丹参对衰老鼠脑海马神经细胞凋亡作用的研究

目的 研究丹参对衰老鼠脑海马神经细胞凋亡的作用。方法 用 TUNEL法及流式细胞仪观察衰老鼠的神经细胞凋亡 ,并用免疫组织化学法检测相关基因表达变化。以丹参注射液干预衰老的大鼠模型 ,观察了丹参对衰老鼠神经细胞凋亡的作用。结果 衰老鼠海马细胞有典型的凋亡特征 ,与丹参组比较海马细胞的凋亡率有明显差异 ,衰老鼠 bcl- 2表达下调 ,而 bax的表达量明显增加 ,基因表达变化与流式细胞仪测定的细胞凋亡率相一致。

混合皮肤移植中IL-10在自体角朊细胞诱导局部免疫耐受中的作用

目的探讨IL10在混合皮肤移植中角朊细胞诱导的局部免疫耐受中的作用。方法利用已经建立的MELC体外模拟系统,检测在引入和未引入自体角朊细胞的实验系统上清中IL2、IL4、IL10和IFNγ的浓度,并用IL10基因敲除小鼠实验观察IL10在诱导抑制中的作用。结果在未引入自体角朊细胞的MELC体系中,表现的是典型的Th1相关的细胞因子动力学曲线,在加入自体角朊细胞后,则出现了细胞因子由Th1和Th2转换的动力学曲线,且IL10起着关键的作用,在以IL10基因knockout小鼠的角朊细胞去替代实验体系中的正常小鼠角朊细胞时,对自体淋巴细胞的同种异体增殖反应的抑制率虽有所下降,但无显著差异,而以IL10基因knockout小鼠的淋巴细胞替代实验体系中的正常小鼠的淋巴细胞时,对自体淋巴细胞的同种异体增殖反应的抑制作用被显著缓解,表明对抑制起关键调节作用的是自体淋巴细胞来源的IL10,而非自体角朊细胞分泌的IL10。结论在混合皮肤移植中,自体角朊细胞是通过激活Th2细胞,后者分泌大量的IL10和IL4等细胞因子来抑制Th1细胞增殖,从而抑制Th1亚群所介导的细胞免疫及移植物排斥来诱导局部免疫耐受的。

大网膜脂质血管生长因子提取及功能的初步研究

应用Goldsmith报道的方法稍加改进,建立了从人及兔大网膜中抽提脂质血管生长因子（LAF）的流程,发现不管是人或兔的LAF均可使兔角膜形成新生毛细血管网,而皮下脂肪抽提物及PBS均无此作用。将大网膜和皮下脂肪抽提物同时作高效薄层层析（HPTLC）,发现大网膜抽提物中有一特异条带,不同于皮下脂肪抽提物,紫外光谱分析表明其吸收峰在250 nm。还研究了LAF对小鼠胸腺细胞增殖及对PHA诱导IL-2产生的影响,结果表明具有抑制作用且呈剂量依赖关系。

系统性红斑狼疮患者外周血γδT细胞受体V区基因取用的初步研究

目的 探讨系统性红斑狼疮（ＳＬＥ） 患者外周血中γδＴ 细胞受体（ＴＣＲ）Ｖ 区基因限制性取用。方法 应用ＰＣＲ特异性扩增、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 及ＤＩＧ 杂交等方法检测在ＳＬＥ患者和正常人外周血中ＴＣＲγ链、δ链Ｖ 区基因的表达。结果 与正常对照相比，发现ＳＬＥ 患者在Ｖγ基因、Ｖδ基因均表现出限制性取用，在７ 例ＳＬＥ患者中均未检测到ＶγⅡ、Ｖδ４ 、Ｖδ６ 。结论 提示ＳＬＥ患者ＴＣＲγδ链基因组的变化可能造成γδＴ 细胞的抗原识别受体表达异常而识别自身抗原，造成组织损伤。

肾纤维化大鼠细胞免疫状态分析

目的探讨肾纤维化大鼠细胞免疫功能状态。方法建立阿霉素肾病大鼠模型,3H-TdR掺入法检测脾细胞增殖能力,流式细胞术检测外周血T细胞亚群、NKT细胞及Th1/Th2细胞。结果肾纤维化大鼠脾细胞对Con A诱导的增殖能力明显下降(P<0.05),T亚群细胞的比例发生改变,随着肾纤维化的进程,CD3+、CD4+所占比例降低,而CD3+、CD8+细胞增多,CD4+/CD8+逐步下降(P<0.05)。外周血CD3+、CD56+细胞却呈上升趋势,机体处于明显的Th2偏移状态。结论肾纤维化大鼠出现明显的细胞免疫功能紊乱。

