人巨细胞病毒pp65抗原血症检测方法的建立和初步临床应用

目的 建立人巨细胞病毒抗原 pp6 5 (HCMVpp6 5 )血症特异、灵敏和低成本的酶免组化和荧光免疫组化方法 ,以利于临床推广应用。方法 以HCMV AD16 9感染的人胚肺成纤维细胞 (HELF)爬片作阳性对照 ,选择试剂和材料组建试剂盒 ,并与商品化的同类试剂盒作比较 ,建立人外周血多形核白细胞 (PMNLs)中HCMVpp6 5抗原阳性细胞的检测方法 ,然后再用荧光定量PCR(FQ PCR)方法做相应考评。 结果 我们建立的HCMVpp6 5抗原血症检测法能成功地检出PMNLs中的 pp6 5阳性细胞。其可检测限分别为 10 2 pfu/ml的AD16 9攻击 2 4h后的HELF细胞爬片和 3～ 5个 pp6 5阳性细胞 / 2× 10 5PMNLs ;用高相对分子质量 (5 0 0 0 0 0 )的葡聚糖能快速、有效地分离PMNLs ;用 4 %中性多聚甲醛固定的细胞片 ,于 - 2 0°C或以下可长期保存 (≥ 6个月 ) ,而且 pp6 5抗原性稳定。 结论 自建的试剂盒与同类进口试剂盒相比 ,检测 pp6 5的结果差异无显著性 ,并与FQ PCR的检测结果相一致 ,其检测特异、灵敏、操作简单、费用低廉 ,适宜临床实验室推广应用。

检测pp65抗原和IgM抗体对移植患者CMV活动性感染监测价值比较

目的 比较血pp6 5抗原和IgM抗体检测对移植患者巨细胞病毒 (CMV)活动性感染的诊断价值。方法 收集 5 8位移植患者的血标本 (共 2 0 8份 ) ,分离血浆和多形核白细胞 ,血浆用于CMVIgM抗体检测 (ELISA) ,白细胞用于pp6 5抗原血症检测(荧光免疫组化 )。同时随机取部分血浆标本进行荧光定量PCR分析 ,检测CMVDNA。结果 pp6 5抗原阳性细胞数与CMVDNA拷贝数呈正相关 (r=0 .87) ,也与病人的临床症状密切相关 ,可用于监测移植患者CMV的活动性感染。IgM抗体与pp6 5抗原阳性的一致率为 2 1.2 % ,对CMV感染的敏感性为 2 2 .3% ,特异性为 95 .6 %。结论 pp6 5抗原阳性细胞数能反映CMV的数量 ,可监测CMV活动性感染 ,检测方法特异、灵敏、操作简单 ,适宜临床实验室应用。血清IgM抗体检测因为敏感性较低 ,不适用于移植患者CMV活动性感染的监测。

急诊CRP检测方法的选择与临床应用

目的比较5种方法 C反应蛋白(CRP)检测结果的相关性、操作简易性、结果报告时间,以便为急诊CRP检测提供一种简单有效的方法。方法抽取静脉抗凝血90份,分别用Uppergold U2检测仪(胶体金法)、Quikread检测仪(免疫比浊法)、IMMAGE免疫分析仪(速率散射比浊法)检测血浆或全血CRP,并对结果进行统计学分析和比较。结果 Uppergold血浆、Up-pergold全血、Quikread血浆、Quikread全血、IMMAGE血浆的CRP检测结果相互之间均存在正相关关系(P<0.05);除了Up-pergold血浆法,Uppergold全血、Quikread血浆、Quikread全血的CRP检测结果与IMMAGE血浆的结果差异均无统计学意义(P>0.05);Uppergold血浆与全血的CRP检测结果差异有统计学意义(P<0.05),Quikread血浆与全血的CRP检测结果差异无统计学意义(P>0.05);用血浆检测CRP,需要采集静脉血,并进行血浆、细胞分离,这将延长操作过程;用全血(静脉血或末梢血)检测CRP,不需血浆、细胞分离,检测快速(约3min),更适合急诊需求;IMMAGE检测CRP约需20min,适合大批量标本常规检测。结论用全血检测CRP,操作简便,结果可靠,既可用静脉血,也可用末梢血,适宜急诊CRP测定,也适合床边CRP检测。

慢性阻塞性肺病患者血清IL—8和MMP—9检测及其临床意义

目的：探讨慢性阻塞性肺病(COPD)患者急性发作期和缓解期血清IL-8和MMP-9变化的临床意义。方法：采用ELISA方法,分剐检测23例患者在COPD急性发作期、缓解期及20例正常人血清IL-8和MMP-9水平,并进行比较。结果：COPD急性发作期IL-8水平(197.27±65.44)pg·ml^(-1)明显高于缓解期(39.94±9.55)pg·ml^(-1)(P＜0.01),两者间血清MMP-9水平则无显著差异(P＞0.05)。COPD急性发作期和缓解期血清MMP-9水平分别为(206.10±50.88)ng·ml^(-1)和(190.09±43.22)ng·ml^(-1)均明显高于正常人(150.04±61.50)ng·ml^(-1)(P＜0.01)。结论：IL-8参与了COPD的炎症过程,其血清水平有助对COPD急性发作进行监测。MMP-9在COPD急性发作期和缓解期都有高水平表达,可能与气道重塑、肺气肿形成有关。

