薄层扫描法测定银杏叶浸膏中白果内酯的含量

目的 :采用薄层扫描法测定银杏叶浸膏中白果内酯的含量 ,并进行了方法学研究。方法 :色谱条件为 :Kieselgel 60GF2 5 4 ;乙酸乙酯 甲苯 丙酮 正己烷 ( 4∶3∶2∶1) ;检测波长为 2 70nm。结果 :平均回收率 99.83 % ,RSD =1.78%。结论 :此方法简便、灵敏、准确、重复性好 。

顶空气相色谱法测定海可素Ⅱ中残留溶剂的含量

目的 建立测定人工麝香原料之一海可素Ⅰ中甲醇、乙醇有机溶剂含量的顶空气相色谱法.方法 采用顶空气相色谱法,氢火焰离子化检测器,以二甲基亚砜为溶媒,丙酮为内标,顶空预热温度为90℃,预热时间为15 min,进样口温度为180℃,检测器温度为250℃,以氮气为载气,使用HP-5交联毛细管柱（30m×0.53 mm,5μm）,采用程序升温,实现各组分的基线分离.结果 甲醇、乙醇在各自对应的浓度范围内,线性关系良好;最小检测限分别为0.8、1.0μg/ml;加样回收率、精密度良好.结论 经方法学考察,该方法灵敏、准确、可靠,适用于海可素Ⅰ中残留有机溶剂的测定.

抗肿瘤新药托泊替康

托泊替康(Topotecan,英文商品名为Hycamtin,中文商品名为和美新)是Smithkline Beecham制药公司于1996年在美国上市的半合成抗肿瘤新药,也是世界上第一个作用于拓扑异构酶Ⅰ的抗肿瘤药物.托泊替康是半合成的喜树碱类化合物,化学名为9-二甲氨基喜树碱,分子式为C23H23N3O5·HCL,分子量为457.9.它是在羟基喜树碱化学结构A环的第9个位置上引进了一个稳定的碱基侧链,并在手性碳20的位置上保留了S构象,引入的碱基侧链增加了该化合物的水溶性,减少了E环上具有生物活性的内酯水解,与其它喜树碱类药物相比,具有更强的抗肿瘤活性,而毒副反应较少[1].

银杏酮酯抗H_2O_2诱导衰老海马神经元氧化DNA损伤的作用研究

目的：探讨银杏酮酯（Ginkgo biloba extract,GBE50）抗过氧化氢（H2O2）诱导大鼠衰老海马神经元氧化DNA损伤的作用及人类长寿基因（Silent information regulator 1,SIRT1）在其中的作用机制。方法：培养、鉴定大鼠原代海马神经元。将细胞随机分为4组,正常对照组,H2O2模型组,银杏酮酯组和阳性对照银杏叶提取物（EGB761）组。正常对照组用培养基24小时,模型组用H2O2（200μM）诱导18小时建立细胞衰老样模型,后两组分别用200μg/ml的银杏酮酯和银杏叶提取物预处理6小时后再加入H2O2诱导18小时。细胞免疫荧光方法观察各组神经元中8-羟基脱氧鸟苷（8-OHd G）和SIRT1的表达强度;免疫印迹方法检测SIRTl、p53和p21的蛋白水平。结果：光镜下观察培养6~7天时海马神经元逐渐成熟,免疫荧光鉴定神经元纯度达到90%以上。细胞免疫荧光结果显示：与正常对照组相比,H2O2诱导的大鼠原代衰老海马神经元中8-OHDG表达增加（P〈0.01）,SIRT1的表达降低（P〈0.01）。200μg/ml银杏酮酯和阳性对照银杏叶提取物预处理后8-OHDG表达减少（P〈0.05）,SIRT1的表达增加（P〈0.05）。免疫印迹结果显示：与正常对照组相比,H2O2诱导的大鼠原代衰老海马神经元中SIRTl蛋白表达下降,p21蛋白表达增加（P﹤0.05）;200μg/ml银杏酮酯和阳性对照银杏叶提取物预处理后H2O2诱导的海马神经元SIRTl蛋白表达增加（P〈0.05）,p21蛋白表达下降（P〈0.05）;而p53蛋白变化不明显（P﹥0.05）。结论：200μg/ml的银杏酮酯可降低H2O2诱导的大鼠原代衰老海马神经元内8-OHDG表达,其机制可能与SIRT1、p21蛋白表达有关。

