人乳头瘤病毒6型L1蛋白的原核表达及免疫原性评价

目的确定原核表达系统中人类乳头瘤病毒6型(human papillomavirus 6,HPV6)L1蛋白的最佳表达条件,并对HPV6 L1 VLP免疫小鼠后产生的中和抗体水平进行评价。方法将密码子优化的HPV6 L1基因片段与原核表达载体pET30a(+)连接,构建重组表达质粒pET30a-6L1,在大肠埃希菌中表达HPV6 L1蛋白,并通过添加分子伴侣(TF、GroES-GroEL、DnaK-DnaJ-GrpE)筛选能够增加目的蛋白表达的最佳条件。将表达的HPV6 L1蛋白经密度梯度离心、阳离子交换层析后获得纯化蛋白,对其形态进行表征。将纯化的HPV6 L1 VLP免疫BALB/c小鼠,采用假病毒中和试验检测小鼠血清中和抗体水平。结果质粒pET30a-6L1经双酶切鉴定证明构建正确;添加TF分子伴侣时HPV6 L1蛋白表达量最高;HPV6 L1 VLP是呈均一的、直径45~65 nm的球状结构,与HPV6天然病毒颗粒的形态、大小相似;HPV6 L1 VLP初次免疫小鼠第8周,血清抗体水平达到峰值,为105以上。结论分子伴侣TF促进了HPV6 L1蛋白的可溶性表达,纯化后的目的蛋白免疫原性良好。本研究为后续各型别HPV L1蛋白表达工艺的探索提供了思路,也为下一步的中试扩大培养奠定了基础。