基因芯片技术检测乙型肝炎病毒基因型

目的建立乙型肝炎病毒(HBV)基因分型检测芯片方法,并检测其特异性、敏感性和稳定性。方法收集HBV各基因型序列,并对比分析后,设计7支探针,制成HBV基因型检测芯片;对芯片检测的实验条件进行探索,分析其检测特性。结果实验条件优化为杂交温度39℃,试验统计结果判定为荧光信号软件输出值在30以上为阳性,30以下为阴性。正常对照组的健康人和非HBV的常见病毒芯片检测结果均为阴性,实际应用检测30份HBV DNA阳性临床留取的样本,结果 19份为C型,11份为B型,抽查2份标本测序观察,结果与芯片检测结果完全一致。用HBV基因B型、C型标准品考察,检测符合率为100%,芯片检测的最低病毒拷贝数为104拷贝/ml,芯片检测的总变异度为9%、芯片内变异度为2%,芯片能同时检测不同基因型的重叠感染。用加速试验评价芯片的稳定性,结果检测荧光信号值有所下降,但下降后的信号值未低于检测临界值30,试剂盒性能较为稳定。结论使用HBV基因型检测芯片进行HBV基因分型操作简便、敏感性高、特异性好、方法可靠。