检测实验动物弓形虫感染的两种PCR方法的建立和比较

为了建立敏感、稳定、特异的 PCR检测体系 ,用于实验动物弓形虫感染的检测。采用 B1 基因设计引物 ,建立常规 PCR,用 P3 0 基因设计引物 ,建立巢式 PCR;用两种 PCR方法检测实验感染弓形虫小鼠血液和腹腔液中的DNA动态变化 ;用巢式 PCR检测自然状态下的普通级豚鼠、教学和科研用兔的弓形虫感染率 ,并和常规 PCR检测结果比较。结果 ,巢式 PCR可检测到 1fg DNA含量 ,比常规 PCR敏感 10 0倍 ;对其他微生物 DNA无交叉现象 ,特异性强 ;对同一样品重复检测 3次 ,阴、阳性结果一致 ,稳定性好。小鼠感染弓形虫 2 d后 ,巢式 PCR对小鼠腹腔液的阳性检出率为 83 .3 % ,对血液的阳性检出率为 3 3 .3 % ;感染 3 d后 ,腹腔液阳性检出率为 10 0 % ;而常规 PCR在小鼠感染 3 d和 4d后才能在腹腔液和血液中检测到 ,检出率各为 16.7%。受检普通级豚鼠没有感染弓形虫 ,教学和科研用兔的弓形虫总感染率为 14 .3 %。结论认为 ,巢式 PCR方法可用于实验动物弓形虫早期感染的检测 ,具有敏感性高、特异性强。