银杏酮酯对自然衰老大鼠学习记忆及海马、前额叶皮层c-fos、Caspase-3和Caspase-8表达的影响

目的:探讨银杏酮酯(Ginkgo biloba extract,GBE50)对自然衰老大鼠学习记忆及海马、前额叶皮层c-fos、Caspase-3和Caspase-8表达的影响。方法:21月龄大鼠随机分为模型组、银杏酮酯组和阳性药银杏叶提取物组,1月龄大鼠作为正常组。其中正常组和模型组用1%羧甲基纤维素钠灌胃,银杏酮酯组和银杏叶提取物组分别予100 mg/kg的药物灌胃60天。新物体识别实验检测学习记忆,免疫组织化学方法检测海马CA1区和前额叶皮层c-fos和Caspase-8的蛋白水平,免疫印迹方法检测海马和前额叶皮层Caspase-3蛋白表达。结果:新物体识别实验结果显示:与模型组相比,100mg/kg银杏酮酯和银杏叶提取物可使大鼠的分辨指数和优先指数明显升高。免疫组织化学结果显示:与模型组相比,100mg/kg银杏酮酯和银杏叶提取物可使海马CA1区和前额叶皮层cfos表达增加,Caspase-8表达降低。免疫印迹结果显示:与模型组相比,100mg/kg银杏酮酯和银杏叶提取物组可使海马和前额叶皮层Caspase-3蛋白表达下降。结论:100mg/kg的银杏酮酯可以改善自然衰老大鼠学习记忆缺陷,这种改善可能与上调自然衰老大鼠海马和前额叶皮层c-fos表达,降低Caspase-3和Caspase-8蛋白水平有关。

Beclin1基因慢病毒载体的鉴定包装及其在银杏酮酯保护衰老海马神经元中的作用

目的:探讨自噬相关基因Beclin1在银杏酮酯保护衰老海马神经元中的作用。方法:使用酶切和DNA测序方法对已构建好的p LVX-shRNA2-Beclin1慢病毒载体进行鉴定,并与辅助包装质粒载体共同转入293T细胞得到病毒颗粒。将病毒颗粒转染原代大鼠海马神经元。培养原代大鼠海马神经元并随机分为6组:正常组、模型组、银杏酮酯组、银杏酮酯干扰组、阳性对照银杏叶提取物组和银杏叶提取物干扰组。正常组用正常培养基培养,模型组用H2O2(200μM)诱导18小时建立衰老样细胞模型;银杏酮酯和银杏叶提取物组分别用200μg/ml的药物预处理6小时后再加入H2O2诱导18小时;其余两组在银杏酮酯和银杏叶提取物组基础上分别加入慢病毒载体颗粒。通过荧光定量PCR和免疫印迹方法检测Beclin 1、LC3-Ⅱ和SyntheinⅠ表达。结果:酶切和DNA测序结果表明重组慢病毒载体p LVX-shRNA2-Beclin1的插入序列正确。用293T细胞包装的重组慢病毒能够感染原代大鼠海马神经元。体外荧光定量PCR结果显示:慢病毒颗粒转染衰老海马神经元后,200μg/ml银杏酮酯和银杏叶提取物干扰组Beclin1 mRNA水平降低。免疫印迹结果显示:与模型组相比,200μg/ml银杏酮酯和银杏叶提取物组Beclin1、LC3-Ⅱ和Synpain I蛋白表达均增加;慢病毒颗粒转染后,200μg/ml银杏酮酯和银杏叶提取物干扰组神经元Beclin1、LC3-Ⅱ和Synpain I蛋白表达明显降低。结论:Beclin1与银杏酮酯(200μg/ml)保护衰老海马神经元有关。

Beclin1在银杏酮酯改善衰老大鼠学习记忆中的作用

目的:观察自噬相关基因Beclin1在银杏酮酯(Ginkgo biloba extract,GBE50)改善衰老大鼠学习记忆中的作用。方法:采用出生24 h内乳鼠的海马组织,提取海马神经元,H2O2建立神经元衰老模型,免疫荧光方法鉴定神经元纯度,并用GBE50和阳性对照药银杏叶提取物(EGB761)预处理,免疫印迹方法检测Beclin1蛋白水平。21月龄大鼠随机分为模型组、GBE50组和EGB761组,1月龄大鼠作为正常组,其中正常组和模型组用1%羧甲基纤维素钠灌胃,GBE50组和EGB761组分别每日予100 mg/kg的药物灌胃。疗程60 d,结束后避暗实验检测大鼠学习记忆,Real-time PCR方法检测海马Beclin1 mRNA表达,Western blot方法检测海马Beclin1、LC3-Ⅱ和SynapsinⅠ蛋白表达。结果:(1)细胞实验结果显示,光镜下观察培养6~7 d时海马神经元逐渐成熟,免疫荧光鉴定神经元纯度达到90%以上;GBE50组和EGB761组的衰老海马神经元中Beclin1蛋白表达明显增加(P<0.05)。(2)动物实验结果显示,GBE50组和EGB761组大鼠避暗实验潜伏期明显较模型组延长,海马Beclin1mRNA和蛋白表达及LC3-Ⅱ和SynapsinⅠ蛋白表达均明显高于模型组(P<0.05)。结论:GBE50改善衰老相关学习记忆的作用,可能与其上调海马Beclin1表达有关。