转化生长因子-β2诱导的上皮间质转分化对人晶状体上皮细胞基因表型的影响

目的观察转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导人晶状体上皮细胞(LECs)发生上皮间质转分化(EMT)时,其形态和基因表型所发生的变化。方法在体外培养的人LECs中,加入100 pg/mL浓度的TGF-β2,诱导其发生EMT,处理0、6、24、48 h后,观察其在形态上的变化,利用实时定量反转录聚合酶链反应(qRTPCR)于各时间点检测其标志性基因E-钙粘蛋白(CDH1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(VIM)等在表达水平上所发生的变化,并与未处理的空白对照组进行比较。结果加入TGF-β2后,随着时间的推移,人LECs在形态上拉长,呈梭形;上皮细胞标志性基因如CDH1的表达水平逐渐下调,48 h时相对表达量为1.10E-06,和对照组2.68E-06相比差异有统计学意义(P=0.002);间质细胞标志性基因如VIM的表达水平逐渐上调,48 h时相对表达量为1.64E-02,和对照组1.37E-02相比差异有统计学意义(P=0.006);而α-SMA的表达水平也逐渐上升,48 h时相对表达量为9.21E-03,虽和对照组8.67E-03相比差异无统计学意义(P=0.551),但仍呈上升趋势。结论在TGF-β2诱导下,人LECs发生EMT,其形态和基因表型均发生与间质细胞相符的变化。

FGFR1特异性拮抗剂SU5402抑制人源晶状体上皮细胞增生的研究

目的本研究探讨体外应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)受体1(FGFR1)特异性拮抗剂SU5402抑制人源晶状体上皮细胞(LECs)增生的影响。方法光镜下观察传代培养的永生化人源LEC-B3细胞的形态,用αB-晶状体蛋白免疫组织化学法鉴定其性质。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测LEC-B3细胞中bFGF和FGFR1的mRNA表达。在传代培养、融合度为70%的LEC-B3细胞中加入SU5402(20μg/mL),以磷酸盐缓冲液(PBS)作为对照,2 d后用流式细胞术(FCM)检测LEC-B3细胞中细胞增生核抗原(PCNA)的表达。结果传代培养的LEC-B3细胞呈多边形上皮样生长,表达特异性的αB-晶状体蛋白;LEC-B3细胞中bFGF和FGFR1的mRNA表达量与内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)相当;LEC-B3细胞中PCNA阳性细胞的比例,SU5402实验组为(23.95±7.82)%,PBS对照组为(58.86±15.43)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论LEC-B3细胞丰富表达bFGF和FGFR1的mRNA;体外应用SU5402可显著抑制LEC-B3增生,有望成为防治后囊膜混浊(PCO)的有效方法。

慢病毒介导的TGFβ-R2 shRNA抑制人LECs细胞TGFβ-R2的表达

目的:观察转化生长因子β-R2特异性短发夹RNA(shRNA)对人晶状体上皮细胞TGFβ-R2表达的影响。方法:根据小干扰RNA(siRNA)的设计原则,针对转化生长因子β-受体2基因序列特征构建特异性shRNA(RNAi)载体,与TGFβ-R2过表达载体共转染293T细胞,经Western blot筛选出有效RNAi载体后,进行扩增、纯化、滴度测定,并转染培养的人LECs,qPCR检测TGFβ-R2siRNA慢病毒载体对TGFβ-R2 mRNA表达的影响。结果:经Western blot筛选,TGFβ-R2/GV1 15RNAi#1对目的基因的表达敲减效果最明显,慢病毒包装,滴度为8E+8TU/mL,感染人LECs细胞后,对TGFβ-R2基因有显著的敲减效果,达到78.1%(P<0.05)。结论:TGFβ-R2 RNAi载体构建成功,并且能抑制人晶状体上皮细胞TGFβ-R2 mRNA的表达。

个体化选择人工晶状体度数矫正超高度近视白内障超声乳化术后无晶状体眼临床观察

目的探讨超高度近视(≥-12.00 D)合并白内障患者在超声乳化吸除术后植入个体化选择度数的人工晶状体并观察其临床疗效。方法共58例(76只眼)合并超高度近视的白内障病例,术前根据患者年龄、阅读习惯、工作需要、近视程度、对侧眼的屈光状态、眼底病变程度等因素,个体化选择合适的人工晶状体度数。在完成超声乳化白内障吸除术后同期植入。术后观察患者最佳矫正视力、屈光度数和手术并发症。结果术后最佳矫正视力≥0.3者33只眼(43%),≥0.5者23只眼(30%)。脱盲率79%。术后屈光度数偏差值<±0.50 D者51只眼(67%);±0.50 D<术后屈光度数偏差值<±1.00 D者22只眼(29%),±1.00 D<术后屈光度数偏差值<±2.00D者3只眼(4%)。无后囊膜破裂、视网膜和脉络膜脱离等并发症发生。结论超高度近视白内障患者超声乳化术后,植入个体化选择度数合适的人工晶状体,能有效改善患者的视力,帮助患者有针对性的提高工作生活质量。

人工晶体术后影响视力的若干原因分析

随着人工晶体手术方法的不断改进和技术的提高，术后并发症的发生已较以前有明显的减少，大多数病人获得了良好的视力。然而，常见影响视力的因素仍存在，人工晶体表面色素和渗出物沉积，角膜内层水肿皱褶和瞳孔移位等，影响病人获得最佳视力。我们对我院１９９８年１月～...

