高效液相色谱-三重四极杆复合线性离子阱质谱法检测水产品中氟喹诺酮类抗生素和镇静剂

为实现水产品中抗生素和镇静剂的同时、快速检测,进行了题示研究。分取2.0 g匀浆后的样品的肌肉组织,加入体积比79∶1∶20的乙腈-乙酸-水混合溶液10 mL,振荡1 min,超声10 min。加入2.0 g氯化钠,振荡1 min,于-20℃保存30 min,用于去除提取液中的脂肪。离心10 min,分取1 mL上清液注入装载有150 mg C18的CAFS clean-up净化柱中,多次推动活塞,将提取液全部转移到2 mL离心管中。分取0.5 mL净化液,加入0.5 mL 0.1%(体积分数,下同)甲酸溶液,混匀后过0.22μm尼龙滤膜。滤液注入高效液相色谱-三重四极杆复合线性离子阱质谱仪,9种目标物在BEH C18色谱柱上用不同体积比的0.1%甲酸溶液和含0.1%甲酸的甲醇溶液的混合溶液进行梯度洗脱分离后,用电喷雾离子源正离子(ESI+)模式电离,多反应监测(MRM)模式检测,基质匹配法定量。结果显示,9种目标物的质量分数分别在1.0~50.0μg·kg^(-1)(丁卡因、布比卡因、恩诺沙星和氧氟沙星)、2.0~50.0μg·kg^(-1)(地西泮和氟罗沙星)、5.0~50.0μg·kg^(-1)(环丙沙星、培氟沙星和洛美沙星)内与对应的峰面积呈线性关系,检出限为0.2~1.0μg·kg^(-1);对空白草鱼样品进行3个浓度水平的加标回收试验,回收率为99.1%~110%,测定值的相对标准偏差(n=6)分别为1.9%~8.2%(日内精密度试验)和2.6%~8.5%(日间精密度试验)。方法用于28份水产品的分析,检出了1种镇静剂布比卡因(检出量为1.41μg·kg^(-1))以及4种氟喹诺酮类抗生素[洛美沙星、培氟沙星、环丙沙星(3种抗生素检出量均低于测定下限)和恩诺沙星(检出量为2.43~4.61μg·kg^(-1),低于GB 31650-2019规定的限量)]。

苦草对水体氮磷吸收与释放作用的探析

以沉水植物苦草[Vallisneria natans (Lour.) Hara]为对象,参考白洋淀水体营养盐水平现状,通过室内试验,研究苦草在不同浓度氮(0~2.0 mg/L)的影响下对氮磷的吸收及释放;并通过人工干预迫使苦草进入非健康状态探究苦草根、叶与整体分别对水体氮磷的释放与吸收作用。

基于转录组测序对翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)2种肌球蛋白重链基因的克隆与分析

肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MYH)是骨骼肌粗肌丝的重要组成单位,其表达量高低影响肌纤维的组成和肌肉生长。为了解其在翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)早期生长过程中的作用,本研究从前期生长差异显著的2组(快长组和慢长组)翘嘴鳜幼鱼转录组差异表达Unigene中筛选出2个MYH基因,RACE(Rapid amplification of c DNA ends)克隆到其全长c DNA(MYH-7a,MYH-7b)。MYH-7a全长为6071 bp,开放阅读框为5820 bp;MYH-7b全长为5896 bp,开放阅读框为5745 bp。序列分析显示,2个MYH均有Loop1、Loop2环、ATP结合位点等关键结构域;进化树聚类分析显示,MYH-7a与MYH-7b均属于慢肌球蛋白。实时荧光定量PCR验证发现,其在快长组样本中表达量显著高于慢长组,与转录组测序结果一致;检测其在翘嘴鳜心肌、红白肌和皮肤等14种组织的表达水平,结果显示,MYH-7a主要在心肌中表达,而MYH-7b主要在红肌中表达;在胚胎发育不同阶段,二者随着胚胎发育的进行,表达量不断增加;在幼鱼早期生长过程(孵化出膜后15 dph、30 dph和60 dph)的翘嘴鳜白肌中,在15 dph和30 dph快长组的表达量显著高于慢长组,而到60 dph时快长组的表达量均显著低于慢长组。翘嘴鳜MYH-7a、MYH-7b在快长组与慢长组鱼中的差异表达提示它们在翘嘴鳜胚胎及其早期生长发育过程中发挥重要作用。

