缺血性疾病的基因治疗

动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄等引起的缺血性疾病,严重危害人类的健康。基因治疗的目的是在某些细胞上产生瞬间的和局部特异的作用,因此降低细胞增生和基质形成,为缺血性疾病提供了一种很有希望和前景的治疗手段。在很多缺血动物模型中,抑制平滑肌细胞的增生,防止血栓的形成及抑制再狭窄的发生,从而改善缺血区的血供,缓解和治疗缺血症状;或者应用促血管生成因子,促进新生血管的产生,形成血管床。

细胞周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌细胞迁徙的关系

从基因芯片筛选出差异表达的基因中一个细胞周期蛋白 (cyclin)E2基因 ,深入研究周期蛋白E2在高转移性胃腺癌细胞系RF 4 8细胞中的生物学作用 .首先通过合成硫代磷酸化修饰的反义、正义和错配寡核苷酸片段 ,使用半定量RT PCR和Western印迹方法分别检测被 3种寡核苷酸转染的RF 4 8细胞在 1～ 5d内周期蛋白E2基因及它可能调控下游靶基因之一FGFR基因和蛋白质的表达 ,检测寡核苷酸转染的RF 4 8细胞周期和凋亡细胞 ,观察寡核苷酸转染RF 4 8细胞的软琼脂集落形成、运动能力和体外侵袭能力 .结果表明 ,修饰的反义寡核苷酸在有效地抑制RF 4 8细胞中周期蛋白E2表达上调后 ,RF 4 8细胞的迁徙能力被显著降低 ,其增殖、运动能力没有变化 .周期蛋白E2基因的主要作用并不是促细胞分裂 ,也与细胞的增殖、运动能力无关 ,周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌的迁徙性存在相关性 ,其触发肿瘤的侵袭性可能通过某种机制调控其下游靶基因之一成纤维细胞生长因子受体 (FGFR)

荧光差异显示PCR克隆参与胃腺癌转移的基因wcl1

使用来源于同一个胃腺癌病人的原发灶RF 1(ATCC编号CRL 186 4 )和转移灶RF 4 8(ATCC编号CRL 186 3)作为研究肿瘤转移的模型 .通过荧光差异显示PCR(FDD PCR)技术 ,克隆了 4 5个涉及胃腺癌转移相关基因 .和原发灶CRL 186 4相比 ,发现在转移灶CRL 186 3细胞中有 38个基因被显著上调 ,7个基因被显著下调 ,包括未被发现的基因 3个 .利用生物信息学技术对其中 1个在RF 4 8中高度上调的wcl1进行克隆和鉴定 ,发现wcl1的cDNA全长为 6 6 4bp ,含有 1个 2 4 0bp的完整阅读框 .用RT PCR和Northern印迹证实 ,结果与克隆拼接的大小完全一致 (NCBI数据库收录号AF36 4 86 3) .wcl1编码肽位于胞浆内含 79个氨基酸 ,理论上的pI Mr:5 2 8 896 1 72 .氨基酸序列分析发现 ,其N端 4～ 5 5氨基酸处为未知功能区UPF0 0 16蛋白 ,5 7～ 78处有一段亮氨酸拉链结构域 ,未发现与已知的蛋白质有高度的同源性 .该基因定位于 11q14.组织分布表明 ,wcl1除在分化差的胃腺癌中的表达要高于相应的正常胃组织 ,在微血管内皮中表达也明显高于乳腺管癌、脑纤维状星形细胞瘤 ,未检测到在其它组织有分布 .研究提示 ,Wcl1可能为胃腺癌转移过程中参与核内基因转录的相关蛋白质 .

反义寡核苷酸抑制血管平滑肌细胞增殖

目的 证实反义 c- myc,PCN A寡核苷酸阻遏血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的效应 .方法 人工合成正义、反义及错配反义 c- myc,PCN A寡核苷酸 ,转入体外培养的 VSMC中 ,分别于作用后 1～ 5 d进行细胞计数和 3H- Td R掺入法测定 .结果 加入反义 c- myc,PCN A寡核苷酸的 VSMC增殖受到抑制 ,而正义和错配反义寡核苷酸对 VSMC增殖没有明显影响 .结论 反义 c- myc,PCN

HSV-TK/GCV系统对小鼠肝癌细胞旁杀伤效应的观察

目的 研究单纯疱疹病毒-胸苷激酶/9-(1,3-二羟-2-丙氧甲基)鸟嘌呤(HSV-TK/GCV)系统对小鼠肝癌细胞旁杀伤效应。方法 应用逆转录病毒载体介导HSV-TK基因修饰MM45T.Li细胞,命名为M45/TK,将M45/TK细胞或M45/TK细胞与未经基因修饰的M45细胞等比例混合接种Balb/c小鼠皮下,联合应用GCV,观察其致瘤性及其体内的旁杀伤效应。免疫组化分析肿瘤组织中免疫细胞的浸润情况。结果 M45/TK细胞在小鼠体内致瘤性显著下降(P<0.01),说明在体内GCV对M45/TK也很敏感,并且M45/TK细胞在小鼠体内具有明显旁杀伤效应,即肿瘤生长明显受到抑制(P<0.05)。M45/TK细胞联合GCV治疗组的肿瘤组织中有较多的CD4^+,CD8^+淋巴细胞浸润。结论 HSV-TK/GCV系统对小鼠肝癌细胞具有良好的旁杀伤细胞效应,并提示机体的免疫反应,可能参与增强自杀基因系统的旁杀伤效应。

基因修饰肿瘤疫苗研究进展

近年来基因修饰肿瘤疫苗包括ＭＨＣ分子、共刺激信号Ｂ７分子及各种细胞因子基因修饰的肿瘤疫苗，在体内外试验和基础研究中取得了相当的进展，本文主要对其作用机理进行了小结。肿瘤细胞表达外源ＭＨＣ、Ｂ７分子，使宿主免疫系统能有效识别、杀伤肿瘤；表达某些细胞因子（如ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α等）能诱导产生ＣＴＬ，而某些细胞因子则激发非Ｔ细胞的杀伤作用（如ＩＬ－４、Ｇ－ＣＳＦ诱导中性粒细胞的炎症反应，ＩＬ－２诱导ＮＫ细胞的杀伤作用，ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＦＮ－γ等诱导肿瘤局部Ｍφ的浸润）。