高效裂解多重耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体分离及裂解酶的制备

为探索应用于治疗奶牛乳腺炎的噬菌体及裂解酶,从上海某奶牛场污水样品中分离、纯化金黄色葡萄球菌的裂解性噬菌体,分析其生物学特性。采用双层琼脂平板法分离、纯化噬菌体,观察噬菌斑特征;通过电镜观察噬菌体形态特征;测定其裂菌谱、最佳感染复数、一步生长曲线等生物学特性,并原核表达相关的裂解酶。结果显示:本研究分离、纯化得到一株噬菌体,命名为vB_SauM_YNP1(YNP1);透射电镜观察YNP1的头部呈二十面体结构,具有收缩性尾部,尾部的末端具有清晰的尾丝以及暴露出的尾管,属于肌尾噬菌体科;该噬菌体的潜伏期为10 min,暴发期为50 min,裂解量为71;最佳感染复数为1,能够高效裂解引起奶牛乳腺炎的MRSA菌株,可形成圆形、透明、边缘整齐的噬菌斑,效价为10~9 PFU/mL;基因组测序和比对结果表明,YNP1全基因组全长约为143.5 kb,(G+C)%含量为30.80%;YNP1的基因组中具有编码细菌细胞壁水解酶(裂解酶)的基因,通过原核表达,得到该裂解酶,命名为LysYNP1,平板裂解实验证实该裂解酶能够高效杀死奶牛乳腺炎耐药菌株。结果表明,噬菌体及裂解酶的高效裂菌特性使其在临床治疗奶牛乳腺炎方面具有广阔的应用前景。

猪Delta冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒多重PCR检测方法的建立和应用

旨在建立快速准确检测与猪腹泻相关的猪Delta冠状病毒(PDCoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PRoV)多重PCR检测方法。针对PDCoV、PEDV、TGEV、PRoV的基因组序列设计了4对特异性引物,分别扩增PDCoV N基因(447 bp)、PEDV M基因(204 bp)、TGEV M基因(612 bp)、PRoV VP6基因(329 bp),经过对反应条件的优化,成功建立了能同时特异性检测PDCoV、PEDV、TGEV、PRoV的多重RT-PCR,且特异性好。应用该检测方法对上海及周边地区养殖场临床猪腹泻病料进行检测,结果检出PEDV阳性样品16份,其中PEDV和TGEV混合感染1份,PDCoV和PRoV均未检出,与单一RT-PCR检测结果完全吻合。该快速检测方法的成功建立,将有助于提高对PDCoV、PEDV、TGEV、PRoV的病原学调查和疾病监测,为生态养殖提供技术储备。