组织玻璃化冻存技术:优势与尚未完全解决的问题

背景:玻璃化冷冻保存是一种应用前途广阔的低温冷冻方法,通过使用高浓度的玻璃化冻存试剂将生物材料进行玻璃态转变,从而实现活性保存。目的:就玻璃化冻存的生物学原理及玻璃化冻存试剂的分类,卵巢、皮肤与角膜等医学组织标本的玻璃化冻存进行综述。方法:以“tissue;vitrification;cryopreservation”为英文检索词;“组织;玻璃化;冷冻保存”为中文检索词,检索1994年1月至2019年10月PubMed数据库及万方医学网相关文献。按照纳入与排除标准筛选后,对最终纳入的45篇文献进行归纳总结。结果与结论:玻璃化冻存可以防止细胞内外冰晶形成,避免了冰晶给细胞带来的多种损伤,有效保留了细胞的生物活性与基本功能。玻璃化冻存试剂主要分为渗透性和非渗透性2种,其操作简便、高效,唯一的缺点是高浓度的冻存试剂对细胞具有一定的毒性损伤。为了降低对组织整体损伤风险,可以混合使用多种低毒冻存试剂。目前玻璃化冻存技术已经成功应用于多种细胞,但组织冻存的技术难题尚未完全解决。

慢性肝病常用动物模型及建模方案

目的构建稳定可重复的慢性肝损伤动物模型。方法通过改良高脂饲料、四氯化碳(CCL 4)、硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)分别建立小鼠非酒精性脂肪性肝炎模型(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)、小鼠肝纤维化模型、大鼠肝硬化模型。苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)、油红O、天狼星红(sirius red,SR)染色观察动物肝组织结构变化、脂肪样变以及纤维化程度。自动生化仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyltransferase,GGT)、甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(glycyl proline dipeptidyl aminopeptidase,GPDA)、白蛋白(albumin,Alb)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)。结果改良高脂喂养(64只)与普通饲料喂养的小鼠(8只)相比,ALT为(268.7±69.8)比(35.0±21.9)U/L、AST为(215.0±91.0)比(34.4±9.4)U/L、LDH为(560.3±158.5)比(240.6±101.3)U/L,均明显升高(P<0.05),TC为(1.5±0.3)比(2.2±0.2)mmol/L、TG为(0.9±0.1)比(1.6±0.2)mmol/L,均明显降低(P<0.05)。病理结果显示,改良高脂喂养的小鼠其肝组织内有大量脂滴。注射10%CCL 4(52只)与注射橄榄油(8只)的小鼠相比,ALT为(8507.3±1083.1)比(41.8±29.2)U/L、AST为(4911.2±644.0)比(104.0±33.6)U/L,均明显升高(P<0.05),病理结果显示,注射CCL 4的小鼠其肝组织内有大量纤维化胶原增生。注射TAA(37只)与注射0.9%NaCl(8只)的大鼠相比,ALT为(197.3±131.1)比(34.0±6.0)U/L、AST为(590.3±457.7)比(57.5±12.3)U/L、GGT为(10.0±8.4)比(3.6±3.3)U/L、GPDA为(290.5±134.4)比(63.3±14.7)U/L,均明显升高(P<0.05),Alb为(37.3±1.9)比(40.9±1.3)g/L,明显降低(P<0.05),病理学结果显示,注射TAA的大鼠肝组织内纤维化增生且连接成大小不等的假小叶。结论采用改良高脂连续喂养2周,小鼠NASH成模率可达100%,继续喂养至4周,进一步加重。采用10%CCL 4注射12周,小鼠肝纤维化成模率可达100%,停药后模型至少可维持2周。采用TAA注射16周,大鼠肝硬化成模率可达100%,停药后模型至少可维持4周。