水痘减毒活疫苗生产场地变更质量可比性研究

目的通过可比性研究证明水痘减毒活疫苗生产场地变更后质量的产品一致性。方法从生产用原材料、生产工艺、产品质量和稳定性等几个方面进行可比性分析,比较水痘减毒活疫苗生产场地变更前后产品质量特性。结果确认水痘疫苗生产车间场地变更前后原材料未发生改变;生产工艺未发生变化,部分工艺参数由于设备更新进行了调整但未对工艺控制造成影响;对工艺用水、疫苗质量、疫苗稳定性的关键质量指标进行统计分析,其中新车间生产的原液病毒滴度为5.0 lgPFU/mL、半成品病毒滴度为4.6 lgPFU/mL,成品中水分含量为1.0%~1.4%、病毒滴度为7.8~8.0 lgPFU/mL、热稳定性试验为6.8 lgPFU/mL与老车间同步生产的成品结果(原液病毒滴度为4.9~5.0 lgPFU/mL,半成品病毒滴度为4.5~4.6 lgPFU/mL,成品中水分含量为1.1%~1.3%、病毒滴度为7.8~8.0 lgPFU/mL、热稳定性试验为6.8 lgPFU/mL)相似,且均在2014年老车间相对应检测项目均值±3 SD范围内,新老车间成品中的牛血清白蛋白残留量和乳糖酸红霉素残留量差异均无统计学意义(t=1.50,P>0.05;t=1.00,P>0.05);加速稳定性试验和长期稳定性试验结果显示,新老车间同步生产的各3批水痘疫苗成品的数据稳定性一致,各项检测指标均符合相关规定要求;疫苗安全性均符合相关要求,新老车间同步生产的疫苗试验结果一致。结论水痘减毒活疫苗生产场地变更前后产品质量特性高度相似,场地变更未对产品的安全性和有效性产生不良影响。

麻疹、腮腺炎、风疹、水痘联合减毒活疫苗的生产工艺研究

目的 建立麻疹、腮腺炎、风疹、水痘联合减毒活疫苗(combined live attenuated measles,mumps,rubella and varicella vaccine,MMRV)的生产工艺.方法 根据现有疫苗原液生产工艺,将麻疹病毒沪-191纯化株、腮腺炎病毒S79株、风疹病毒BRD-Ⅱ株和水痘-带状疱疹病毒Oka株在原代鸡胚成纤维细胞或人二倍体细胞MRC-5株中制备高滴度病毒原液,并超低温保存.筛选无明胶冻干稳定剂配方.按国外已上市同类产品的病毒配比,研究MMRV中4种病毒的原液配制滴度及成品配制比例,建立最佳冻干工艺.结果 用筛选出的适于MMRV的无明胶冻干稳定剂配方进行试验,确定病毒的原液配制滴度为,麻疹4.6 lg半数细胞培养感染量(50% cell culture infective dose,CCID50)/ml、腮腺炎5.8 lgCCID50/ml、风疹4.3 lgCCID50/ml、水痘4.8 lg噬斑形成单位(plaque forming unit,PFU)/ml.使成品中腮腺炎病毒滴度至少达到麻疹和风疹病毒的10倍,水痘病毒滴度高于现有单价水痘疫苗.连续制备3批MMRV,经检测平均病毒滴度为,麻疹4.5 lgCCID50/ml、腮腺炎5.1 lgCCID50/ml、风疹4.3 lgCCID50/ml、水痘4.6 lgPFU/ml;平均水分为1.2%.其他项目检定均合格.结论 建立了MMRV的生产工艺,可以稳定生产出达到国外同类产品质量标准并符合我国4种单价减毒活疫苗国家标准的产品.

基于细胞感染的实时定量逆转录PCR检测水痘减毒活疫苗病毒滴度方法的建立

目的建立基于细胞感染的实时定量逆转录PCR(real time quantitative reverse-transcription PCR, RT-qPCR)法, 用于水痘减毒活疫苗感染性病毒滴度检测。方法根据水痘减毒活疫苗毒种V-Oka株的基因序列设计特异性引物及探针。将参考品及待测样品系列稀释后接种MRC-5细胞, 经培养后收获细胞, 提取RNA, 进行一步法RT-qPCR检测, 通过平行线法计算样品滴度, 并将检测结果与中国药典2020年版三部规定的空斑法进行对比。结果感染细胞适宜收获时间为36~48 h, 可检测样品滴度范围为2.8~5.0 lgPFU/ml。与空斑法检测的滴度之间的差异无统计学意义(冻干疫苗组t=1.09, 疫苗原液组t=0.59, P值均>0.05)。结论初步建立了基于细胞感染的RT-qPCR法, 可用于水痘减毒活疫苗病毒滴度检测。