微波非热效应对杂交瘤细胞的影响研究

电磁波谱(electromagnetic spectrum),根据其波长和频率的不同,依次可分为X射线、紫外线、红外线,微波和无线电波;从生物学效应的角度,又可分为电离辐射和非电离辐射.微波属于后者.随着现代生活方式的改变,人们与电磁波接触的频率不断上升,电离辐射(如X射线)对人体的影响已是众所周知,而非电离辐射对人体的影响正日益受到关注,但至今对此问题尚无定论。

CD44与肿瘤关系研究进展

分化抗原CD44与肿瘤发生、发展，尤其是肿瘤转移有密切关系。CD44分为标准型、上皮型及基因拼接变构体三种。本文介绍了与肿瘤关系密切的CD44v6、CD44v5等基因拼接变构体，阐明它们在肿瘤诊断、预后判断等方面的应用，并对可溶性CD44在临床诊断中的应用作了概述。

上海地区汉族人HLA-DQA1启动子多态性以及QAP、DQA1单元型连锁分析

目的：分析上海地区汉族人HLA-DQA1启动子（QAP）多态性，以及QAP与DQA1的连锁关系。方法：采用PCR-RFLP分析DQA1等位基因多态性；采用PCR-SSO检测QAP多态性。结果：在96个个体中检测到9种DQA1启动子（QA）等位基因。QAP与DQA1之间有3种连锁格局：①QAP与DQA1存在一对一关系；②一种QAP可与不同的DQA1组成多种单元型；③一种DQA1等位基因可受到多种类型的QAP调控。与意大利、德国人群比较发现QAP和QAP-DQA1单倍型频率在不同人群中存在差异。结论：上海汉族人中未发现新的QAP等位基因，但QAP等位基因的频率以及与DQA1的连锁格局和白种人相比有明显差异。

单克隆抗体治疗类风湿关节炎研究进展

类风湿关节炎是以滑膜炎为特征的自身免疫性疾病，迄今尚未能找到该病特异有效的治疗方法。近年对类风湿关节炎提出了一种新的发病机制，认为细胞在类风湿关节炎的滑膜炎中处于中心地位。目前，对免疫遗传因素促使关节炎发生以及Ｔ细胞和细胞因子对疾病的致病作用已有深入了解。因此，类风湿关节炎的免疫疗法已成为当今世界研究的重要课题，单克隆抗体治疗类风湿关节炎的研究正方兴未艾。并取得了一定疗效。

二步免疫印迹法的建立及在诊断类风湿关节炎中的意义

建立类风湿关节炎(RA)的特异性诊断方法。方法 用制得的可溶性核提取物为抗原,用免疫印迹法检测类风湿疾病患者血清中的RA33抗体。再以ENA为抗原,第2次用免疫印迹法检测RA33抗体阳性的病人血清中的RNP和Sm抗体。结果和结论 60例RA病人中22例阳性(36.6％),60例系统性红斑狼疮(SLE)病人中12例阳性(20％),两病的RA33抗体阳性率有显著性差别(P<0.05),而122例其他风湿性疾病和正常对照血清全为阴性。第2次免疫印迹法检测发现83％的RA33抗体阳性的SLE病人抗RNP(75％)和(或)抗Sm(33％)抗体为阳性,RA病人全阴性。这样用二步免疫印迹法检测可相对特异地诊断RA。

空肠弯曲菌HSP43诱导自身抗体产生

小鼠每周注射１次空弯菌ＨＳＰ４３共１０ｗ。ＨＳＰ４３抗体第４周起显著升高─直持续到１６ｗ，抗ｄｓ－ＤＮＡ、ｓｓ－ＤＮＡ自身抗体在６ｗ和１６ｗ出现两个高峰，抗ＤＮＡ自身抗体在４～１６ｗ逐渐升高，抗组蛋白抗体在８ｗ最高然后下降，单个小鼠自身抗体反应格局呈现４种类型。各类自身抗体的出现和升高与注射ＨＳＰ４３剂量有依赖关系。该结果为自身免疫病的热休克蛋白发病假设提供了直接的实验证据。

