新型PCV2衣壳融合蛋白在HEK293F细胞瞬时表达研究

猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)衣壳(Capsid)蛋白是制备抗猪圆环2型病毒亚单位疫苗的有效免疫抗原,能在大肠杆菌及杆状病毒/昆虫细胞表达系统中获得表达,然而在哺乳细胞中的表达研究仍然缺乏。瞬时表达条件考察结果显示,采用宿主HEK293F细胞及PEI-40kDa转染试剂能获得35%病毒PCV2 Capsid基因细胞转染效率。转染试剂PEI(Polyethylenimine)与DNA比例差异会影响复合物形成大小及形态,复合物形成15~80 nm颗粒有利于转染效率的提高。实验以免疫逃逸型猪圆环病毒2b型NDSU41513病毒株,设计了新型PCV2 Capsid (△1-41aa)-Fc(pig) protein(PCFP)分子。在3 L反应器中成功实现了HEK293F细胞瞬时表达PCFP,表达水平达到3.8 mg/L。PCFP蛋白能够自主装形成约为41 nm类病毒颗粒,诱导小鼠机体内产生强烈的体液免疫反应,具有很高的应用潜力。

基于网络药理学和分子对接探讨瓜蒌皮注射液治疗冠心病的作用机制

[目的]通过网络药理学及分子对接的方法,探究瓜蒌皮注射液治疗冠心病的分子机制。[方法]首先通过查阅文献汇总瓜蒌皮注射液中的主要化学成分,通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、SwissADME数据库筛选其活性成分并预测其作用靶点,与在GeneCards数据库、OMIM数据库中获取的冠心病的相关靶点交集获得核心靶点;其次通过String数据库构建靶点蛋白互作网络,转换格式导入Cytoscape3.7.2软件构建蛋白互作网络和“相关活性成分-潜在作用靶点”网络并分析关键靶点蛋白与活性成分;然后通过Metascape数据库对靶点基因进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;最后通过AutoDock Vina软件将活性成分与核心靶点进行分子对接来对网络药理学预测的准确性进行虚拟验证。[结果]研究获得瓜蒌皮注射液治疗冠心病的可能相关活性成分10个,核心靶点7个。瓜蒌皮注射液的活性成分可能通过调控蛋白激酶B抗体(AKT1)、表皮生长因子受体(EGFR)、非受体酪氨酸激酶(SRC)、热休克蛋白90AA1(HSP90AA1)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)、雌激素受体1(ESR1)、纤溶酶原(PLG)等核心靶点及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、白介素(IL)-17、叉头框蛋白O(FoxO)通路等信号通路以达到治疗冠心病的作用,分子对接结果表明活性成分与关键靶点蛋白结合稳定,AKT1与3,29-二苯甲酰基栝楼仁二醇、木犀草苷和槲皮苷等对接更为稳定。[结论]瓜蒌皮注射液通过多靶点、多途径来干预冠心病,为进一步揭示瓜蒌皮注射液的药理作用机制提供理论基础。

酪氨酸羟化酶和GTP环水解酶-1基因修饰永生化成纤维细胞及其表达研究

目的 探讨酪氨酸羟化酶 (TH)和GTP环水解酶 1(GCH)基因修饰的永生化成纤维细胞的可行性和表达能力 ,为其混合移植治疗帕金森病 (PD)作准备。方法 SV40大T抗原转化成纤维细胞使其永生化。构建TH和GCH基因真核表达质粒并转染永生化成纤维细胞 ,利用免疫组化和RT PCR检测其在体内外的表达。结果 TH和GCH基因修饰的永生化成纤维细胞在体外可长期传代培养且可有效表达 ,脑内移植后TH基因至少可表达 8周以上。

瓜蒌皮注射液及其中间体中17种氨基酸含量测定及其变化规律研究

目的测定瓜蒌皮注射液及其中间体中天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、瓜氨酸、精氨酸、丙氨酸、γ-氨基丁酸、酪氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、鸟氨酸、亮氨酸、赖氨酸、脯氨酸的含量,并分析其变化规律。方法OPA-FMOC在线衍生化分析采用Waters XBridge C_(18)色谱柱(4.6 mm×100 mm,3.5μm);流动相磷酸盐缓冲液-[甲醇-乙腈-水(45∶45∶10)],梯度洗脱;体积流量1 mL/min;柱温45℃;检测波长262、338 nm。主成分分析、热图分析对10道工序相应中间体的6批样品进行化学模式识别。结果17种氨基酸在各自范围内线性关系良好(R^(2)>0.9980),平均加样回收率83.4%~119.5%,RSD 0.91%~7.94%。相同工序不同批次样品较聚集,不同工序相应中间体聚为3组。醇沉和阳离子交换柱对氨基酸组成影响最大。结论本实验可为瓜蒌皮注射液质量控制的关键因素提供重要参考,以保证终产品的稳定性和均一性。