眼内注气和黄斑后加压治疗黄斑裂孔视网膜脱离

眼内注气和黄斑后加压治疗黄斑裂孔视网膜脱离上海建工医院眼科（２０００８３）张抗美眼内注入５０％Ｃ３Ｆ９气体治疗黄斑裂孔视网膜脱离，因其简单易行，可反复应用，有较高的治愈率，又能保存较好视力而深被广大眼科医生接受。我院自１９８８年用此方法先后共收治了黄...

慢病毒介导miRNA-184体外转染对人晶状体上皮细胞上皮间质转分化的影响

目的 观察慢病毒介导miRNA-184体外转染对TGF-β2诱导人LEC发生上皮间质转分化（EMT）时其基因表型的影响.方法 实验研究.构建pL/IRES/GFP-miR-184质粒,经慢病毒介导体外转染由TGF-β2诱导而发生EMT的人LEC,利用QRT-PCR检测转染0、6、24 h后人LEC中相关基因E-钙黏蛋白（CDH1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（VIM）表达水平的变化,并与阴性对照慢病毒侵染组进行比较.采用单因素方差分析进行统计学分析.结果 成功构建pL/IRES/GFP-miR-184质粒,经慢病毒介导转染由TGF-β2诱导而发生EMT的人LEC 24 h后,上皮细胞标志性基因CDH1相对表达量保持相对不变,24 h时为6.30E-06,而对照组则下调,24 h时为1.37E-06,差异有统计学意义（F=261.78,P＜0.01）;间质细胞标志性基因α-SMA和VIM的相对表达量均保持相对不变,24 h时分别为1.55E-02和4.61E-04,而对照组则均上调,24 h时分别为2.09E-02和6.73E-04,差异有统计学意义（F=26.21,P=0.007;F=17.91,P=0.013）.结论 miRNA-184经慢病毒介导转染人LEC后,能抑制其由TGF-β2诱导所发生的EMT相关的基因表型变化。

氪黄激光治疗糖尿病性视网膜病变黄斑水肿

目的 :评价氪黄激光治疗糖尿病性视网膜病变黄斑水肿的临床疗效。方法 :用氪黄激光治疗糖尿病性视网膜病变黄斑水肿共 34例 (48眼 ) ,氪黄激光波长 5 6 8nm,对黄斑区局部水肿采用局部光凝 ,弥漫性水肿采用 C形格栅状光凝 ,光凝距黄斑中心小凹 30 0 μm,避开视盘黄斑束 ,功率 6 0～ 2 0 0 m w,光斑直径 10 0 μm,曝光时间 0 .1s,光凝 6 8～ 189点 ,光斑反应 — 级。术后平均随访 10个月。结果 :术后视力提高者 33眼 (6 8.8% ) ,不变者 13眼 (2 7.1% ) ,下降者 2眼 (4.2 % )。光凝后黄斑水肿完全消退者 15眼 (31.3% ) ,部分消退者 2 8眼 (5 8.3% ) ,不变者 5眼 (10 .4% )。无明显并发症。结论 :氪黄激光治疗糖尿病性视网膜病变黄斑水肿安全。

中期保存角膜远程投送包装系统温度控制的实验研究

目的 探讨应用于角膜中期保存的安全性及远程投送的可行性.方法 常温下,将冰点为4℃冰盒与盛有4℃中期保存液的保存瓶,一同置于保温箱内,并用海绵固定.按照保存介质（中期保存液）体积分组,采用双通道温度记录仪,记录不同组别的瓶内瓶外温度变化曲线,观察该包装能否满足中期保存〉0℃,≤4℃的温度要求,及该温度范围的维持时间,并在各分组间进行两两比较分析.模拟远程运输前后观察角膜植片在包装系统中的固定情况.结果 常温下,保存介质在一定体积范围内,该远程投送系统可维持〉0℃,≤4℃达20h,温度无剧烈波动,明显长于普通冰桶相关指标,差异有显著性.模拟远程投送前后角膜植片在本包装系统运输保存瓶中的固定情况良好.结论 常温条件下,该包装系统能有效控制温度满足中期保存角膜的温度要求和国内国际大部分地区投送的时间要求;并且此系统具有防震及保持植片固定特点,应用于中期保存角膜安全可靠,进行远程投送具有可行性.

Lumican及其在晶状体上皮细胞的上皮间质转分化中的作用

Lumican是在全身多种组织中广泛表达的一种蛋白质，在细胞增殖迁移分化及组织修复中起着重要作用。Lumican在晶状体上皮细胞（LECs）发生上皮间质转分化（EMT）中大量表达，并具有时间依赖性，有可能对该过程起着关键的调控作用。如果Lumican缺失，则LECs的上皮间质转分化受到明显抑制，从而对抑制后发性白内障的发生具有重要的意义。因此如何调控Lumican的表达已成为研究的热点，例如通过抑制转化生长因子p2的途径下调Lumican表达已被证实是调控的途径之一。但目前有关Lumican调控的研究大多集中于肿瘤和角膜，在LECs上皮间质转分化的调控作用靶点及如何量化还需要进一步研究。