镜鲤体长性状的QTL定位分析

以镜鲤良种后代为祖父母本所培育的杂交F2群体的68个个体为材料,利用553个分子标记（217个SSR和336个SNP标记）对其进行基因型检测,运用JoinMap4.0软件包对遗传连锁图谱进行构建。利用MapQTL5.0区间作图法（Interval mapping）进行QTL检测,通过置换实验（1 000次重复）确定连锁群显著性水平阈值。在对体长的区间定位中共检测到12个与体长性状相关的QTLs区间,分布在BL-1-1（SNP0137-SNP1481）、BL-4-1（SNP0092-HLJ797）、BL-5-1（SNP1268-HLJ423）、BL-7-1（HLJ870-SNP0702）、BL-12-1（SNP0922-HLJ639）、BL-16-1（HLJE351-SNP0674）、BL-25-1（SNP0394-SNP0862）、BL-35-1（HLJ668-SNP0832）、BL-43-1（SNP0389-SNP1425）、BL-47-1（HLJ057-HLJ1113）、BL-47-2（HLJ1439-HLJ1418）等11个连锁群上,解释表型变异范围是13.8%~64.9%,其中贡献率大于20%的主效QTLs有8个,是体长性状的主效QTLs区间。

长江口凤鲚繁殖群体的年龄结构和生长特性

2014年4~8月于凤鲚(Coilia mystus)繁殖盛期在长江口逐月采样,对凤鲚繁殖群体的雌性个体的年龄结构和生长特性进行了研究。年龄结构为1~3龄,共3个年龄组,其中1~2龄个体占87.06%。繁殖群体的平均体长和体质量分别为(151.66±21.13)mm、(16.97±6.34)g。体长与体质量关系为W=1.63×10^(-5)L^(2.75)(n=124,R^2=0.935 3),显著性差异检验表明凤鲚属于匀速生长类型(P>0.05)。体长和体质量von Bertalanffy生长方程分别为:L_t=205.85[1-e^(-0.48(t+1.02)(],W_t=38.31[1-e^(-0.48(t+1.02))]2.75。体长生长速度曲线不具拐点;体质量生长速度的拐点年龄为1.11龄,与最小性成熟年龄一致,拐点年龄时对应的体长和体质量分别为131.02 mm和11.05 g。研究认为,长江口凤鲚繁殖群体低龄群体所占比例较大且体型有变小趋势。为更好地利用和保护凤鲚资源,应在拐点年龄之后进行捕捞。

草鱼jam-a基因的克隆及表达分析

该研究从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)中克隆到3个jam-a(gcjam-a1,gcjam-a2,gcjam-a3)c DNA序列,并采用qRT-PCR分析其在健康草鱼9种组织中的表达模式以及受草鱼呼肠孤病毒(GCRV-GD108)感染后在草鱼6种组织中的表达变化。结果表明,克隆到的gcjam-a 3个分子编码294~295个氨基酸,均具有2个免疫球蛋白Ig结构域,包含典型的受体结合的D1结构域及与细胞膜结合的D2结构域。3个gcjam-a的D2结构域序列完全一致,而D1结构域序列则稍有差别。在健康草鱼9个组织中,gcjam-a1主要在血和脑中有较高表达,gcjam-a2主要在鳃中有较高表达,而在各个组织未检测到gcjam-a3表达。病毒感染后草鱼6种组织中,gcjam-a1、gcjam-a2、gcjam-a3在鳃中均出现显著上调表达,而在肝脏、脾脏、肠、肾、脑中只有gcjam-a1有不同程度诱导表达上调。该研究表明在健康草鱼组织中,3个gcjam-a中以gcjam-a1的表达量最高,且在受病毒感染后所检测的6种组织中均出现表达上调,推测其可能为GCRV-GD108的主要受体。

