上海地区汉族人血栓调节蛋白基因1418位多态性研究

目的:探讨上海地区汉族人群中血栓调节蛋白(TM)胞外编码区基因片段是否存在多态性。方法:以基因组DNA为模板,用PCR扩增目的片段,构建测序质粒,进行测序分析。结果:28名上海地区汉族正常人标本中,TM1418位基因型为T/C16名、T/T10名、C/C2名。结论:上海地区汉族人群中TM胞外编码区基因片段1418位存在C/T两态,且以基因型T/C(表型为TM455V/A)和T/T为主(白人和黑人以基因型C/C为主),等位基因T的频率(64.3%)明显高于白人(<35%)和黑人(<7%)。

抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4～5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9～ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb 。

一种新的免疫-PCR系统的建立和应用研究

把PCR技术作为指示系统引入免疫检测中，建立了免疫－KR技术。在本研究中，以PEI作交联剂，首次成功地将特异性抗体直接与DNA交联，构建了三种Ab－DNA基因探针，组成新的免疫-PCR检测系统．此三种特异性汕Ab-NDA探针可用于检测三种相应抗原。检测HSA抗原的最低含量可达10－10mg／ml，灵敏度比ELISA高106倍。

磁珠分离酶联免疫测定法在检测人血清肌红蛋白中的应用

目的 建立一种宽范围的定量检测人血清肌红蛋白(Mb)的磁珠分离酶联免疫测定法。方法 使用 国产聚苯乙烯磁珠,经碳化二亚胺活化表面自由羧基,得以与抗Mb单抗偶联,用此抗体包被磁珠作为固相,另 一Mb单抗标记辣根过氧化物酶,做双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人血清Mb,共检测临床血清标 本50份,并与常规板式ELISA作对比。结果 磁珠酶免疫定量检测方法用于人血清Mb定量检测范围可从常 规板式ELISA的5～200μg/L扩展到5～1000μg/L。结论 利用国产磁珠建立的磁珠分离酶免疫定量检测 Mb方法优于常规板式ELISA。

HEV Ⅳ型ORF2编码蛋白N-端合成肽的抗原性检测

目的 检测戊型肝炎病毒 (HEV)Ⅳ型开放阅读框架 2 (ORF2 )编码蛋白N 端表位的抗原性 ,寻找良好的抗原肽 ,以便用于HEV抗体测。方法 根据HEVORF2编码蛋白N 端中含有的抗原表位 ,从HEV中国株蛋白的氨基酸序列中选取 2 5～ 38位序列氨基酸 ,用固相化学合成法合成抗原肽 ,并用ELISA检测抗原性。结果 HEVⅣORF2编码蛋白N 端氨基酸顺序为2 5～ 38的抗原肽与急性期戊型肝炎病人血清有较高的反应性 ,与Genelab诊断试剂盒的符合率达 93.8%。结论 为提高HEV抗体的检出率 ,在包被抗原中应含有HEVⅣ型ORF2编码蛋白N

纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物的检测与临床应用

纤溶酶－α２抗纤溶酶复合物（plasmin－α２－antiplasmin complex,PAP）是机体纤溶活性与抗纤溶活性的产物。ＰＡＰ标志着体内纤溶酶的生成和纤溶平衡机制，是反映机体许多生理病理状态的良好指标。本文就ＰＡＰ的实验室检查以及其临床应用作一综述。

纤溶酶-α_2抗纤溶酶复合物单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :制备纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (PAP)的单克隆抗体(mAb)。方法 :以从血浆中纯化的PAP免疫BALB/c小鼠。按常规方法融合 ,以固相等分子浓度的纤溶酶原、α2 抗纤溶酶(α2 AP)及PAP为抗原 ,建立间接ELISA筛选杂交瘤细胞培养上清 ,并对杂交瘤细胞分泌的mAb的特异性和亲和力进行鉴定。结果 :共获得 2 4株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞。其中 ,针对PAP分子中纤溶酶结构的mAb 16株 ,针对α2 AP结构的mAb 1株 ,针对新抗原 (PAP分子中新出现的不同于前体分子纤溶酶原及α2 AP的抗原决定簇 )结构的mAb 7株。这些腹水中抗PAPmAb的滴度为 2× 10 -4～ 1× 10 -8,其中 4株mAb的亲和常数为 5 .6 2× 10 -9～ 3.5 8× 10 -11mol/L之间。结论 :成功地制备针对PAP新抗原的具有高亲和力的mAb ,为建立不受其前体分子干扰的PAP特异性检测方法 ,研究纤溶系统的激活状态提供了工具。

用双标记水示踪法测定人体自由活动时的能量消耗率

本文报道用１８Ｏ和２Ｈ双标记水测定人自由活动时能量消耗率的示踪方法及正常成人的初步测定结果。根据质谱测量精度将ＨＯ和２Ｈ２Ｏ测量定为１．０ｇ／ｋｇ（丰度１４．４５％）和０．０６ｇ／ｋｇ（丰度９９．９％），一次口服后在１４ｄ内间歇性收集尿样５次，然后从１８Ｏ和２Ｈ时相曲线斜率的差别，并加入同位素分馏校正因子，算出整体ＣＯ２产生率，再根据食物组成估计呼吸商，求出能量消耗率。测得１０例正常实验室工作人员的结果是：男性和女性平均为２０８．８±１４．２和１９２．０±２３，ｋＪ·ｋｇ－１·ｄ－１。３例住院康复人员平均为１５４．０ｋＪ·ｋｇ－１·ｄ－１。

