基于脑电非线性特征和AdaBoost算法的诱导期麻醉深度检测

提出一种结合自适应增强学习AdaBoost算法和脑电非线性特征的麻醉深度评估方法,通过提取脑电信号中的4种非线性特征(KC复杂度、小波熵、排序熵、模糊熵)作为输入,以双谱指数作为参考输出,将诱导期麻醉深度分为清醒、轻度麻醉、中度麻醉。使用9例全麻患者的诱导期脑电信号对该方法进行评估,3种不同麻醉状态分类准确度为86.69%,Kappa系数为0.837,表明该方法可以较好地区分诱导期3种不同麻醉水平,为麻醉深度监测提供新思路。

表达工程化剪接因子腺病毒的构建及其在调控乳鼠心肌细胞中的YAP1可变剪接中的应用

目的构建人工剪接因子,实现调控心肌细胞YAP1的可变剪接。方法本研究根据Pumilio1的序列特异性,针对YAP1的Exon6构建不同序列的剪接因子。实验分为3组:野生型PUF-SR作为阴性对照组、人工化的PUF-SR腺病毒转染组、质粒转染组。实验流程:使用同源重组的方法构建腺病毒,将人工化的PUF-SR的PCR片段克隆到pAd-Track质粒中,再将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α中进行质粒扩增。扩增后的质粒经PacⅠ酶切后,转染到293A细胞,进行腺病毒包装。将得到的腺病毒载体转染到培育的乳鼠心肌细胞中。选用Ad-Track质粒用于对照转染组,通过载体转染法将其转染到乳鼠心肌细胞中。定量和半定量PCR法检测YAP1的可变剪接,Westernblot法检测融合蛋白Flag的信号,并使用GAPDH抗体检测GAPDH作为加载对照。结果腺病毒转染组对心肌细胞的转染效率接近100%,质粒转染组中并没有发现荧光蛋白。在Westernblot实验中,阴性对照和靶向YAPExon6XULIE序列的Flag-SR-NLS-PUF都能够检测到融合Flag的蛋白的表达。在反转录PCR和PCR检测YAP1的可变剪接实验中,结果都显示YAP1的第4个target序列所构建的人工剪接因子能够有效调控YAP1 Exon 6的剪入(P<0.05)。结论本实验成功构建出能够调控YAP1可变剪接的腺病毒,并且在SD大鼠的心肌细胞中得到了验证。

锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株的构建及鉴定

目的构建并鉴定锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株。方法本实验时间为2022-04-18至2022-11-29。设计合成针对ZBTB20基因的短发夹RNA(shRNA),构建ZBTB20干扰慢病毒载体——pHBLVZBTB20 shRNA,包装ZBTB20干扰慢病毒。将人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)接种于6 cm培养皿中,分别加入含8μg/ml polybrene和0.5 ml ZBTB20干扰慢病毒上清液的无血清培养液3 ml(实验组)和含8μg/ml polybrene和0.5 ml含无意义干扰序列的慢病毒的无血清培养液3 ml(阴性对照组)进行转染,48 h后加入嘌呤霉素(优化剂量为1.5μg/ml)以筛选转染成功的HPASMCs。采用荧光定量PCR检测两组ZBTB20 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测两组ZBTB20,采用免疫组化试验检测两组ZBTB20表达情况,并进行细胞增殖实验和细胞迁移实验。结果实验组ZBTB20 mRNA相对表达量、ZBTB20均低于阴性对照组(P<0.05)。免疫组化试验结果显示,ZBTB20在阴性对照组的细胞核内高度表达,而在实验组的细胞核内无明显表达,表明ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株构建成功。感染后第2~5天,实验组细胞计数少于对照组,OD值低于阴性对照组(P<0.05)。感染后48 h,实验组划痕愈合面积百分比低于阴性对照组(P<0.05)。结论本实验成功构建了锌指蛋白ZBTB20敲低的血管平滑肌细胞稳转株,且ZBTB20敲低后HPASMCs的增殖和迁移能力明显受到抑制。