新型抗KPC-2型碳青霉烯酶纳米抗体的筛选与鉴定

目的:产KPC-2型肺炎克雷伯菌可引起β-内酰胺类抗生素、碳青霉烯类抗生素产生耐药性。通过噬菌体展示技术从抗KPC-2纳米抗体文库中筛选与KPC-2特异性结合的纳米抗体,为产KPC-2型肺炎克雷伯菌耐药性的检测和诊断提供技术支持。方法:利用重组KPC-2免疫双峰骆驼,从骆驼的外周血淋巴细胞中提取RNA,逆转录为cDNA,通过两轮嵌套式PCR扩增出纳米抗体片段,构建抗体文库,并通过噬菌体展示技术筛选特异性纳米抗体。通过HPLC和OCTET分别进行表位分析和亲和力测定。结果:构建了一个库容为5.47×10^(8)cfu/ml且插入有效片段不低于81.25%的纳米抗体文库;并建立抗KPC-2纳米抗体的免疫淘选方法;获得了2个不同CDR3区的纳米抗体K2和K5,亲和力分别为6.0 nmol/L和4.8 nmol/L。且在KPC-2上具有2个非竞争性结合表位。结论:成功淘选出2个不同表位的特异性纳米抗体,有望替代传统抗体用于肺炎克雷伯菌耐药性疾病的检测和诊断。

静电纺丝纳米纤维在食品领域中的应用进展

静电纺丝纳米纤维由于具有高比表面积、高孔隙率、制备简单、可控性良好、易功能化、仪器便宜、工艺简单、对材料要求低、可以实现工业化生产等特点,已经被广泛应用于食品科技领域的研究。本文主要综述了静电纺丝纳米纤维在食品科技领域的四方面主要应用:食品包装材料开发;食品快速检测技术开发;食品载体技术开发;食品添加剂开发,并从纳米纤维制备技术角度对每一个应用领域进行了亚类分类。本文将为静电纺丝纳米纤维用于食品科技领域提供总结与指导。

河豚毒素的样品前处理与快速检测技术研究进展

河豚毒素是一种毒性极强的小分子、非蛋白神经毒剂,其性质相对稳定,缺乏特效解毒剂。其检测技术主要有生物检测法、理化检测法和免疫学检测法,其中免疫检测因快速、简便、灵敏而得到较为广泛的应用。该文综述了河豚毒素的样品前处理技术、免疫学快速检测技术及相关专利的研究进展情况,并对河豚毒素检测产品的开发进行了展望。

食物过敏原消减研究进展

如今食物过敏是困扰人类健康的一大重要食品安全问题,发病率持续升高,受到全世界的广泛关注。本文简要介绍了食物过敏及其机制,详细分析了近五年相关文献的研究内容,发现这五年文献数量保持稳定,各国的研究重点仍集中于8大类主要过敏食物,过敏原的3大类消除方法中以物理化学法的研究最为丰富。本文在总体介绍各种消除方法的同时,详细介绍了最常用的4种物理消除方法:热处理、辐照、超声和超高压技术。此外,文中还介绍了消减机制的4种主要研究方法,但如今机制研究还处于初始阶段,尚未得出系统明确的结果,因此相关的深入研究具有良好的前景。可以以体外模拟消化为基础,继续研究消化片段的致敏性变化与构象变化的关系,有针对性的实现过敏原的消除。

改良K-B法用于副溶血性弧菌耐药性检测

K-B纸片法是最为广泛的细菌药敏测定方法之一,针对常见的食源性致病菌副溶血性弧菌,对K-B纸片法进行优化和改良。通过建立OD-菌数对应公式以代替传统的麦氏比浊方法,并根据抑菌圈判别结果的差异,选择了标准一次性平皿(9 cm×9 cm),同时对比3种不同的涂布方法,得出定量300μL棉拭子涂布方法变异系数(CV)最小,最后通过8株野生副溶血性弧菌的耐药性检测,表明改良K-B法与传统方法的实验结果基本保持一致。从而建立了一种更高效、更快捷的细菌耐药性测量方法,可应用于副溶血性弧菌的耐药性检测。