非小细胞肺癌患者血清血管内皮生长因子测定的临床意义

目的:监测血清血管内皮生长因子(VEGF)对评估非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的判断价值。方法:采用ELISA方法检测54例NSCLC患者血清VEGF的含量,分析血清VEGF水平与反映病程进展情况的TNM分期中T、N、M各参数以及患者生存期之间的关系。结果:血清VEGF水平与肺癌侵袭范围密切相关,T3鄄T4患者血清VEGF升高率明显高于T1鄄T2患者(P<0.01)。血清VEGF水平与淋巴结转移程度密切相关,N3患者血清VEGF较N1鄄N2患者明显升高(P<0.01)。有远处转移的患者中72.7%(16/22)血清VEGF升高,而无远处转移的患者血清VEGF升高仅40.6%(13/32),两者差异有显著性(P<0.05)。血清VEGF与患者生存期亦密切相关,生存≥6个月者37.5%(9/24)的患者血清VEGF升高,而生存期<6个月者66.7%(20/30)的患者血清VEGF升高,两者间差异有显著性(P<0.05)。结论:血清VEGF与NSCLC患者的病程进展及生存期相关,是一种有用的预后判断指标。

促甲状腺激素单克隆抗体的制备和应用

目的:获得高效价、高特异性的促甲状腺激素(TSH)单克隆抗体,为建立高灵敏度的促甲状腺激素水平的测定方法奠定基础.方法:采用细胞融合技术,以TSH抗原免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合.通过多次阳性筛选和有限稀释,建立了抗人TSH单克隆抗体杂交瘤细胞株.并对所建立的单抗进行了鉴定.结果:细胞融合率达100%,阳性率15%.共建立了5株杂交瘤细胞株,均属IgG1类.且与FSH、HCG、LH无交叉反应.McAb腹水效价在1:5×105～1:1×107.6个月液氮冻存后复苏培养测定细胞株的稳定性好.结论:本实验的融合率高,阳性率较高,所建立的细胞株的特异性高,McAb腹水效价高.为提高TSH检测的灵敏度和简便性提供了重要条件.

粘放菌5951Ⅱ型菌毛多克隆抗体抗血清的制备

目的 制备粘放菌 5 95 1Ⅱ型菌毛兔抗血清。方法 采用物理、化学方法提纯Ⅱ型菌毛 ,多途径免疫制备兔抗血清 ,双向免疫扩散法鉴定兔抗血清。结果 提纯的Ⅱ型菌毛分子质量主要为 34ku ,多途径免疫后效价可达1:6 4。结论 粘放菌 5 95 1Ⅱ型菌毛蛋白分子质量为 34ku ,抗体效价为 1∶6 4。

MAPs技术合成抗原肽在戊型肝炎诊断中抗原性初探

目的 将多聚抗原肽 (MAPs)技术用于免疫测定 ,为诊断戊型肝炎寻找更好的诊断试剂盒。方法 根据戊型肝炎病毒 (HEV)开放阅读框架 2 (ORF2 )中含有的抗原表位 ,从戊型肝炎病毒中国株蛋白的氨基酸序列中选取S 30段抗原肽 ,用固相合成法分别进行化学合成普通线形抗原肽和MAPs肽段 ,并用ELISA分别检测其抗原性。结果 与国外试剂盒相比较 ,两者的符合率有差异。但MAPs肽段的符合率高于普通线形抗原肽 ,在检测灵敏度、特异性上MAPs肽段明显优于普通线形抗原肽。结论 以单一的戊型肝炎的抗原表位肽检测戊型肝炎存在漏检。在MAPs技术的基础上 ,合成多肽抗原的灵敏度得到明显提高。

糖原磷酸化酶同工酶BB及其应用

糖原磷酸化酶是糖酵解代谢过程的限速酶。

血清肌红蛋白两点一步法ELISA的建立和初步临床应用

血清肌红蛋白两点一步法ＥＬＩＳＡ的建立和初步临床应用朱鼎宏，曾瑞云，郑佐娅，王红，陶义训肌红蛋白（Ｍｂ）是一种含亚铁血红素的低分子色素蛋白，心肌内含量丰富，当心肌受损时，可迅速从受损细胞释放至血液中［１］，因此检测血清Ｍｂ能协助诊断急性心肌梗塞（Ａｃ...

人甲状腺球蛋白测定酶联免疫吸附试验方法的建立及应用

目的建立一种简便、快速、灵敏、可靠的测定甲状腺球蛋白的酶联免疫吸附试验方法。方法在纯化甲状腺球蛋白 (TG)的基础上 ,制备出 TG单克隆抗体 ,并用纯化的 TG多抗包被 ,酶标记单克隆抗体 ,建立双抗体夹心 EL ISA。结果经临床 5 0例健康人测定 ,其范围在 9～ 16 μg/ L。方法的批内变异为 7.76 %～ 9.6 9% ,批间变异为 12 .3%～ 12 .6 %。检测低限为 0 .13μg/ L,可定量报告低限为 1.0 μg/ L。结论人甲状腺球蛋白 EL