反义c-myc、增殖细胞核抗原基因片断抑制血管平滑肌细胞相关基因表达

目的研究有效的防治血管术后再狭窄的方法，以及应用反义ｃｍｙｃ、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因片断来封闭其相应基因表达的可行性。方法设计并合成ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ正义、反义及四个碱基错配的反义寡核苷酸，经体外稳定性检测和细胞转染实验证实其有效性后，分别作用于体外培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ），应用逆转录ＰＣＲ半定量测定及计算机图像分析的方法，观测其对ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ基因表达的影响。结果设计合成的寡核苷酸在血清培养基中１～５天未被完全降解；寡核苷酸能顺利进入ＶＳＭＣｓ内；１０μｍｏｌ／Ｌ浓度的反义ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ作用于ＶＳＭＣｓ后１～５天，其相应的ｃｍｙｃ和ＰＣＮＡ基因表达减弱，计算机图像分析表明其表达产物与对照组相比差异有显著意义（Ｐ＜０．０５），而正义和错配反义寡核苷酸无此效应（Ｐ＞０．０５）。

反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞c-myc、增殖细胞核抗原蛋白表达的影响

目的 研究反义c myc、增殖细胞核抗原 (PCNA)基因片断对血管平滑肌细胞 (VSMCs)增殖的作用。 方法 使正义、反义及错配反义c myc、PCNA ,分别作用于体外培养的VSMCs ,应用蛋白印迹和免疫组化法测定并经计算机图像分析 ,观察其对c myc、PCNA蛋白表达的影响。 结果 10μmol/L浓度的反义c myc、PCNA作用于VSMCs后 1～ 5d ,相应c myc和PCNA蛋白表达减弱 ,计算机图像分析表明其表达产物与对照组相比 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ,而正义和错配反义寡核苷酸无此效应 (P >0 0 5 )。 结论 反义c myc、PCNA寡核苷酸可通过阻遏其相应基因表达进而抑制蛋白表达及VSMCs增殖。