休克的方法,转化后的细胞逐渐呈现形态学上的改变,经活性测定其培养上清中具有人IL-4的表达。

应用PCR方法直接从噬菌体原液中扩增目的基因片段

应用ＰＣＲ方法直接从噬菌体原液中扩增目的基因片段徐砺新，王凡，刘彦仿（第四军医大学病理学教研室，西京医院眼科，西安７１００３２）万大方，顾健人（上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室，上海２０００３２）当前，基因分子生物学已成为全世界研究的热...

增强子结合蛋白家庭的一个新基因HP8定位于人19号染色体长臂13.1-13.2区带

目的:探讨增强子结合蛋白(C/EBP)家族一个新基因HP8的人染色体定位.方法:按常规方法制备分裂期人淋巴细胞切片,用生物素标记HP8基因 3’-端 2.1kb cDNA作探针,进行荧光原位杂交(FISH).对FISH信号及染色体上DAPI结合条带同时拍照,二者重迭信号进行计数,结果:100个有丝分裂图中,有72个显示阳性信号位于同一对染色体,并且无其他非特异性杂交带,杂交效率约为70%.参照DAPI结合条带,阳性信号位于人19号染色体长臂13.1-13.2区带.结论:HP8基因定位于人19号染色体长臂 13.1-13.2区带.