三种方法检测胃蛋白酶原Ⅰ的比较及临床应用

目的探讨时间分辨荧光法（TRFIA）、化学发光免疫分析法（cuA）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测胃蛋白酶原Ⅰ（PGI）的相关性，及其临床实用性。方法在TRFIA法检测的临床标本中随机选择88份，分别用CLIA法和ELISA法再次检测PGI，分析三种方法检测结果的相关性；对体检人群、消化科门诊患者和住院患者进行回顾性分析，验证TR—FIA法检测PGI对胃病筛查的可行性。结果TRFIA法（Y）与CLIA法（X），ELISA法（X）PGI检测结果均呈显著正相关（r分别为0．9928和0．9950，P〈0．05），三种方法检测结果的相对偏差（SE％）均〈10％；体检人群、消化科门诊患者、消化科住院患者的血清PGI水平分别为156．0±63．8ng／m1，197．8±113．8ng／ml，269．5±156．5ng／ml，三者差异具有统计学显著性意义（P〈0．05）。结论TRFIA法检测PGI结果可靠、操作方便。

心肌标志物合理检测对急性心肌梗死的诊断

目的对肌酸激酶及其同工酶(CK、CK-MB)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)进行比较,为急性心肌梗死(AMI)的早期诊断和不良预后评估提供较合理的检测指标.方法对123例高度可疑的AMI患者在入院后24h内检测CK、CK-MB活性和cTnT,比较它们对AMI诊断的敏感性和特异性,并进行优化组合.结果 (1) 在入院后24h内CK、CK-MB活性和cTnT对AMI的敏感性分别为89.3%、77.7%和94.2%,特异性分别为80%、100%和100%;(2)AMI患者随着cTnT水平的升高短期(1个月)死亡率显著增加(P<0.01),从4.3%(cTnT≤0.4ng/ml)、15.4%(0.4～1.0ng/ml)到30.2%(≥1.0ng/ml).(3)CK与cTnT联合检测对AMI的敏感性为97.1%,特异性为80%;(4)CK-MB活性出现阳性时,cTnT均阳性,而且同一标本cTnT升高程度显著高于CK-MB(P<0.05).结论 CK与cTnT联合检测对诊断AMI具有高度的敏感性和特异性,在此基础上再检测CK-MB活性不会增加其敏感性和特异性.

Rab22a在乳腺癌中的表达及其对Her-2的影响

[目的]检测Rab22a在乳房纤维瘤与乳腺癌中的表达情况,分析它在表皮生长因子受体2（Her-2）、上皮钙粘附素（E-cadherin）、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）转运与代谢中的作用,以探讨其与乳腺癌分化或转移的关系.[方法]取乳房纤维瘤标本40例,乳腺癌标本74例,用免疫组织化学方法检测Rab22a,分析其与乳腺癌转移、病理分级的关系;同时检测Her-2、E-cadherin、ER和PR的表达,分析其与Rab22a的相关性.[结果]Rab22a在乳房纤维瘤组织不表达或低表达,在乳腺癌组织中高表达,且两组之间相比具有显著性差异（P〈0.01）;Rab22a在乳腺癌转移组与非转移组中的表达无显著差异（P〉0.05）,在病理学Ⅰ/Ⅱ级组与Ⅲ级组中的表达无显著差异（P〉0.05）;Rab22a在E-cadherin、ER、PR低表达组与高表达组之间无显著统计学差异,但是Rab22a在Her-2低表达组显著高于Her-2高表达组.[结论]Rab22a在乳腺癌中高表达,尽管它与肿瘤的转移和分化程度无关,但它可能通过调节Her-2的运输而影响肿瘤细胞的生物活性.

拓扑异构酶基因突变在脲原体对喹诺酮耐药中的作用

脲原体是引起泌尿生殖系感染性疾病的重要病原之一，包括2个生物群，14个血清型，其中血清型1、3、6、14属于生物Ⅰ群，其余10个血清型属于生物Ⅱ群。后来，Femdndez Molina等对脲原体进行基因分析，又把其分为2个基因群Ureaplasma parvum（微小脲原体，Up）和Ureaplasma urealyticum（解脲脲原体，Uu），分别与生物Ⅰ和Ⅱ群完全吻合。不同的生物群和亚群与脲原体的致病性密切相关，而且随着抗生素的广泛应用，其耐药问题也日趋严重，尤其是对某些喹诺酮耐药率已超过60％。Bebear等报道，拓扑异构酶Ⅱ（GyrA/GyrB）和拓扑异构酶Ⅳ（ParC／ParE）基因变是脲原体对喹诺酮耐药的原因之一，

gyrA和pare基因检测在脲原体基因分型中的应用

目的研究gyrA和pare基因检测在脲原体基因分型中的作用。方法脲原体培养与药敏分析用MycoplasmaIST检测试剂盒；在脲原体培养阳性者中选取对喹诺酮耐药标本60份，PCR扩增gyrA和parE基因，扩增产物经测序分析后与基因库中的脲原体各血清型进行比对。结果gyrA扩增片段在血清型1、3、6、14之间核苷酸序列相似性为100％，在血清型2、4、5、7-13之间核苷酸序列相似性100％，两组之间核苷酸序列相似性91％。parE扩增片段在血清型1、3、6、14之间的核苷酸序列相似性为98％～99％；parE扩增片段在血清型2、5、7、8、11之间核苷酸序列相似性100％，在血清型4、12、13之间核苷酸序列相似性100％，两组之间核苷酸序列相似性为90％。60份标本中微小脲原体（Ureaplasmaparvum，Up）占68．3％（41／60），解脲脲原体（Ureaplasmaurealyticum，Uu）占21．7％（13／60），两型混合感染占10％（6／60）。在脚中，血清型3占48．8％（20／41）。结论gyrA检测可把脲原体分为微小脲原体和解脲脲原体两个基因型，parE检测可把微小脲原体分为4个亚型，分别与血清型1、3、6、14完全一致，其中血清型3感染最常见。