碳酸氢钠对嗜水气单胞菌的抑制效果

【目的】为了探讨碳酸氢钠(NaHCO_3)对嗜水气单胞菌的抑制效果和抑制机理.【方法】研究了不同浓度的NaHCO_3及等摩尔浓度(0.2、0.4、0.8mmol/L)的氯化钠(NaCl)和碳酸氢钾(KHCO_3)对嗜水气单胞菌生长的影响.【结果】随着NaHCO_3浓度的增大,嗜水气单胞菌的生长越来越缓慢.NaHCO_3达到一定浓度后具有杀菌作用,嗜水气单胞菌暴露在0.8、0.4 mmol/L NaHCO_3中达到99.5%死亡率所需要时间分别为1h和4h,暴露在0.2mmol/L NaHCO_3中6h,其死亡率为78.4%.NaHCO_3浓度越高,嗜水气单胞菌致死所需时间越短.暴露12h后,0.4、0.8mmol/L NaHCO_3中均无嗜水气单胞菌存活,0.2 mmol/L NaHCO_3中只有极少数嗜水气单胞菌存活(存活率小于0.01%).0.2、0.4mmol/L的NaHCO_3均能有效抑制嗜水气单胞菌生长,而添加等摩尔浓度的NaCl培养液中,细菌生长不受影响;添加等摩尔浓度KHCO_3的培养液中培养的嗜水气单胞菌,其生长情况与添加NaHCO_3的嗜水气单胞菌相似,生长被明显抑制,结果表明NaHCO_3对嗜水气单胞菌的抑制并非由渗透压引起,而是与碳酸氢根有关.【结论】研究结果为有效控制嗜水气单胞菌病提供了理论依据.

流溪河入侵鱼类豹纹脂身鲶繁殖生物学研究

2015年12月-2016年10月,在广州市流溪河采集入侵鱼类豹纹脂身鲶(Pterygoplichthys pardalis)283尾用于繁殖生物学研究。结果显示:流溪河豹纹脂身鲶在3-9月性成熟系数较高。雄性最小性成熟个体体长204mm,体重154.88 g;雌性最小性成熟个体体长201 mm,体重183.01 g;最早性成熟年龄均为1龄。其平均成熟卵径为1.87 mm,绝对繁殖力为636-6 148粒,平均绝对繁殖力为2 524.49粒,平均相对繁殖力为10.43粒/g。绝对繁殖力与体长和体重呈显著的正相关。繁殖群体性比为(♀∶♂)为1∶1.15,符合1∶1比例。卵径分布为单峰型。研究表明豹纹脂身鲶具有性成熟早、繁殖力高等特征,有利于其在分布区域迅速建群扩张,并对河流生态系统形成危害。

生态基对大口黑鲈养殖池塘氮、磷累积的影响

为了研究生态基对大口黑鲈(Micropterus salmoides)养殖池塘氮,磷累积的影响,对大口黑鲈进行了6个月的室外池塘养殖试验。养殖期间不同时间段内分别对养殖水体亚硝态氮(NO_(2)-N)、硝态氮(NO_(3)-N)、铵态氮(NH^(+)_(4)-N)、磷酸盐(PO^(3-)_(4)-P)、总氮(TN)、总磷(TP)、总有机碳(TOC)含量以及养殖池塘底泥的TN、TP、TOC含量进行了测定。结果显示:养殖水体氮相关指标中,生态基处理组TN、NO^(-)_(3)-N、NH^(+)_(4)-N含量极显著低于对照组,N累积显著低于对照组;生态基处理组TP含量极显著低于对照组,水体P累积显著低于对照组。池塘底泥中碳、氮、磷相关指标中,生态基处理组池塘底泥TOC、TN、TP含量与对照组无显著差异。实验结果表明,挂设生态基对降低大口黑鲈养殖池塘水体氮、磷含量有显著效果。