中国新疆维吾尔族、云南彝族KIR多态性分析

分析中国新疆维吾尔族、云南彝族健康人群的KIR基因多态性及单倍型特点。采用序列特异性引物PCR方法(PCR-sequencespecificprimer,PCR-SSP)对维吾尔族、彝族人群基因多态性进行低分辨率检测和单倍型分析。维吾尔族中共检出15种基因型,以AH(5,2)型最常见,频率为22.7%,其次为AF(1,2)和M(2,8),频率分别为13.7%,9.09%。在彝族中共检出19种基因型,以AJ(2,2)型最常见,频率为33.3%,其次为AF(1,2),频率为17.5%。此外,在维吾尔族、彝族中共发现8种新基因型,提示中国少数民族有着自己独特的KIR基因分布频率、单倍型频率和基因型频率。

人精浆酸性磷酸酶对小鼠T淋巴细胞产生IFN—γ及MΦ产生TNF－α的影响

人精浆中富含酸性磷酸酶（ＡＣＰ），但其生物学功能尚不明确，本实验室从正常人精浆中分离纯化了比活为５２０．３６ＩＵ／ｍｇ的ＡＣＰ，并观察其对Ｂａｌｂ／ｃ小鼠脾脏来源Ｔ淋巴细胞产生ＩＦＮ－γ的影响及对小鼠ＰＥＣ—ＭΦ产生ＴＮＦ—α的影响。实验证明，ＡＣＰ可明显抑制Ｔ淋巴细胞产生ＩＦＮ－γ的能力（Ｐ＜０．０５），同时也可完全抑制ＰＥＣ－ＭΦ产生ＴＮＦ—α的功能。提示：ＡＣＰ可能是精浆中免疫抑制因子的组成成份之一，作用于免疫细胞可对局部的细胞因子网络起负调节作用。

一种新的肿瘤相关蛋白-OVA12和抗体制备及其初步应用

目的 制备原核表达的OVA12纯化蛋白 ,研究正常人与肿瘤患者血清中抗OVA12抗体水平的差异。方法 克隆OVA12的cDNA至pGEMT载体中 ,经测序确证后 ,将该基因插入原核表达载体pET32a( +)中 ,并转化至E .coli表达菌BL2 1(DE3)中 ,诱导 6×His融合蛋白表达 ,经Ni2 + 亲和层析及胶回收技术纯化蛋白 ,并将蛋白免疫动物制备兔抗OVA12蛋白抗体 ;采用ELISA、Dotblot、Westernblot法比较正常人及肿瘤患者血清中抗体水平的差异。结果 获得纯化OVA12蛋白及高滴度的兔抗血清 ;ELISA法测定显示 ,正常人组OD均值为 0 17± 0 0 7,肿瘤患者组OD均值为0 32± 0 15 ,两组之间有显著性差异 (P <0 0 0 0 1) ,并选择其中样本经Westernblot、Dotblot加以进一步证实。结论 成功克隆OVA12基因 ,并获得纯OVA12蛋白和高滴度的兔抗血清 ;ELISA等方法测定肿瘤患者与正常人血清中OVA12抗体水平有明显差异 ,为临床检测的应用奠定基础。

