民营企业人力资源激励的研究

人力资源是现代企业的战略性资源,也是企业发展的最关键因素,而激励作为开发和管理人力资源的一个重要方法,已被越来越多的企业重视。明确民营企业在人力资源激励中存在的问题,并综合运用多种激励机制,建立起适应民营企业特色和员工需求的激励体系,把经济利益激励、员工发展激励和员工参与激励等多种方式有机结合,有助于提高人员效率,促进企业又好又快发展。

大肠杆菌酸性磷酸酶基因克隆表达及应用

将大肠杆菌K-12的酸性磷酸酶(AphA)完整基因和去信号肽基因分别克隆到pET-28a(+)载体上,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中。经诱导检测,重组菌均能表达出高活性的可溶性酶蛋白,去信号肽表达更稳定。对重组菌的活性研究表明,相对于野生菌,重组菌酶活力得到大幅度提高,同时,以pNPP、肌苷为底物进行磷酸转移催化反应,在pH4.0-6.0、反应温度37℃条件下,约有30%的肌苷可转化为IMP,但随着反应的进行所形成的IMP又被该酶降解,向反应液中加入EDTA即可明显抑制酶的水解活性,减缓IMP的降解速率。

大肠杆菌L-阿拉伯糖异构酶的克隆表达及D-塔格糖的制备

将大肠杆菌K-12中的L-阿拉伯糖异构酶基因araA克隆到载体pET-28a上,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中表达。通过SDS-PAGE分析发现,重组菌株能表达出大量可溶性酶蛋白。以重悬菌液为酶源、D-半乳糖为底物,对酶转化D-塔格糖的条件进行测定。结果表明:D-塔格糖的最佳转化温度为60℃。在pH7～9的范围中,D-塔格糖的转化率均能达到30%～40%。加入Mn2+、Ca2+、Co2+和Mg2+均能够使D-塔格糖的转化率提高,EDTA处理后的酶明显不具备催化能力,加入Mn2+后能使酶液恢复催化能力,但并不随着Mn2+浓度的提高而增大。

联合β-半乳糖苷酶和L-阿拉伯糖异构酶酶法合成D-塔格糖的研究

将大肠杆菌K-12中的β-半乳糖苷酶基因lacZ和L-阿拉伯糖异构酶基因araA以串联方式克隆到载体pET-28a(+)上,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。通过SDS-PAGE分析发现,重组菌株能表达出大量可溶性β-半乳糖苷酶蛋白和L-阿拉伯糖异构酶蛋白。以重悬菌液为酶源,可将乳糖降解为D-半乳糖,并将D-半乳糖转化为D-塔格糖。在温度为50℃,pH 7.0的缓冲液中,经一段时间反应后,D-塔格糖的转化率可达21%以上。加入Mn^(2+)、Co^(2+)和Fe^(2+)均能够使D-塔格糖的转化率提高。

阿拉伯糖异构酶的重组表达及性质研究

将来自大肠杆菌K-12的L-阿拉伯糖异构酶基因araA定向插入表达载体pET-32a(+)并转入大肠杆菌BL21(DE3)中。经PCR、双酶切鉴定和序列分析,证实重组质粒pET32a-araA构建成功。重组菌经isopropylthio-β-D-galactoside(IPTG)诱导表达目的蛋白,主要以可溶形式存在。以重悬菌液为酶源,D-半乳糖为底物,在温度60℃、pH7.6时酶活最大,加入1 mmol/L Mn2+可使活力提高50%以上。

乙酰短杆菌中核苷磷酸化酶的性质研究

以乙酰短杆菌完整细胞为酶源,研究不同条件下核苷磷酸化酶的性质。方法:将乙酰短杆菌湿菌体置于不同保藏温度及在不同种类缓冲溶液中考察其稳定性;在有或无核保护下核苷磷酸化酶对热的稳定性;并设计核苷的磷酸解反应或合成反应,测定核苷磷酸化酶的活力及酶促反应的表观米氏常数。结果:乙酰短杆菌中的核苷磷酸化酶经低温保藏可以保持较长时间的稳定性;菌体在60℃处理1小时即失去核苷磷酸化酶的活力,但是添加胸腺嘧啶有明显的保护作用;菌体中核苷磷酸化酶的合成能力明显大于磷酸解能力;对尿苷和5-甲基尿苷的表观米氏常数和最大反应速率分别为16.7、11.4 mmol/L,0.0063、0.0041 mmol/L.min。结论:含核苷磷酸化酶的乙酰短杆菌完整细胞作为酶源,在低温下可以长时间保藏,反应中的碱基对核苷磷酸化酶的抗热性有益,该菌种可以作为工业上核苷磷酸化酶的来源。