利用假病毒法检测重组人乳头瘤病毒双价(16/18型)疫苗的免疫原性

目的建立并验证重组人乳头瘤病毒双价(16/18型)疫苗中和滴度的检测方法 ,并且利用此假病毒法进行免疫原性研究。方法建立并优化以ZsGreen假病毒为基础的中和实验(ZsGreen法)测定血清中和滴度,比较荧光显微镜观察与微流式细胞分析法、流式细胞分析法的差异,并对专属性、精密度、耐用性、假病毒稳定性和不同细胞代次的影响进行了方法学验证。结果ZsGreen法的HPV16/18假病毒最佳接种量为1 600 TCID50,HPV16型与HPV18型无交叉,具有良好的专属性和精密度,采用不同细胞代次与不同批次假病毒进行检测,均能获得较好的重复性。结论 ZsGreen法假病毒中和滴度检测法准确可靠、重复性好,经方法学验证后此法适用于疫苗的免疫原性研究。

THP-1分化巨噬细胞用于检测细胞免疫的体外方法的建立

目的建立THP-1分化巨噬细胞用于检测细胞免疫的体外方法。方法将HPV治疗性疫苗原液参考品及样品用含佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)的RPMI1640培养基稀释后,加入THP-1细胞,设PMA对照(只加PMA),37℃,5%CO2培养箱孵育,取上清,检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量,测定样品体外相对效力。按上述方法对细胞密度(2.0×105、5.0×105、10.0×105个/ml)、PMA终浓度(2.8、8.3、25、75、225 ng/ml)和培养时间(2、3、4 d)进行优化,确定最佳检测条件。用HPV预防性疫苗原液及ELISPOT法验证该方法的有效性。结果优化的最佳检测条件为:细胞密度5.0×105个/ml,PMA终浓度25 ng/ml,培养时间3 d。验证结果表明该方法有效可行。结论建立了THP-1分化巨噬细胞用于检测细胞免疫的体外方法,为检测治疗性疫苗的细胞免疫提供了一个体外检测平台。