树突状细胞在5/6肾切除大鼠中分布及与肾间质纤维化的关系

目的 探讨树突状细胞 (DC)在 5 / 6肾切除大鼠肾小管间质中分布及其与肾间质纤维化的关系。方法 5 4只SD大鼠均分为正常组、假手术组、模型组 (切除 5 / 6肾 ,建立慢性肾功能衰竭模型 )。分别于建模第1、4和 12周 ,采用免疫双标记染色及荧光图像分析法 ,观察CD1a +CD80 +DC在各组大鼠肾组织中的分布变化 ;采用免疫组织化学及半定量分析 ,观察黏附分子P 选择素以及转化生长因子 (TGF) β1、结缔组织生长因子 (CT GF)、α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)、Ⅲ型胶原 (ColⅢ )、纤维连接蛋白 (FN)在上述肾组织中的表达改变 ;此外采用Masson染色评定各组肾小管间质纤维化 (TIF)程度。结果 ①模型组CD1a +CD80 +DC主要分布于肾小管、肾间质和肾血管 ,以肾间质最为明显 ;其分布数量于建模后第 12周较第 1、4周明显增多 (P <0 .0 1) ,且与肾功能指标血尿素氮 (BUN)、血肌酐 (SCr)、内生肌酐清除率 (Ccr)明显相关 (r值分别为 0 .2 5 4、0 .2 6 3、- 0 .36 7,P值<0 .0 5～ 0 .0 0 1) ;② 12周时 ,P 选择素、TGF β1、CTGF、α SMA、ColⅢ、FN以肾小管间质为主表达以及TIF程度均明显增加 ,并与CD1a +CD80 +DC分布数量成正相关 (r值分别为 0 .5 6 6、0 .4 77、0 .4 2 5、0 .2 88、0 .4 0 8、0 .4 95、0 .82 3,P值

cDNA微阵列技术比较胚胎大鼠脑和脊髓神经干细胞的基因差异表达

目的 从分子水平探讨脑和脊髓来源的神经干细胞(NSCs)的生物学特性,并鉴定这两种来源的NSCs 的分子表达差异。 方法 应用cDNA微阵列技术对脑和脊髓来源的NSCs的基因表达情况进行检测和比较,在成 功分离、培养和鉴定脑和脊髓两种来源的NSCs的基础上,抽提细胞总RNA并纯化、定量,以32P逆转录标记合成 cDNA探针。AltasTMcDNAExpressionArray(ClontechCo)与探针杂交、洗膜后在磷屏上曝光并扫描成像,以Arrayvision 5.1软件分析杂交结果。 结果 cDNA阵列膜上覆盖的1176个基因中,绝大部分基因表达无明显差异,但也有14 个基因在两种来源的NSCs中的表达有显著差异,其中8个在脑来源的NSCs中表达较高,6个在脊髓来源的NSCs 中表达较显著。在两种来源的NSCs都明显表达的基因中,许多分子如P 选择素(P selectin)、钙黏素(cadherin)、乙酰 胆碱受体α、cyclins、某些转录因子和原癌基因等可能在NSCs的自我更新(增殖)、神经球形成和保持不分化状态中 起重要作用。 结论 两种来源的NSCs的生物学特性基本相同,但也存在一定的差异。

树突状细胞在肾缺血-再灌注损伤中的分布与作用

目的 :探讨树突状细胞 (DC)在肾缺血再灌注损伤大鼠肾组织中的分布与作用 ,以及抗 P 选择素单克隆抗体 (单抗 )对 DC的影响。方法 :建立肾缺血再灌注损伤大鼠模型 ,随机分为 P选择素单抗治疗组(n=2 0 )和非治疗组 (n=2 0 ) ,按不同再灌注时间 (1、3、6和 2 4 h)再各分为 4组 ;另设假手术组 (n=5 )作为对照。采用荧光图像分析法观察 CD1 a+ CD80 + DC在各组大鼠肾组织中的分布 ;采用免疫组织化学 (组化 )链霉菌抗生物素过氧化物酶复合物 (L SAB)法检测 P 选择素在上述肾组织中的表达。结果 :1 CD1 a+ CD80 + DC在假手术组大鼠肾组织中分布甚少 ;而在非治疗组显著增多 (P<0 .0 0 1 ) ,且主要分布于肾小管、肾间质和肾血管 ,以肾小管间质最为明显 ,其分布和数量自再灌注 1 h起出现增多 ,于 2 4 h时为最高 (P<0 .0 1 ) ,并与大鼠血尿素氮和肌酐呈正相关 (P均 <0 .0 5 )。2缺血再灌注 1 h后 ,P 选择素在肾组织中广泛表达 ,以肾小管上皮细胞为主。 3经抗 P选择素单抗治疗后 ,大鼠肾组织 P选择素的表达下调 ,随之 CD1 a+ CD80 + DC分布及数量减少 (P<0 .0 5和 P<0 .0 1 ) ,继而肾组织病理损伤和肾功能也相应减轻和改善。结论 :DC可能参与了缺血再灌注肾损伤的炎症免疫病理过程 ,并可能与

