人用狂犬病灭活疫苗的临床研究和应用

狂犬病疫苗是预防狂犬病的安全有效方法。本文从人二倍体细胞疫苗、纯化 Vero 细胞狂犬病疫苗、层析纯化狂犬病疫苗的临床研究角度,概述此类广泛应用的人用狂犬病疫苗的优缺点、国内外的发展过程和临床免疫效果,以及我国当前对氢氧化铝佐剂疫苗和无佐剂疫苗的临床研究热点。数据显示国产无佐剂疫苗引起的不良反应发生率和抗体阳转率与进口同类疫苗相近,这类疫苗预防狂犬病的免疫效果是有保证的。

禽流感H5N1灭活疫苗与不同纳米化佐剂联合免疫研究

目的观察禽流感H5N1灭活疫苗加不同佐剂以及纳米化佐剂免疫小鼠后产生的免疫应答的差异，同时观察免疫对异亚型病毒攻击后的保护情况。方法用H5N1灭活疫苗分别联合佐剂氢氧化铝、纳米化氢氧化铝、MF59和纳米化MF59通过腹腔注射方式免疫雌性BALB／c小鼠，同时分别以H5N1灭活疫苗免疫小鼠以及PBS腹腔注射处理小鼠作对照。采用ELISA方法分别对各组小鼠免疫后血清特异性IgG及其亚类IgGl、IgG2a水平进行检测，以PR8病毒鼻腔攻击后观察小鼠体重变化情况和生存率。采用t检验作组间比较。结果与PBS处理组相比，无论以何种方式免疫H5N1疫苗，免疫后特异性IgG及其亚类水平均明显升高（t=7．4004，P〈0．01），以联合MF59后诱导的特异性抗体水平最高。其中疫苗单独免疫组和联合M59免疫组IgG2a水平升高明显，联合纳米化MF59免疫小鼠后IgG2a水平有所下降，IgG1水平有所升高；联合铝佐剂组以IgG1升高为主。攻毒后各组小鼠体重均出现下降，但疫苗单独免疫小鼠以及疫苗与佐剂联合免疫小鼠于攻毒后期体重恢复接近正常或者正常。PBS处理组小鼠攻毒后全部死亡，佐剂联合免疫组小鼠存活率100％，而疫苗单独免疫小鼠存活率为70％。结论H5NI疫苗无论是单独免疫或是联合不同佐剂免疫均可诱导较高水平的特异性抗体产生，有非常好的免疫原性。HSN1灭活疫苗诱导的抗体亚类以IgG2a为主，MF59以及纳米化MF59也以诱导／gG2a亚类为主，但纳米化MF59可诱导更均衡的免疫应答。联合铝佐剂或纳米化铝佐剂免疫小鼠后均可诱导以IgG1亚类为主的抗体应答。联合两种佐剂均可对小鼠产生很好的异亚型保护。

流感DNA疫苗免疫BALB／c小鼠克服母源性抗体干扰的研究

目的为了克服母源性抗体对子代的免疫抑制作用，寻找避免母源性抗体干扰的流感疫苗免疫策略。方法以小鼠为动物模型，接种流感灭活疫苗或DNA疫苗，并用致死量流感病毒感染。感染后检测小鼠的存活率、肺部病毒滴度、体内抗体滴度等指标，对疫苗的保护效果进行评价。结果母代与子代免疫相同的疫苗，不论是灭活疫苗还是DNA疫苗，子代体内的母源性抗体都抑制了子代免疫后的自动免疫应答，表现为子鼠接种疫苗后不能抵御致死量流感病毒感染；母代免疫流感灭活疫苗，子代免疫神经氨酸酶DNA疫苗，子鼠能够克服母源性抗体干扰，抵御致死量流感病毒感染；母代和子代免疫不同的DNA疫苗，即母代免疫血凝素或神经氨酸酶DNA疫苗，子代免疫神经氨酸酶或血凝素DNA疫苗，也能达到克服母源性抗体干扰的目的。结论流感DNA疫苗免疫BALB／c小鼠能克服母源性抗体的干扰，这为临床新生儿抗母源性抗体干扰的研究提供了实验参考。

H9N2禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶DNA疫苗对小鼠的免疫保护研究

目的检测H9N2禽流感病毒血凝素（hemagglutinin．HA）和神经氨酸酶（neuraminidase，NA）DNA疫苗保护小鼠抵抗致死量同源病毒感染的能力。方法通过小鼠肺对肺传代，建立禽流感病毒A／chicken／Jiangsu／07／2002（H9N2）小鼠适应株。同时，构建病毒HA和NADNA疫苗，以不同剂量电击法免疫小鼠1或2次，在初次免疫后4周或加强免疫后1周用致死量（40 LD50）鼠适应型病毒攻击小鼠。通过测定小鼠血清抗体滴度、小鼠存活率和肺部病毒滴度来评价疫苗的效果。结果HA或NA DNA10μg免疫1次或3μg免疫2次均可保护小鼠抵抗致死量H9N2病毒的感染。结论低剂量HA或NADNA可为抗H9N2禽流感病毒感染提供有效的免疫保护。

对禽流感H5N1灭活疫苗不同免疫方式诱导的免疫应答及异亚型保护研究

目的 观察禽流感H5N1灭活疫苗以不同方式免疫后诱导的免疫应答及抗异亚型病毒攻击的保护作用.方法 将H5N1灭活疫苗分别通过腹腔和滴鼻方式免疫BALB/c小鼠,同时以PBS作为对照;免疫后分别以PR8和H9N2病毒攻击,观察小鼠的体重变化和生存情况.采用ELISA对各组小鼠攻毒后不同时间的血清IgG及其亚类水平进行动态检测;流式细胞仪检测脾淋巴细胞亚群情况.采用t检验对各组数据进行比较.结果 PR8和H9N2病毒攻击后,各组小鼠体重均下降,但疫苗组小鼠于后期体重恢复正常,存活率分别为100%和70%-80%,而PBS组小鼠则全部死亡.无论以何种方式免疫,疫苗组的特异性IgG及其亚类水平均明显升高,其中以IgG2a水平升高更为明显.攻毒后疫苗组小鼠脾CD4＋与CD8＋T淋巴细胞比值出现下降（t=6.8017,P〈0.01）;滴鼻免疫组与腹腔免疫组相比降低更明显（t=3.9701,P〈0.05）.结论 H5N1疫苗免疫原性良好,可诱导较高水平的特异性抗体产生,诱导的抗体亚类以IgG2a为主.两种免疫方式均可对小鼠提供很好的异亚型保护,而滴鼻免疫能够诱导更强的CD8＋T细胞应答.