低血清培养基在水痘减毒活疫苗生产中的应用

目的 应用低血清培养基在水痘减毒活疫苗生产过程中进行细胞和病毒培养,观察培养效果,验证其对疫苗生产的适用性。方法 采用低血清培养基培养MRC-5细胞和水痘病毒Oka株,以传统培养基的生产为对照,比较细胞生长、病毒感染情况及原液病毒滴度和牛血清白蛋白残留量。采用t检验对结果进行比较。结果 在相同工作细胞库细胞复苏的情况下,低血清培养基与传统培养基培养的细胞和病毒形态,没有明显的差异。低血清培养基与传统培养基培养得到的水痘病毒原液病毒滴度均为5.0~5.1 lg噬斑形成单位/ml,差异无统计学意义(t=1.00,P>0.05);但低血清培养基生产的水痘病毒原液中牛血清白蛋白残留量(12~19 ng/ml)显著低于传统培养基生产的(39~46 ng/ml)(t=8.51,P<0.05)。结论 在水痘减毒活疫苗生产过程中应用低血清培养基未影响病毒滴度,但牛血清白蛋白残留量明显降低,减少了因牛源性成分引起疫苗不良反应的风险,可提高疫苗质量,适用于水痘减毒活疫苗的生产。

新建主细胞库对水痘减毒活疫苗质量影响的分析

目的基于细胞基质分析新建人二倍体细胞MRC-5主细胞库,并通过主细胞库变更前后所制的水痘减毒活疫苗(水痘疫苗)可比性研究,分析新建主细胞库对水痘疫苗质量和稳定性的影响。方法对新建主细胞库、工作细胞库和生产终末代细胞按照2015年版中国药典和企业质量标准进行抽样检定,并传代至超高代次细胞进行传代稳定性研究,对比细胞生长与细胞计数。用新建主细胞库连续生产3批水痘疫苗并进行工艺验证,分析原液及成品的质量结果,并考察水痘病毒基因序列和产品稳定性。结果新建主细胞库、工作细胞库及其他各代次细胞在传代过程中生长良好,细胞计数正常,检定项目的结果均符合质量标准。使用新的主细胞库连续生产3批水痘疫苗,工艺合格,变更前后生产的疫苗水痘病毒基因序列无差异;病毒滴度均为4.0 lg噬斑形成单位(plaque-forming unit,PFU)/0.5 ml,热稳定性试验结果均为3.4 lgPFU/0.5 ml,水分含量均不高于1.5%,符合企业注册标准;质量稳定性趋势基本一致。结论建立的人二倍体细胞MRC-5主细胞库各项检定结果合格。可比性研究显示,用新细胞库试生产的水痘疫苗质量和稳定性与变更前的一致,为新主细胞库应用于水痘疫苗的生产提供了细胞资源和依据。

国产水痘减毒活疫苗质量分析

目的对国产水痘减毒活疫苗进行质量分析,判断疫苗的安全性和有效性。方法取2019年生产的102批水痘减毒活疫苗,进行鉴别试验、外观、pH值、渗透压摩尔浓度、水分、病毒滴定、热稳定性、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量、无菌、异常毒性、细菌内毒素含量的检查。结果各项检查结果均符合《水痘减毒活疫苗制造与检定规程》和中国药典2015年版三部相关要求,病毒滴定和热稳定性试验结果均在3.4 lg噬斑形成单位/0.5 ml以上。结论国产水痘减毒活疫苗是安全有效的。

水痘-带状疱疹病毒膜抗原荧光抗体试验的建立与评价

目的建立用于检测血清中水痘一带状疱疹病毒（varicella-zoster virus，VZV）特异性抗体的膜抗原荧光抗体（fluorescent antibody to membrane antigen，FAMA）试验并对其进行验证和评价。方法用VZV感染细胞作为抗原制备抗原载玻片，以异硫氰酸荧光素标记的羊抗人IgG为二抗建立FAMA试验。对试验的灵敏度、特异性和重复性进行验证。用FAMA试验和市售ELISA试剂盒对200份血浆样品中的抗VZV抗体进行检测。采用Spearman秩相关检验对两种方法的检测结果进行比较。结果FAMA试验的灵敏度为0．04IU／ml，与常见的人疱疹病毒（单纯疱疹病毒1和2型、人巨细胞病毒）没有交叉反应且重复性良好。经FAMA试验检测，200份血浆样品的抗体阳性率为93．5％，抗体几何平均效价为1：18．1，检测结果与市售ELISA试剂盒的符合率为90．0%。两种方法的检测结果具有相关性，Spearman秩相关系数为0．49，P〈O．0001。结论建立的方法具有良好的灵敏度、特异性和重复性，可用于血清中抗VZV抗体的检测。