质量主管在检验科质量管理中的作用

随着循征医学的发展，临床标本检测的质量以及它在临床诊断中的所起的作用越来越重要。然而病人标本不同于其他标本，在一般情况下病人标本只随机或晨间采集一次。检验科通过这一次采样及对它的一次检测，就要求让检测结果能达到体内的真值，这种要求科学性较差。我们只能通过努力，采用各种质量控制的方法争取检测结果尽可能接近真值，尽可能客观地反映体内情况。

医院感染的病原菌特点及耐药性分析

目的了解医院感染的病原菌分布及其对抗菌药物的耐药率,为指导临床合理使用抗菌药物提供依据。方法采用Microscan Walkaway 40SI细菌鉴定系统及体外药物敏感性试验对47 469例各类标本进行病原菌分离及药物敏感性试验。结果 47 469例标本中共分离出病原菌7 445株。革兰阴性菌检出率为81.87%,主要为大肠埃希菌(23.36%)、肺炎克雷伯菌(16.70%)、铜绿假单胞菌(8.77%)、鲍曼不动杆菌(7.64%);革兰阳性菌检出率为18.13%,主要为金黄色葡萄球菌(8.62%)、粪肠球菌(3.99%)和屎肠球菌(2.15%)。医院感染的病原菌具有较强的耐药性,不同种类病原菌其耐药谱各不相同。结论及时了解和掌握病原菌的分布和耐药性的变化趋势,指导临床合理选择抗菌药物,有效防止和减少不合理使用抗菌药物或用错抗菌药物的现象,减少医院感染的发生。

包涵体蛋白纯化方法的探讨

目的:探讨包涵体蛋白的表达条件及纯化方法。方法:将PQE30-Cystatin转化大肠杆菌M15,通过IPTG诱导蛋白表达。为了能够获得可溶的且有活性的Cystatin C(Cys C),本文摸索了Cys C包涵体的复性条件及蛋白表达条件。结果:改变缓冲体系pH值及离子强度等多种方法均不能减少蛋白在复性过程中的沉淀;同时,改变蛋白表达的OD600、培养基pH值、表达时间等均未得到可溶性的表达蛋白;而改变诱导蛋白表达所用的IPTG浓度后发现在低浓度(0.005mM)的IPTG诱导条件下,该蛋白有少量的表达,但是表达量明显低于1mM IPTG的诱导条件。结论:对于包涵体蛋白进行方法摸索的过程中,既要对包涵体蛋白本身进行研究,更要对蛋白表达条件进行进一步的优化,以表达可溶的蛋白。

Cys C单克隆、多克隆抗体的制备及临床应用

目的:制备鼠抗人Cystatin C(Cys C)的单克隆抗体和兔抗人Cys C的多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:将PQE30-Cys C转化大肠杆菌BL-21,通过IPTG诱导蛋白表达,Ni-NTA agarose亲和层析纯化Cys C蛋白。通过免疫小鼠和大白兔,制备鼠抗人Cys C的单克隆抗体和兔抗人Cys C的多克隆抗体。结果:通过构建含Cys C的原核细胞表达质粒,表达及纯化了Cys C重组蛋白,建立了产生抗Cys C单克隆抗体的杂交瘤细胞株,及制备了兔抗人Cys C的多克隆抗体,末次抗血清效价为1:1000000,经过ELISA证实用CysC免疫的大白兔所制备的抗血清可与Cys C发生特异性的免疫反应。结论:本文成功制备鼠抗人Cys C的单克隆抗体和兔抗人Cys C的多克隆抗体,建立了ELISA检测Cys C,为用于临床奠定了基础。

锌指蛋白KOX12单克隆抗体的制备及在肿瘤组织中的表达

目的:制备重组锌指蛋白KOX12(肿瘤相关蛋白),并制备其特异性的单克隆抗体,用免疫组化观察它在肿瘤组织中的表达。方法:通过逆转录-酶链聚合反应(RT-PCR)得到KOX12 cDNA片段,构建真核表达质粒和原核表达质粒,在大肠杆菌M15和293T细胞中进行表达。以KOX12蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,用聚乙二醇(PEG)融合法进行细胞融合制备产生抗KOX12单克隆抗体的杂交瘤细胞株;该抗体用免疫组化法对结肠癌、肺癌组织进行染色。结果:构建了含KOX12的真核细胞和原核细胞的表达质粒,并表达及纯化了KOX12重组蛋白,建立了产生抗KOX12单克隆抗体的杂交瘤细胞株6C8,酶联免疫吸附试验(ELISA)和蛋白质免疫印迹试验(Western blot)显示6C8对KOX12有高度的特异性,免疫组化染色结果提示在结肠癌组织和肺癌组织切片中有少数细胞呈阳性反应。结论:6C8单克隆抗体是锌指蛋白KOX12特异的单克隆抗体,该抗体为IgG1型、k链亚类免疫球蛋白。在肺癌组织及对肠癌组织中有阳性细胞可见。该文为KOX12蛋白的研究工作创造了一个平台,为肿瘤的防治提供了一条新的可能途径。

高三酰甘油患者小而密低密度脂蛋白胆固醇的检测及临床意义

低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）在动脉粥样硬化形成过程中发挥了重要作用。LDL-C具有明显的异质性,Austin等将其分为2种亚型,其中颗粒较大,密度接近1.02 g/mL的为A型;另一种颗粒较小,密度接近1.06 g/mL,为B型,即小而密低密度脂蛋白胆固醇（sdLDL-C）;而介于两者间的亚组份则称为中间密度低密度脂蛋白。