Ro60/SSA基因转染HEp-2细胞作为间接免疫荧光检测底物及其应用

本研究拟改造间接免疫荧光技术(IIF)抗核抗体(ANA)检测法的底物HEp-2细胞,建立抗60kDRo60/SSA抗体免疫荧光检测法。采用PCR扩增人源Ro60 cDNA,克隆入真核表达载体pEGFP-C1,并转染HEp-2细胞。通过荧光显微镜、免疫印迹法(IBT)及IIF鉴定转染细胞(HEp-Ro60)中Ro60-绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的表达和抗原性。分别以HEp-Ro60以及HEp-2为底物的IIF检测10份抗Ro/SSA对流免疫电泳(CIE)检测阳性、其他抗体阴性血清以及对照血清。获得的转染细胞传十几代后仍具有较强的Ro60-GFP表达,融合蛋白保持Ro60的抗原性。IIF检测中HEp-Ro60的滴度比HEp-2增加了6.7倍(P<0.01),而且2例HEp-2细胞上IIF检测为阴性的血清在HEp-Ro60上为阳性。10例阳性血清中有8例出现了特征性荧光模式。结论是HEp-Ro60可用于IIF检测抗Ro抗体,并增加了ANA检出的敏感性。