两种抑制MHCⅡ类分子表达方法的比较

目的:评价cⅡTA(MHC class Ⅱ transactivator,CⅡTA)基因突变体和反义RNA对MHCⅡ类分子的抑制效率和胞内稳定性,为改造MHC分子奠定基础。方法:用PCR、酶切及连接技术,构建不含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA2,含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA3突变体及CⅡTA基因的反义RNA-pcDNA3/CⅡTA反。用脂质体转染法,将突变体、反义RNA及空载体pcDNA3转入PIEC细胞和L23细胞中。持续四个月,流式细胞术观察它们对PIEC/L23细胞株MHCⅡ类(SLA-DR)分子的诱导性和组成性表达的影响。结果:转染pcDNA3、pcDNA3mCⅡTA2后,PIEC/L23细胞SLA-DR的表达没有受到抑制,转染pcDNA3mCⅡTA3后,9/20(45．0％)的PIEC细胞、10/20(50．0％)的L23细胞SLA-DR的表达受到明显抑制,抑制率高达 90％以上;转染pcDNA3mCⅡTA反后,7/15(46．7％)PIEC细胞、5/15(33．3％)L23细胞SLA-DR的表达受到明显抑制,抑制率高达85％以上。持续检测4个月,转染pcDNA3mCⅡTA3的PIEC/L23细胞SLA-DR的表达受抑率均在90％以上。转染反义 RNA的PIEC/L23细胞在第65/45天,SLA-DR表达抑制率降至10％以下。结论:构建成功的CⅡTA突变体和反义RNA均能有效抑制SLA-DR表达,但CⅡTA突变体稳定存在于胞内的时间长,构建突变体是利用CⅡTA抑制MHCⅡ类分子的好方法。

西那普利片在人体的相对生物利用度

目的 :研究国产西那普利片在人体的药动学和相对生物利用度。方法 :采用随机交叉试验设计 ,12名健康男性志愿者单剂量西那普利片试验品与参比品各 2 5mg,po ,以放射酶学分析法对血浆中活性代谢产物西那普利拉进行定量测定。结果 :试验品与参比品的tmax分别为 (2 1± 0 4 ) ,(2 0± 0 5 )h ;cmax分别为 (10 2 7± 6 8) ,(10 4 6± 9 1)ng·mL-1;AUC0→t分别为(95 5 6± 2 73 7) ,(10 2 2 0± 42 8 7)ng·mL-1·h ;MRT0→t分别为 (18 8± 6 5 ) ,(19 5± 7 3)h。经交叉试验方差分析 ,上述药动学参数均无统计学差异 (P >0 0 5 )。试验品与参比品的cmax与AUC0→t经双单侧t检验分析 ,P >0 0 5。试验品的相对生物利用度为 (98 92± 17 87) %。结论 :试验品与参比品具有生物等效性。

溶脲脲原体感染对小鼠T淋巴细胞增殖和B淋巴细胞产生特异性抗体的影响

溶脲脲原体（Ｕｒｅａｐｌａｓｍ ａ Ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ ，Ｕ．Ｕ．）是泌尿生殖道感染的常见病原体，在Ｕ．Ｕ．上行性感染的动物模型中，大鼠睾丸出现明显的病理损伤。本文主要探讨Ｕ．Ｕ．感染（或作用）对小鼠Ｔ、Ｂ淋巴细胞功能的影响。体外实验，以对数生长期的Ｕ．Ｕ．、热灭活Ｕ．Ｕ．和Ｕ．Ｕ．上清（不含Ｕ．Ｕ．）感染（或作用）小鼠Ｔ淋巴细胞（脾细胞来源），采用ＭＴＴ法检测Ｔ淋巴细胞的增殖活性。体内实验，以上述Ｕ．Ｕ．感染（或作用）正常ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，于ｄ５用ＳＲＢＣ免疫各小鼠，免疫后ｄ５测定各小鼠血清抗ＳＲＢＣ抗体凝集效价。结果表明：对数生长期的Ｕ．Ｕ．及热灭活Ｕ．Ｕ．和Ｕ．Ｕ．上清均能明显抑制小鼠Ｔ淋巴细胞的增殖和Ｂ淋巴细胞产生特异性抗体的能力，与对照组相比，有显著差异，Ｐ＜ ０．０１或０．０５。提示，Ｕ．Ｕ．感染可直接影响Ｔ淋巴细胞和Ｂ淋巴细胞的功能。