副溶血性弧菌噬菌体的分离及其在即食虾中的应用

为了研究噬菌体作为天然生物防控剂应用于食品中的前景,本实验从水产品市场的污水中采用双层平板法分离纯化出一株烈性副溶血性弧菌噬菌体SHOU24,测定其生理特性,并探讨其在即食虾中的抑菌效果。结果表明：该噬菌体只对含有毒力基因tdh的副溶血性弧菌有裂解能力。电镜观察其形态表明该噬菌体属于长尾噬菌体科。SHOU24的最适p H为7~8。在50℃温度以下,存活率很高。抑菌实验结果表明该噬菌体在常温条件下对即食虾中副溶血性弧菌的生长具有良好的抑制作用,能使副溶血性弧菌的菌浓度下降1log CFU/g。本研究为副溶血性弧菌噬菌体SHOU24作为抑菌剂应用于食品中提供了一定的理论基础。

信号放大技术在食品安全检测领域的应用

食品安全是保障人类健康、提高人类生活品质的基础,同时因我国当前所处经济社会发展的阶段性,食品安全问题在中国日益凸显。目前,食品安全检测领域主要面临检测方法不多、快检技术不成熟,尤其是缺乏超痕量的检测分析技术导致的检测灵敏度不高等问题。信号放大技术为这些问题提供了可能的解决途径,将信号放大技术与传统检测方法相结合,实现食品中重金属、生物/化学毒素、微生物及违法添加剂等方面的痕量检测正逐渐引起人们的重视。本文从四种主要的信号放大技术与该技术在食品安全检测中的研究现状、发展趋势两方面进行了概述,并展望了信号放大技术在食品安全检测领域的研究重点和未来的发展前景。

蓝莓可食性膜机械性能优化及对冰藏三文鱼品质的影响

为优化蓝莓可食性膜的机械性能,本文以抗拉强度与断裂伸长率为指标评价膜性能,采用(果胶、壳聚糖、蓝莓提取物、甘油)四因素三水平正交试验法进行试验。将优化后的蓝莓可食性膜对三文鱼进行包裹处理,通过感官评定、物理指标(硬度)、化学指标(K值)、微生物指标(菌落总数)的测定,综合评价蓝莓可食性膜对冰藏三文鱼的保鲜效果。结果表明:制备蓝莓可食性膜的最优配比为果胶1.25%,壳聚糖0.75%,蓝莓提取物1.00%,甘油1.75%;包膜组的品质显著(P<0.05)优于对照组,延长6 d货架期。

鱼体新鲜度快速检测技术的研究进展

鱼类及其制品因营养价值高,近年来消费量急剧上升。但是,由于鱼体中含有大量的水分,鱼类组织的脆弱性以及酶和微生物的作用,使得鱼类及其制品易于腐败,造成鱼体品质迅速下降。因此,能快速有效地检测鱼体新鲜度对现代食品工业具有重要意义。本文综述了鱼体新鲜度快速检测技术的原理和应用,包括生物传感器技术(电化学生物传感器、酶生物传感器),感官仿生技术(电子鼻、电子舌、比色传感器阵列、计算机视觉技术)和光谱技术(可见/近红外光谱、高光谱、荧光光谱),总结了其优缺点,并对今后鱼体新鲜度快速检测技术的研究重点和发展趋势做出展望。

嗜盐四联球菌对三文鱼废弃物酿造鱼露的影响

本文以三文鱼加工废弃物为原料,采用外加曲工艺发酵低盐鱼露,对盐度和加曲量进行优化,确定了三文鱼鱼露发酵适宜的条件为:12%的盐度和7%的加曲量。并在此条件下添加嗜盐四联球菌研究其对三文鱼鱼露发酵的影响。结果表明,两实验组总氮含量无明显差别,与未添加组相比,添加嗜盐四联球菌的发酵液中氨基酸态氮、总酸、游离氨基酸含量更高,p H值较低。

