PCR-SSP分型检测上海汉族人群HLA-Cw位点血清学和非血清学鉴定的等位基因

应用补体介导的微量淋巴细胞毒实验可检出ＨＬＡＣｗ１～１０，但有２０％～５０％的空白（ｂｌａｎｋ）不能检出。利用ＰＣＲＳＳＰ对７０例上海汉族样本进行ＨＬＡＣｗ等位基因分型，首次在中国汉族人群中检出Ｃｗ１２０１／１２０２、１２０３、１３０１、１４、１６０１、１６０２、１７０１等非血清学鉴定的抗原，并对血清学鉴定抗原的基因进行分型，依次为Ｃｗ０１、０２、０３０２／０３０４、０３０３、０４、０５０１、０６０２、０７０１／０７０２／０７０３及０８。ＰＣＲＳＰ分型使上海汉族人群ＨＬＡＣｗ位点空白基因频率从０．３０７下降到０．０２８。１２例样本检出Ｃｗ０８，与原来认为中国人群中Ｃｗ８罕见的观点不符。结果证明，ＰＣＲＳＳＰ用于ＨＬＡＣｗ基因分型是快速、准确的。

树突状细胞治疗恶性肿瘤临床试验的研究

作为一种全新的生物治疗手段,树突状细胞(DC)已广泛应用于多种疫苗治疗的临床实践之中。到目前为止,美国、日本及欧洲各国都已开展了DC治疗的临床试验。与之相反,我国在DC的临床应用方面存在很大的差距。本文对近来国际上DC疫苗临床试验的总体情况及存在的问题进行了总结和分析,以期为我国DC疫苗临床试验的开展提供借鉴与参考。

PC交联脱细胞牛心包膜的力学性能、稳定性和血液相容性

测定了原花青素(PC)交联的脱细胞牛心包膜(dbpECM)的力学性能、稳定性和血液相容性.实验结果显示,2.5 mg/mL原花青素交联能将拉伸强度从29.1 MPa提高到51.3 MPa,并保持弹性模量基本不变,而抗胶原酶降解能力与戊二醛相当;PC-dbpECM浸泡于D-Hanks溶液中,仅过量未交联原花青素在一周内释放,而交联的PC在PC-dbpECM中保持稳定.1 mg/mLPC即可基本抑制体外钙化.PC或GA交联的dbpECM都有较好的血液相容性,但PC交联明显优于GA.2.5 mg/mL PC交联的dbpECM血小板的粘附率(7.8%)显著低于未交联组(26.1%)和GA交联组(36.6%),表明PC-dbpECM具有较好的抗血栓形成能力.结果表明PC-dbpECM具有良好的力学性能,稳定性和血液相容性,有可能成为制备人工心脏瓣膜的优良材料.

原花青素在酸性条件下交联制备心脏瓣膜的性能研究

为了明确原花青素（procyanidins,PC）在酸性条件下交联脱细胞心脏瓣膜是否能够维持其柔顺度、抑制其钙化成核和具备良好的生物学特性,以1 mg/mL PC在酸性条件下（pH3.0～7.4）交联脱细胞心脏瓣膜,采用万能力学测试仪测试研究其柔顺度,并用体外钙化、体外酶降解、细胞黏附、抗凝血和血小板黏附实验研究其抗钙化和相关生物学特性.结果显示,弱酸性条件下交联的脱细胞瓣膜（PC1-pH6.0）呈现出近似于未交联脱细胞瓣膜的柔软程度,交联后拉伸强度显著提高（5.95士0.6） MPa vs （4.64士0.81） MPa,同时弹性模量与未交联对照组相当,显示出较好的柔顺度;PC1-pH6.0组体外可有效抑制瓣膜钙化;PC交联能保护脱细胞瓣膜不被Ⅱ型胶原酶降解,瓣膜间质细胞在交联脱细胞瓣膜表面黏附良好,交联后的脱细胞瓣膜具有更好的抗血栓潜能.因此,pH6.0条件下PC交联的脱细胞心脏瓣膜具有类似于未交联脱细胞瓣膜的柔顺性,能有效抑制钙化,具有抗酶降解、抗血栓和良好的细胞相容性,有望用作可再细胞化的生物瓣.