超小分子透明质酸功效性能测试

分析了酶切法制备的超小分子透明质酸的护肤功效,用体内、体外测试方法对超小分子透明质酸的功效进行测试,并测试其安全性。人体测试结果显示,超小分子透明质酸有保湿、抗红斑、增加皮肤弹性、增加皮肤紧致度、降低皮肤粗糙度、减少皮肤皱纹的功效。体外测试结果显示,超小分子透明质酸有保湿、修复、抗炎的功效。乳猪皮透皮吸收测试显示,超小分子透明质酸有一定的透皮吸收性。对超小分子透明质酸进行安全性评估,证实其安全性。

第二次“基因结构,克隆和表达”讨论会

自1983年中国生化学会第一次“基因的结构、克隆和表达”西安会议以来,这个领域的发展势头迅猛。在基因顺序测定法、基因顺序特征分析和表达研究的系统等层出不穷。基因表达调控的原件,得到深入的分析。增强子的组织细胞专一性和启动基因的组织细胞专一性的发现,使对细胞分化的了解进入分子水平。

更年健上调老年雌性大鼠下丘脑雌激素受体mRNA表达对P物质和β-内啡肽的影响

目的：探讨中药复方更年健上调老年雌性大鼠下丘脑雌激素受体（ ＥＲ）和 ＥＲ信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）对Ｐ物质（ＳＰ）和β－内啡肽（β－ＥＰ）的影响。方法：建立自然衰老的雌性大鼠模型，用放射配体结合分析法检测 ＥＲ，用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析 ＥＲｍＲＮＡ的改变，用放射免疫分析法检测 ＳＰ和β－ＥＰ含量。结果：老年雌性大鼠性减退期下丘脑 ＥＲ和 ＥＲｍＲＮＡ水平随血清Ｅ_２水平的下降较性成熟期显著下降，而更年健则使下降了的ＥＲ和ＥＲｍＲＮＡ水平明显提高，并通过上调下丘脑ＥＲｍＲＮＡ使ＳＰ明显下降，而β－ＥＰ则显著提高，与提高体内雌激素水平具有同样的效果。结论：更年健可增加ＲＲ在下丘脑的表达以增强雌激素的生物学效应，同时降低下丘脑 ＳＰ水平而提高 β－ＥＰ的含量。

生长抑素与乙肝表面抗原融合基因重组痘苗病毒的构建及其表达

将生长抑素(ss)与乙肝表面抗原(HBsAg)融合基因(ss/HBs)克隆到痘苗病毒表达质粒pGJP-5中,通过与痘苗病毒天坛株体内重组和蚀斑挑选技术获得融合基因的重组病毒,它保持痘苗病毒原有的感染性,并能表达出 ss 和 HBsAg 产物.表达产物呈表面带 ss 决定簇的 HBsAg 杂合颗粒,并分泌到感染细胞之培养液中.杂合颗粒的大小和密度与报道的 HBsAg 颗粒相似。本文还对该重组痘苗病毒可能作为 ss 活载体苗的前景进行了讨论。

柴胡皂甙d上调人急性早幼粒白血病细胞糖皮质激素受体mRNA对细胞生长的影响

目的：观察柴胡皂甙d（SSd）对人急性早幼粒白血症细胞（HL60）糖皮质激素受体（GR）mRNA表达的调节作用及对细胞生长的影响。方法：用从柴胡中提取的单体成分SSd，以3H-胸腺嘧啶（3H－TdR）掺入法和流式细胞仪观察细胞生长，用Northernblot分析SSd对GRmRNA的改变。结果：经SSd作用后，HL60细胞2H－TdR掺入率明显降低，呈时间和剂量依赖关系，SSd10μg／ml处理48h作用最明显；流式细胞仅分析细胞呈现G0／G1期阻滞现象，GRmRNA表达增加。结论：SSd可上调HL60细胞GRmRNA表达并抑制细胞生长。