副溶血性弧菌毒力基因表达时内参基因的选择

【目的】筛选出合适的内参基因用于分析不同环境条件下副溶血性弧菌毒力基因的表达情况。【方法】本研究以虾样品中、海水样品中、过滤海水样品中以及TSB培养条件下的副溶血性弧菌为材料,利用qRT-PCR技术评价了GAPDH、pvuA、pvsA和rpoS 4种常用管家基因在不同条件下的表达稳定性。【结果】4种管家基因均能特异扩增,表达稳定性排列顺序为pvuA(2.906)>pvsA(3.197)>GAPDH(3.746)>rpoS(6.512),进一步通过geNorm软件分析,最终选择两个表达最为稳定的内参基因即pvuA和pvsA,以二者的几何平均值作为参照可更为准确地校正目的基因的表达。【结论】pvuA和pvsA可作为环境样品中副溶血性弧菌毒力基因表达变化研究的内参基因。

基于反转录实时荧光定量PCR的3种标准曲线定量活副溶血性弧菌的差值分析

【目的】比较分析基于反转录实时荧光定量PCR(Real-time Reverse-Transcriptase PCR,Real-time RTPCR)技术建立的3种标准曲线定量样品中活副溶血性弧菌数量的差异性。【方法】体外转录合成带有目的片段(tlh基因)的RNA标准品,提取纯培养副溶血性弧菌(108CFU/mL)RNA样品,提取接种于虾上副溶血性弧菌(106CFU/g)RNA样品,将3种RNA样品分别反转录得到cDNA,10倍梯度稀释,进行Real-time PCR扩增,建立标准曲线A、B、C(其中标准曲线A和C为本研究首次建立)。用标准曲线A、B、C分别定量6个样品(2个纯培养副溶血性弧菌样品、2个人工污染煮熟南美白对虾样品和2个人工污染生南美白对虾样品)中活副溶血性弧菌数量,并与传统涂布计数法进行比较,分析定量结果的差异性。【结果】3种标准曲线均具有较好的线性关系(R2>0.99);3种标准曲线定量6个样品中活副溶血性弧菌结果均显著(p<0.05)低于涂布定量结果,与涂布定量结果的相对误差大小顺序为:标准曲线A(30.0%)>标准曲线C(18.8%)>标准曲线B(6.9%);标准曲线A对6个样品定量结果与标准曲线B、C定量结果的差值平均值分别为-2.25Lg CFU/mL和-0.75 Lg CFU/mL,相对误差平均值为48.2%和15.9%,标准曲线B与C对6个样品定量结果的差值在(1.47-1.53)Lg CFU/mL之间,相对误差在19.0%-23.8%之间。【结论】标准曲线B可以广泛应用于Real-time RT-PCR准确定量样品中微生物数量。

DNA水凝胶的制备及应用

脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)不仅可作为生物遗传的物质基础,又以其可编程性、功能多样性、生物相容性和生物可降解性等优点,在生物材料的构建方面表现出巨大的潜力。DNA水凝胶是一种主要由DNA参与形成的三维网状聚合物材料,同时因其保留的DNA生物性能与自身骨架的机械性能的完美融合使得它成为近年来最受关注的新兴功能高分子材料之一。目前,基于各种功能核酸序列或通过结合不同的功能材料制备的单组分或多组分DNA水凝胶,已广泛用于生物医学、分子检测及环境保护的研究或应用领域中。文中主要总结了近十几年来DNA水凝胶制备方法上的研究进展,探讨了DNA水凝胶的分类策略,并进一步综述了DNA水凝胶在药物运输、生物传感、细胞培养等方面的应用研究。最后对DNA水凝胶未来的发展方向以及可能面临的挑战进行了展望。

竞争还是协同:分子内两类磷键Sb…X(X=O、N、F)和Sb…π的关系

本文通过选取多个双官能团有机分子(甲氧基甲基苯(1)、苄基二甲胺(2)、氟甲基苯(3))和无机分子SbCl3,利用密度泛函理论详细考察了两类分子内磷键Sb…X(X=O、N、F)与Sb…π之间的作用关系。研究结果表明,分子内均存在两种作用,并且二者是竞争关系,不存在协同性。溶剂化效应对磷键有一定的影响,但并不改变二者的关系。分子1、2、3的结合能依次为-14.0、-17.0、-9.0 kcal·mol^(-1)。对于1,结合以Sb…O键为主,Sb…π为辅;对于2,结合基本均来自于Sb…N作用;而对于3,结合则以Sb…π作用为主。该结果体现了相互作用随原子序数的渐变性,为通过磷键调控体系的性质提供了理论依据。