树枝状聚合物在生物医学领域的应用进展

树枝状聚合物是一种人工合成的新型纳米材料 ,以其独特的结构和性能在生物医学领域受到了日益广泛的关注。作为一种新型非生物载体 ,其安全、高效、无毒 ,在药物输送、基因转移和医疗诊断等方面具有广阔的应用前景。

IgM及IgG抗c、E抗体致新生儿溶血病1例

Rh抗体因抗D引起婴儿发生新生儿溶血病已屡见报道，而因抗c、E抗体引起婴儿发生新生儿溶血病则不常见。此例为IgM抗c、E抗体所致，现报告如下：

HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b抗体MAIPA定量检测方法的建立

目的分别建立针对人类血小板抗原(HPA)-1a、HPA-3a、HPA-5b 3种抗体的定量血小板(PLT)抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测(MAIPA)方法。方法采用MAIPA方法检测不同浓度的标准或参比HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b抗血清,优化实验条件,在检测范围内绘制线性曲线,并分别分析其敏感性、特异性、准确性和精密度。结果针对HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b 3种抗体的MAIPA定量检测方法得到了优化,检测范围分别为0~4 IU、0~20 AU、0~20 AU,准确性(回收率)分别为96.20%~103.10%、97.90%~103.10%、100.20%~106.10%。批内精密度[变异系数(CV)]分别为1.3%~3.6%、2.7%~5.2%和4.7%~5.3%,批间精密度(CV)分别为4.0%~5.6%、4.4%~5.9%和3.2%~6.3%,检测人源抗体抗A、抗B、抗I、抗P均无明显阳性,具有良好的特异性。结论建立的针对HPA-1a、HPA-3a、HPA-5b抗体的MAIPA定量检测体系均具有较高的敏感度、特异度、准确度和精密度,对于临床相关疾病的诊断和PLT安全输注具有重要的应用价值。

HPA-1a抗体MAIPA定量检测标准体系的建立

目的建立针对人类血小板抗原HPA-1a抗体的血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定定量检测(MAIPA)的标准体系。方法用MAIPA方法检测不同稀释度的标准HPA-1a抗血清,优化该方法的最佳实验条件,绘制线性标准曲线,并对该方法的敏感度、特异性、准确度和精密度进行了分析。结果经优化,确定MAIPA定量检测方法的最佳实验条件如下:铺板抗体羊抗鼠Ig G单抗:3μg/m L,血小板每孔2×107个,检测抗体小鼠抗人CD61单抗:20μg/m L,酶标羊抗人Ig G:稀释度1:10 000。该方法的线性检测范围是0-4 IU。该方法最低检测限至少为0.3 IU,批内变异系数为1.3%-3.6%,批间变异系数为4.0%-5.6%。特异性检测:用抗-A、抗-B、抗-H、抗-I、抗-P1、抗-Lewisa等试剂以及含其他抗体的抗血清进行试验,均无明显阳性。结论本研究建立的针对HPA-1a抗体的MAIPA定量检测的标准方法具有较高的敏感度、特异性、准确度和精密度,对于临床相关疾病的诊断和血小板安全输注具有重要的应用价值。