肥大细胞功能对针刺大鼠“足三里”镇痛效应的影响

目的:观察穴位肥大细胞与针刺效应之间的关系。方法:SD大鼠48只,随机分为正常对照组、穴位针刺组、旁开针刺组、色甘酸钠组、生理盐水组、色甘酸钠+针刺组、生理盐水+针刺组和色甘酸钠+对侧针刺组。采用大鼠尾部痛阈作为效应指标,在体观察针刺“足三里”提插捻转30 min过程中大鼠的甩尾潜伏期;并通过穴位组织切片染色,离体对照针刺前后穴位处局部肥大细胞脱颗粒率的变化,以及色甘酸钠注射对其的影响。结果:手针大鼠“足三里”穴具有显著镇痛作用,效果明显优于针刺旁开对照点;而在色甘酸钠屏蔽穴位肥大细胞的脱颗粒功能后,这种镇痛作用被明显地削弱。针刺后穴位处局部肥大细胞脱颗粒率显著提高;而注射色甘酸钠可以明显减少该脱颗粒现象。结论:穴位组织中的肥大细胞在针刺镇痛效应的产生过程中起着重要作用,肥大细胞脱颗粒参与了针刺镇痛效应的产生过程。

反义寡核苷酸抑制肿瘤细胞表达VEGF的研究

研究用反义寡核苷酸（ＯＤＮ）抑制肿瘤细胞ＶＥＧＦ的表达，探讨发展新的抗肿瘤药物的可能性。方法Ｓ１８０细胞培养上清液有促进牛脐血管内皮细胞生长的作用。用ＶＥＧＦ的反义ＯＤＮｓ分别加入Ｓ１８０细胞培养液，检查各上清液刺激内皮细胞生长的受抑情况，即可了解ＯＤＮｓ抑制肿瘤细胞表达ＶＥＧＦ的情况。结果证明ＶＥＧＦ反义ＯＤＮｓ确有抑制ＶＥＧＦ表达的作用。结论反义ＶＥＧＦ的ＯＤＮｓ有望成为新一代的抗肿瘤药物。

米非司酮治疗子宫肌瘤的临床疗效及机理探讨

探讨米非司酮（Ru486）治疗子宫肌瘤的临床疗效和机理。方法：应用国产的Ru48625mg／d，治疗39例子宫肌瘤Ⅰ～Ⅱ疗程，B超定期随访子宫肌瘤及子宫体积，放免法监测血性激素水平，Northernblot法和HAP单点饱和分析法检测瘤心、瘤边缘及正常子宫肌组织中的ERmRNA、PRmRNA表达和ER、PR蛋白含量。结果：Ⅰ疗程肌瘤体积明显缩小53．88％，Ⅱ疗程缩小达61．20％，临床总有效率为84．62％。服药前后血性激素水平处于早期滤泡期水平，Ru486治疗后肌瘤和正常子宫肌组织中的PRmRNA表达及PR蛋白含量均显著降低（P＜0.01）。结论：Ru486有可逆性抑制PR及其基因表达作用，同时抑制性腺轴，使肌瘤明显缩小。此疗法有效，副作用小，可重复使用。

足月儿和早产儿母乳中游离和构成蛋白质的氨基酸含量动态比较

目的了解足月儿和早产儿母乳中游离和构成蛋白质的氨基酸含量的动态变化。方法采用氨基酸自动分析仪对不同泌乳期的足月儿和早产儿母乳中游离和构成蛋白质的氨基酸含量进行测定。结果牛磺酸、谷氨酸／谷氨酰胺是母初乳中最丰富的游离氨基酸，而谷氨酸／谷氨酰胺、亮氨酸和天门冬氨酸是蛋白质中含量最丰富的氨基酸，提示了其对新生儿的最佳供应。早产儿母乳中氨基酸谱变化与足月儿母乳有所不同，但更符合于早产儿的需求。结论从氨基酸变化看，母乳为婴儿最佳匹配的食品，对于早产儿更应强调和鼓励母乳喂养。

貂肠炎病毒基因的分子克隆和结构研究

从貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)感染细胞培养物提取病毒的中间复制形双链DNA分子(RF DNA),经绿豆核酸酶(Mung bean nuclease)酶解消除RF DNA两端封闭的发夹结构,将全长基因组克隆于质粒pUC18中。对克隆片段进行了酶切位点分析,并做了限制性内切酶图谱。将测定的核苷酸序列与猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)相应片段的序列进行了比较,同源序列可达99.2％。

降钙素基因相关肽对不同程度冠脉狭窄时的心脏功能的影响

本实验观察了冠脉内注射降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ０．３μｇ／ｋｇ）对正常及不同程度冠脉狭窄犬的心功能的影响。结果表明正常犬冠脉内注射ＣＧＲＰ后，平均动脉压（ＭＡＰ）下降１．２ｋＰａ（Ｐ＜０．０５），同时，心率（ＨＲ）、心输出量（ＣＯ）、左室收缩压峰值（ＬＶＳＰ）均不同程度增加；左室舒张末压（ＬＶＥＤＰ）轻度降低。在中度狭窄３０ｍｉｎ后，冠脉内注射ＣＧＲＰ对ＨＲ、ＭＡＰ无明显影响；而重度狭窄后注射ＣＧＲＰ，ＭＡＰ由狭窄时降低逐渐增高，ＨＲ由增快而变慢。ＣＯ、ＬＶＳＰ均显著增高，ＬＶＥＤＰ降低，此作用较冠脉狭窄前更为明显。提示ＣＧＲＰ扩张冠脉动脉，增加冠脉血流量和心排血量，增强心肌收缩力，对缺血心脏功能有保护作用。

