米非司酮调控的单链鼠白介素12真核表达载体的构建及鉴定

构建含有单链鼠白细胞介素12(mIL-12)基因,并可经米非司酮调控表达的真核载体,在体外鉴定其调控表达效果。用PCR技术从GCp35Ep40PN质粒上获取白细胞介素12的p40和p35亚基的基因,通过2次PCR技术引入linker后得到单链白细胞介素12基因,将其与米非司酮诱导调控系统克隆入pDC312质粒,构建成真核表达载体pDC-RUmIL-12,通过限制性内切酶和PCR鉴定其正确性。在体外用脂质体转染法将pDC-RUmIL-12载体转染HEK293细胞株,以不同的剂量米非司酮诱导载体表达,然后用ELISA法检测培养液上清中mIL-12蛋白的含量。测序结果表明所得鼠白细胞介素-12融合单链基因序列与设计相一致。酶切分析和PCR证实载体pDC-RUmIL-12构建正确。将pDC-RUmIL-12转染HEK293细胞并经米非司酮诱导表达后,ELISA检测结果表明该载体有良好的调控能力。没有诱导剂米非司酮时,只有极少量的mIL-12蛋白表达,而加入诱导剂米非司酮后,mIL-12表达量明显增加,并在一定范围内与米非司酮剂量呈正比。成功构建了含有单链鼠白细胞介素12(mIL-12)基因,并可经米非司酮调控表达的真核载体,可用于肿瘤的基因治疗研究。

带有荧光素酶报告基因的可调控重组腺病毒载体的构建及表达

目的:构建带有萤火虫荧光素酶报告基因的可调控腺病毒载体,并在SW620结肠癌细胞株中观察其调控表达.方法:将萤火虫荧光素酶luc基因和启动子,以及RU486调控系统构建成单一的穿梭载体PDC-RULUC,将其与Admax腺病毒包装系统的辅助质粒共转染293细胞后,构建出可调控的重组腺病毒载体.扩增后用最终稀释法测定了其滴度,并在SW620细胞中检测了其基因调控效果.结果:成功地构建了携带有RU486调控系统的可调控腺病毒载体Ad-RULUC,病毒滴度达到5.2×1013pfu/L.当给予诱导剂RU486后,腺病毒载体可以诱导表达荧光素酶,并在一定范围内两者呈正比,而没有RU486时,几乎没有报告基因的表达.结论:腺病毒Ad-RULUC能调控外源基因的表达,为基因调控研究和基因治疗提供了良好的工具.

米非司酮基因诱导调控系统

在基因表达和基因治疗研究中,需要目的基因在特定的时间以适当的水平实现其表达,目的基因过度表达或不适当的表达将影响实验结果,在疾病治疗中甚至会产生致命的副作用,实现对目的基因的表达时间和表达水平的精确调控是一个非常关键的问题。目前生物学家们已构建了多种新型的基因表达调控系统,其中米非司酮诱导调控系统具有诱导效率高,背景表达低,安全性高等诸多优点,是基因调控研究中的重要进展,也是目前最有应用前景的调控系统之一。就其结构设计和应用研究方面的进展作一简要综述。

RU486诱导调控载体的构建及体外表达

构建可经RU486诱导表达载体,并证实其对基因表达的调控作用。通过分子生物学技术,改造了含有GLP65反式作用调控因子和GAL4杂合启动子的PRS质粒。PCR扩增BGHpolyA片段,并引入需要的酶切位点。在GLP65调控区上游添加了hCMV启动子,在GAL4杂合启动子下游加入了荧光素酶报告基因。同时,为减少两个转录单元之间的潜在干扰,加入了1.2kb的小鸡β珠蛋白绝缘子。经PCR和限制性酶切及测序证实了载体的正确性。在体外转染HEK293细胞后,运用双荧光素酶报告基因技术鉴定了该系统的调控能力。加入诱导剂RU486后,可以诱导表达荧光素酶,并在一定范围内两者呈正比,最高可以实现荧光素酶的40余倍的表达,而没有RU486时,几乎没有报告基因的表达,表明RU486诱导调控载体构建成功,可实现对目的基因的表达时间和表达水平的精确调控,为进一步的基因调控研究和基因治疗提供了良好的工具。

国际TNM分期与日本胃癌分期指导意义的区别

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一.目前,胃癌分期的两个主要系统是国际抗癌联盟（UICC）的TNM系统和日本胃癌协会（JGCA）的胃癌日本分期法.这两个分期系统都依赖于原发肿瘤的范围、淋巴结受累的范围以及是否存在远处转移 但同时这两个分期系统也存在着一些根本的不同, 最明显的区别在于对局部区域转移淋巴结的分级.因为淋巴结分期（N分期）是影响胃癌预后的重要因子,所以淋巴结分期的不同对于不同的患者来说,其对于疗效及预后的评估也有着不同的判断.

无支撑管的胰管-空肠黏膜吻合法临床应用

胰十二指肠切除术（pancfaficoduodenectomy，PD）是治疗壶腹周围疾病最常规的手术方式。然而，胰瘘仍然是PD最严重的并发症，发生率为6％～24％，死亡率为40％。胰管-空肠黏膜吻合法斟其对合合理，胰瘘发生率低，是常用的胰肠重建方式。2007年1月至2007年6月，我们在胰管-空肠黏膜吻合法的基础上再作改进，对36例行胰十二指肠切除术患者均采用无支撑管的胰管-空肠黏膜吻合法，取得了较好的效果，现报道如下。

胰腺破骨细胞样巨细胞肿瘤一例

病人男,54岁,因上腹胀痛不适半年入院.自1999年2月起病人感上腹胀痛不适,饭后加重,纳差,体重减轻约5kg.无返酸、嗳气,无黄疸、黑便等.B超及CT提示胰头占位病变,遂于1999年8月5日入我院普外科.入院查体:病人一般情况可,皮肤巩膜无黄染,未及肿大浅表淋巴结,中上腹部可触及约7 cm×7 cm肿块,质硬、轻压痛、界限不清,直肠指诊(一).辅助检查:Hb 119/L、总胆红素10.6μmol/L、白蛋白42 g/L、PT正常.CT提示胰头囊实性肿块.于1999年8月11日在全麻下行胰十二指肠切除术,术中见胰头部约6 cm×6 cm肿块,与肠系膜血管有粘连.术后24 d出院.