HPA-1a抗体SPR技术定量检测方法的建立

目的:建立针对人类血小板抗原(HPA)-1a抗体的表面等离子体共振(SPR)技术定量检测方法。方法:以氨基偶联法在芯片表面偶联重组蛋白,采用SPR方法检测不同浓度的标准抗血浆样本,优化实验条件,在检测范围内绘制标准曲线,并分析其敏感性、特异性、准确性和精密度。结果:利用SPR技术建立针对HPA-1a抗体的定量检测方法,检测范围为0-20 IU,准确性(回收率)为97.75%-103.08%,批内精密度[变异系数(CV)]为3.53%-4.29%;批间精密度(CV)为2.08%-4.40%。特异性实验中,以不同的血小板膜蛋白单抗和含相应抗体的参比血浆进行检测,均未见明显阳性结果。结论:建立的针对HPA-1a抗体的SPR技术定量检测方法具有较高的敏感性、特异性、准确性和精密度,且操作简便快速,这为科研和临床相关抗体的检测提供了一种新的参考方法。

MASPAT法及流式细胞术用于血小板交叉配合的方法比较

目的对使用MASPAT法及流式细胞术进行血小板交叉配合试验的结果进行比较分析,为寻找更精确高效的用于血小板配血方法提供依据。方法随机选取上海市各临床医院血小板输注无效患者,送检上海市血液中心检测中心进行血小板特殊配型的血样20份(2018年1月),用MASPAT试剂盒和流式法进行交叉配合试验。分别根据制造商说明书及荧光强度值(MFI)进行结果判读,统计反应结果;用MACE法鉴定结果差异大的样品中是否存在血小板相关抗体HLA-I类及血小板特异性HPA1a抗体。结果20份患者血清样品有7份与6名供者的结果在两种方法中完全一致。将不一致的结果分为两类,一类为MASPAT法阳性而流式法阴性,占80.00%;一类为MASPAT法阴性而流式法阳性,占20.00%。用MACE法鉴定其中差异数最多的4个血清样品,证明其中不含HLA-I和HPA-1a抗体。结论MASPAT法与流式法用于血小板交叉配合试验的结果之间平行性不高,其中MASPAT法的阳性预期较高;相比之下,流式法可以减少假阳性的出现;事实上,虽然二者结果差异较大,但在本研究中最终配合性血小板的选择上,符合率达到90.00%。在有条件的实验室,未来可能可以用流式法取代MASPAT方法进行血小板交叉配合试验。

罕见的CisAB与B(A)血型的基因型研究

目的 研究ABO血型系统中血清定型与基因型不一致的情况 ,通过核苷酸序列分析 ,最终阐明其真正血型。方法 应用吸收放散等实验 ,研究血清学实验中ABO正反定型不一致的情况 ,同时采用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性方法 ,进行ABO初步基因分型 ,对二者结果矛盾的特殊标本则通过克隆测序了解他们的ABO基因第 6和第 7外显子的核苷酸序列构成。结果 在近年来收集到的并且做过基因分型的 3 5例ABO亚型标本中 ,有 7例标本血清学与基因分型不一致 ,血清学为AB亚型但基因分型却具有O基因。4例ABx ,基因分型均为A 10 2 /O ,其A基因在A 10 1的基础上 ,均有nt467(C→T)和nt80 3位 (G→C)的点突变 ,即都属于CisAB 0 1等位基因 ,真正的基因型是CisAB/O ;另外 3例血清学疑为AxB ,基因分型为BO的个体 ,除皆具有正常O基因外 ,其B基因在正常B等位基因的基础上 ,均发生单碱基突变 ,其中 1例存在nt70 0 (C→G) ,属于已经报道的B(A) 70 0等位基因 ;另外 2例无亲缘关系标本的B基因均存在新的nt64 0 (A→G)的点突变 ,导致 2 14位甲硫氨酸被缬氨酸置换。结论 通过核苷酸序列分析 ,证实 7例血清学表现为AB亚型而具有正常O基因的个体 ,4例是罕见的CisAB ,3例为B(A )型 ;同时在中国汉族ABO亚型人群中 ,检出一种新的B(A)