C型钠尿肽的扩血管作用及机制

目的和方法 :用常规离体血管灌流方法 ,观察钠尿肽家族新成员C型钠尿肽 (CNP)对家兔腹主静脉及腹主动脉的作用及其作用机制。结果 :CNP在 10 -10 ～ 10 -6mol/L浓度范围内对家兔静脉及动脉均呈剂量依赖性的舒张效应。其对静脉的作用与硝酸甘油 (NTG)相似 ,且扩血管作用无ANP强 ,以腹主动脉为对象分别施加阿托品(10 -7mol/L) ,酚妥拉明 (2 0 μg)或消炎痛 (2 0 μg)等均不影响CNP的舒血管作用 ,优降糖和心得安可明显降低CNP对腹主动脉的舒张作用。CNP在基础状态下提前加入不抑制NE的缩血管反应。结论 :CNP可能是一种静脉系统的扩张剂 ,同时亦是调节动脉张力的选择性调节肽 ,CNP舒血管作用机制至少有两途径 :一是与K+ ATP通道的开放有关 。

固定化酵母不对称水解布洛芬乙酯制备S（＋）－布洛芬

用多种固定化载体对含有不对称水解布洛芬酯的脂肪酶的丝孢酵母进行固定化。海藻酸钙、卡拉胶、聚丙烯酰胺凝胶和ＰＶＡ固定化酵母后，酶活力回收分别为６％、１６％、１８％和７％；用自制的高脱乙酰度、高分子量的壳聚糖，通过成囊装置包埋酵母细胞，并用戊二醛交联，制得直径１．０ｍｍ左右的固定化酵母细胞壳聚糖多孔微球，酶活力回收达８０％以上，操作半衰期７５天以上，而且每次反应所产生的布洛芬的比旋光度均为［α］２０Ｄ＝＋５５°左右。固定化酶的最适温度从未固定化时的３５℃提高到４５℃。每克干重的壳聚糖可固定化１～５倍干重的酵母，固定化壳聚糖微球有较高机械强度。

慢性病毒性肝炎2′-5′寡腺苷酸合成酶活性研究

ＰＰＰＡ２Ｐ５Ａ２Ｐ５Ａ寡腺苷酸（简称２′－５′Ｐ３Ａ３）是干扰素作用细胞后诱生的２′－５′Ｐ３Ａ３合成酶利用ＡＴＰ为原料合成的物质〔１〕。它具有广泛的生物学活性如抗病毒〔２〕、抗肿瘤、免疫调节及大分子生物合成抑制作用〔３〕。本文选择慢性乙肝病人７４...

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤药物干预的研究

目的 探讨神经生长因子 (NGF)和丹参对新生大鼠缺氧缺血性脑病 (HIE)的防治作用。方法 选用 7日龄新生大鼠 ,在制成HIE模型前后给予NGF和丹参腹腔注射 ,HIE后分期处死大鼠分别测定谷氨酸 (Glu) ,天门冬氨硫 (Asp) ,一氧化氮合酶 (NOS)和做病理检查。 结果 HIE组 (30min)Glu ,Asp和 (48h)NOS较正常对照组明显升高。Glu :(887.0± 145 .2 ) μg/g ,vs.(776 .5± 10 3.0 ) μg/g ,(P <0 .0 5 ) ;Asp :(2 78.6± 48.2 ) μg/g ,vs.(2 2 4.8± 2 7.0 ) μg/g ,(P <0 .0 1) ;NOS :(3.34 6± 0 .745 )U/ml,vs.(2 .195± 0 .6 15 )U/ml,(P <0 .0 1)。NGF和丹参可以抑制HIE后的Glu ,Asp和NOS升高 ,并可减轻脑组织病理改变。Glu :(6 94.9± 83.9) μg/g ,vs .(887.0± 145 .2 ) μg/g ,(P <0 .0 1) ;Asp :(2 0 6 .1± 2 5 .4) μg/g ,vs.(2 78.6± 48.2 ) μg/g ,(P <0 .0 1) ;NOS :(2 .0 41± 0 .35 7)U/ml,vs.(3.34 6± 0 .745 )U/ml,(P <0 .0 1)。结论 NGF和丹参对HIE有防治作用。