苦草立体种植对湖泊水体的影响

[目的]研究苦草立体种植对湖泊水体的影响。[方法]针对湖泊深水区沉水植物难以生长的难题,设计了一种苦草立体种植伐架并开展了种植试验,对苦草立体定植区主要水质指标和浮游生物群落等进行分析。[结果]立体定植苦草30 d可使周边水体中氮、磷、COD下降,并可显著抑制蓝藻生长,使硅藻成为优势种。水体的流动性和水域面积对苦草水体修复效果有显著的影响作用,但在9、10月份苦草枯萎季节应打捞枯萎死亡的苦草,避免苦草衰败期带来的二次富营养化影响。[结论]立体种植苦草可以有效净化氮磷营养物,改善水域生态环境,是一种有效的深水水体修复方法。

德国镜鲤抗病选育群体的亲子鉴定及遗传结构分析

为选育抗疱疹病毒(Cy HV-3)的新品种德国镜鲤,本研究在F_1抗病家系基础上构建10个家系分A、B两组混养。从193对引物中分别筛选3对高多态性微卫星引物进行亲子鉴定及遗传结构分析。结果显示:(1)两组中3个位点的累积排除率为99.99%、99.98%,亲子代配对率为100%(p=0.05),说明利用3个高多态性位点就可达到亲子鉴定的目的。(2)家系鉴定成活率为0%~60.21%。其中1#、8#、9#、10#家系比对照组提高43.51%、22.00%、11.64%、8.45%,可用于F_3选育。(3)1#、8#、9#、10#4个家系的遗传多样性指标为:Ae为3.507 7~4.033 2、Ho为0.818 1~0.965 8、He为0.7062~0.7386,遗传多样性水平较高。(4)除9#家系的HLJ3939位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡(p<0.05)外,其他位点均极显著偏离Hardy-Weinberg平衡(p<0.01),说明所选位点均经过了选择作用。(5)1#、8#、9#、10#4个家系FST为0.057 3~0.115 6,8#、9#、10#3个家系间的Nei氏遗传距离均值为0.515 0,说明4个家系具有较高遗传潜力。因此,本研究成功筛选出4个成活率较高且具有较高遗传潜力的家系,以用于下一代选育。

长江口脊尾白虾繁殖生物学

2014年11月至2015年10月对长江口脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)繁殖生物学进行了研究。结果表明:长江口脊尾白虾体长在25~75 mm,优势体长范围为35~55mm,平均体长(48±9)mm;周年间月性比变化介于0.89~1.63,年平均性比为1.12±0.22,卡方检验雌雄数量差异不显著;长江口脊尾白虾繁殖期在3—10月,繁殖高峰期在5—8月;5—6月繁殖群体以越年虾为主,7月繁殖群体以当年虾为主;个体绝对生殖力(F)在660~8000粒,与体长(L)呈直线相关,F=68.86L-2072(R2=0.498);个体绝对生殖力与体重(W)也呈直线相关,F=318.5W+267.0(R^2=0.504)。

翘嘴鳜microRNA转录组分析及生长相关miRNA鉴定

MicroRNAs(mi RNAs)是一类内源性、长度约22 nt的非编码小RNA,通过转录后调控基因的表达水平、参与生物体的生长与发育等多种生理过程。翘嘴鳜是我国淡水经济鱼类,由于长期人工繁殖忽视亲本选育,导致鳜种质退化,出现生长速度及抗病力下降等问题。本研究中,我们以生长存在显著差异的慢长组和快长组翘嘴鳜肌肉为材料,通过HiSeq 2000深度测序技术和生物信息学分析miRNA转录组,鉴定出433个已知miRNAs并分析miRNAs种子编辑情况。Expdiff方法结合qPCR验证试验,证实了4个表达显著差异的mi RNAs:miR-122、miR-192、miR-451、let-7j-5p。对差异miRNAs进行靶基因预测并通过KEGG Pathway显著性富集分析,发现差异miRNA参与生长、发育、代谢、信号转导等途径,其中Wnt信号通路等在肌肉的生长发育过程起重要作用。本研究为进一步开展miRNA-靶基因的交互作用、了解其对鳜鱼生长的调控机制奠定了基础,并可为鳜鱼分子选育种提供候选基因。