中国类孟买血型FUT1和FUT2基因研究

目的 研究中国类孟买血型的 FUT1和 FUT2基因构成。方法 10个血清学初步分析为类孟买血型的标本来源于不同地区 ,ABO常规定型 ,吸收放散试验鉴定其红细胞表面少量 A或 B抗原 ,检测唾液中分泌型血型物质 ,或通过 L ewis血型间接了解其分泌状态。聚合酶链反应 -限制性片段长度多态方法进行 ABO基因分型 ,并与血清学结果相互验证。对 FUT1(H)和 FUT2 (SE)的编码区进行 PCR产物直接测序 ,了解其 H及 SE位点基因型及核苷酸序列组成。结果 血清学和分子生物学两种方法证实 10例皆为罕见的类孟买血型。检测到 h1(nt5 4 7- 5 5 2Δag)、h2 (nt880 - 882Δtt)、h3(nt6 5 8c→ t)和 h4 (nt35 c→ t) 4个FUT1座位上的隐性基因 ,同时发现两种新的隐性等位基因 :hnew- 1 (nt5 86 c→t)和 hnew- 2 (nt32 8g→ a)。 10例中国类孟买个体 FU T2位点的研究表明 ,所有被研究标本的 FU T2基因 ,都具有 nt35 7c→ t的同义突变 ,其中 1例为 Seweak等位基因纯合子。结论 H位点的无效等位基因具有较为广泛的遗传多态性。除了已经报道的 h等位基因外 ,在中国类孟买个体中我们检测到两种新的隐性等位基因 ,并检出 1个 Sew的类孟买个体及 Se基因的一种新的 G716 A单核苷酸多态性位点。

多重PCR筛选K、Yt^b血型抗原的方法研究

目的建立筛选稀有血型抗原K、Yt^b的多重PCR体系，了解这两种血型抗原在维吾尔族人群中的分布情况。方法针对血型抗原K、Yt^b的编码基因KEL和ACHE单核苷酸多态性位点设计序列特异性引物，通过优化PCR反应条件，构建可同时检测K、Yt^b血型抗原的多重PCR体系，用该体系对362份新疆维吾尔族随机献血者样本进行相应抗原筛选，并对筛选到的稀有样本进行杂合性分析。结果成功构建可同时检测低频血型抗原K、Yt^b的多重PCR体系，362份维吾尔族样本中共检出9例K＋k＋，41例Yt（a＋b＋），4例Yt（a—b＋）。结论建立的检测K、Yt^b血型抗原的多重PCR体系简便有效。通过筛选所获得的维吾尔族稀有血型数据，可为临床输注配合性血液提供参考资料。

血型基因检测对照品的制备及其在三种稀有血型筛选中的应用

目的 应用基于聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）的基因定点诱变技术（sitedirected mutagenesis,SDM）制备s、Oka血型等位基因检测对照品.用多重聚合酶链反应（multiplex PCR）技术建立3种血型Fy2、s和Ok2的基因分型方法,以了解这3种血型在中国随机献血者中的多态性分布状况.方法 采用基于PCR的基因定点诱变技术对s和Oka血型等位基因的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点构建了含有突变SNP位点（GYPB基因cDNA 153位C/T突变和BSG基因cDNA 274位G/A突变）的标准质粒,作为s和Oka血型等位基因检测的对照品.同时针对血型抗原Fya、s和Oka等位基因的SNP位点设计序列特异性（sequence specific primer,SSP）引物,构建多重PCR体系,对438份随机献血者样本进行Fya、s和Oka血型抗原的基因筛选.结果 成功应用定点诱变技术完成了s和Oka基因检测中等位基因对照品的制备,并建立了可同时检测Fya、s和Oka血型的多重PCR体系,438份随机献血者样本中共检出2例Fy（a-）样本,未检出s-和Ok（a-）样本.结论 基于PCR的基因定点诱变技术能够得到难以获得的血型基因检测等位基因对照品,用于验证基因分型方法.本实验建立的多重PCR体系是一种有效的进行Fya、s和Oka血型基因检测的方法.