柯萨奇-腺病毒受体基因的原核表达和多克隆抗体制备

目的利用原核基因工程克隆表达柯萨奇-腺病毒受体(CAR)胞外段,并制备多克隆抗体。方法从HeLa细胞中抽提总RNA,通过RT-PCR获得编码CAR胞外段的cDNA,与pQE31质粒连接,构建表达型重组质粒,测序证实后诱导表达,经Ni-NTA柱亲和纯化后,免疫新西兰兔,ELISA检测抗血清滴度。结果重组质粒转化的大肠杆菌M15经IPTG诱导表达及亲和纯化后得到滴度较高的融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot显示其分子量约为26 kd,具有特异的抗原性,主要以包涵体形式存在于菌体中。纯化的融合蛋白免疫新西兰兔后产生的抗体,经ELISA检测抗体滴度>1:32 000。结论CAR胞外段基因的克隆表达和多克隆抗体的制备,为进一步研究该受体在以腺病毒载体为基础的基因治疗中的作用及柯萨奇病毒的致病机制奠定了基础。

生殖道支原体和男性不育关系的研究

对173名不育男子精液进行溶脲脲原体和人型支原体培养分离及精液常规分析。溶脲脲原体检出率为41.04%,人型支原体检出率为12.72%,二种支原体共同检出率为5.78%。正常对照25人,仅3人分离到溶脲脲原体(p<0.005),未有人型支原体检山。部分感染患者服用强力霉素治疗,随访复查表明强力霉素消除溶脲脲原体感染效果明显。支原体感染病人精液常规分析显示,其精子活动力与活动率与正常人相比,差异很大(p<0.01)。提示生殖道支原体与部分男性不育有一定关系。