血清中维生素D活性代谢物的LC-MS/MS定量方法研究

目的1α,25-二羟基维生素D_(3)是维生素D的活性代谢产物。但该物质在人血清中的含量非常低,常规的检测方法无法准确定量。建立并验证一种准确、选择性高、快速定量1α,25-二羟基维生素D3的液质联用方法,对满足临床研究、临床诊断的需求非常有帮助。方法因该分析物为内源性物质,方法中采用自配并经过验证的替代基质配制标准曲线和质控品。人血清样品经过液液萃取纯化,用衍生化试剂消除内源性干扰,再进行衍生化反应以提高灵敏度。采用反相柱分离,质谱电喷雾电离源正离子模式采集,离子对为574.3→314.3和577.4→317.2的多反应监测(MRM)模式,监测1α,25-二羟基维生素D3和内标。在15~1000 pg/mL范围内线性良好,最低定量限(LLOQ)为15 pg/mL。结果经过方法学验证,分析物的精密度和准确度(日内及日间)偏差均满足±20%以内的要求。血清样品稳定性实验结果良好,满足评判标准。结论该方法准确、稳定,具有耐用性及灵敏度高等优点,适用于临床样品的分析。