河豚毒素的样品前处理与快速检测技术研究进展

河豚毒素是一种毒性极强的小分子、非蛋白神经毒剂,其性质相对稳定,缺乏特效解毒剂。其检测技术主要有生物检测法、理化检测法和免疫学检测法,其中免疫检测因快速、简便、灵敏而得到较为广泛的应用。该文综述了河豚毒素的样品前处理技术、免疫学快速检测技术及相关专利的研究进展情况,并对河豚毒素检测产品的开发进行了展望。

改良K-B法用于副溶血性弧菌耐药性检测

K-B纸片法是最为广泛的细菌药敏测定方法之一,针对常见的食源性致病菌副溶血性弧菌,对K-B纸片法进行优化和改良。通过建立OD-菌数对应公式以代替传统的麦氏比浊方法,并根据抑菌圈判别结果的差异,选择了标准一次性平皿(9 cm×9 cm),同时对比3种不同的涂布方法,得出定量300μL棉拭子涂布方法变异系数(CV)最小,最后通过8株野生副溶血性弧菌的耐药性检测,表明改良K-B法与传统方法的实验结果基本保持一致。从而建立了一种更高效、更快捷的细菌耐药性测量方法,可应用于副溶血性弧菌的耐药性检测。

基于反转录实时荧光定量PCR的3种标准曲线定量活副溶血性弧菌的差值分析

【目的】比较分析基于反转录实时荧光定量PCR(Real-time Reverse-Transcriptase PCR,Real-time RTPCR)技术建立的3种标准曲线定量样品中活副溶血性弧菌数量的差异性。【方法】体外转录合成带有目的片段(tlh基因)的RNA标准品,提取纯培养副溶血性弧菌(108CFU/mL)RNA样品,提取接种于虾上副溶血性弧菌(106CFU/g)RNA样品,将3种RNA样品分别反转录得到cDNA,10倍梯度稀释,进行Real-time PCR扩增,建立标准曲线A、B、C(其中标准曲线A和C为本研究首次建立)。用标准曲线A、B、C分别定量6个样品(2个纯培养副溶血性弧菌样品、2个人工污染煮熟南美白对虾样品和2个人工污染生南美白对虾样品)中活副溶血性弧菌数量,并与传统涂布计数法进行比较,分析定量结果的差异性。【结果】3种标准曲线均具有较好的线性关系(R2>0.99);3种标准曲线定量6个样品中活副溶血性弧菌结果均显著(p<0.05)低于涂布定量结果,与涂布定量结果的相对误差大小顺序为:标准曲线A(30.0%)>标准曲线C(18.8%)>标准曲线B(6.9%);标准曲线A对6个样品定量结果与标准曲线B、C定量结果的差值平均值分别为-2.25Lg CFU/mL和-0.75 Lg CFU/mL,相对误差平均值为48.2%和15.9%,标准曲线B与C对6个样品定量结果的差值在(1.47-1.53)Lg CFU/mL之间,相对误差在19.0%-23.8%之间。【结论】标准曲线B可以广泛应用于Real-time RT-PCR准确定量样品中微生物数量。