多聚酶链反应——一种在微生物领域具有巨大潜在应用价值的新技术

近年来发展的多聚酶链反应能将极微量的DNA样品特异地放大几十万倍,从而大大提高了对DNA分子样品的检测能力,且方法极为简便、快速、敏感,因而目前应用广泛。本文介绍了这种技术的基本原理、方法和近几年的发展,着重探讨了这种技术在微生物学领域中的应用和发展前景。

微生物基因组全序列分析进展

目前已经测定了13种微生物的基因组全序列,为追踪生物进化网络提供了宝贵信息。本文综述了已经取得的重要成果,并提出进一步研究的意见。

卵巢癌浸润淋巴细胞的生物学特性研究

目的 :研究卵巢癌浸润淋巴细胞 (TIL)在体外扩增后生物学特性 ,评估TIL用于晚期卵巢癌治疗的前景。方法 :利用流式细胞仪分析TIL的细胞表型 ,使用分子生物学和免疫学方法研究TIL分泌细胞因子的能力和杀伤肿瘤细胞的活性。结果 :TIL细胞表型的差异可能与肿瘤的种类、性质、取材部位有关 ,结缔组织、基质中来源的TIL以CD3+ CD4+ 为主 ,肿瘤组织和小血管周围以CD3+ CD8+ 为主 ,体外IL 2的浓度对TIL的免疫学特性有很大的影响。经rIL 2扩增后 ,TIL分泌产生IL 2、TNF α、IFN γ等多种细胞因子能力及杀伤肿瘤细胞的活性均有明显提高。再加入抗CD3单抗或PHA(合适浓度 ) ,TIL细胞因子表达可进一步增强。TIL联合磷酰胺或IL 2治疗晚期卵巢癌患者 ,可显著改善患者外周血细胞表型 ,具有一定的疗效。结论 :TIL在体外经rIL 2扩增后 ,免疫活性有明显提高。体内肿瘤细胞的消退可能主要并不是通过输入的TIL直接杀伤肿瘤细胞 ,而是在很大程度上依靠其分泌多种细胞因子增强了机体细胞免疫活性和免疫调节能力。TIL辅助其它疗法可成为晚期卵巢癌患者的一种有效治疗手段。

肾细胞癌TIL生物学特性及应用探讨

采用胶原酶的单酶冷消化法,分离培养37例肾细胞癌患者的肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltra-ting lymphocytes,TILs)。结果发现,采用该法分离培养的 TILs 呈现以激活的 T 淋巴细胞为主、高增殖活性和高杀伤活性的特征。逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)检测结果提示,TILs 激活扩增后主要分泌产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α),其可能在 TILs 发挥抗肿瘤活性中起重要作用。应用结果显示,治疗后患者外周血淋巴细胞表型分析,90%以上患者 CD3^+细胞和70%患者 CD8^+细胞得到提高。机体的细胞免疫水平提高。

幽门弯曲菌的生物学地位

本文就近年关于幽门弯曲菌的形态、培养、生化特征,菌体脂肪酸成分及G+Cmol%含量分析,主要抗原及菌体蛋白电泳,限制性核酸内切酶酶切分析,16s rRNA部分核苷酸序列分析七个方面,同空肠、结肠、胎儿弯曲菌进行了比较。

上海地区育龄期妇女、孕妇及其新生儿巨细胞病毒感染的调查

为调查上海地区人巨细胞病毒(HCMV)的感染情况,作者用间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测1048份育龄期妇女、289对孕妇及其胎儿血清标本中HCMV特异性抗体。育龄期妇女HCMV-IgG阳性率为93.5％,<18岁、20～29岁和30～45岁组分别为54.9％、89.7％及95.4％,感染率随年龄增长而增加。HCMV感染与社会经济情况及婚姻状况有关。273份母血和266份脐血HCMV-IgG阳性,阳性率分别为94.46％和92.04％。HCMV-IgM阳性者母血13份,脐血10份,阳性率分别为4.49％和3.46％,表明产妇与其新生儿HCMV-IgM检出情况是密切相关的,胎儿可以从其HCMV-IgM阳性的母亲获得先天性感染。

上海地区育龄妇女中巨细胞病毒感染的调查

用间接EIJSA方法对上海地区1048名育龄期妇女血清进行了人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus HCMV)航体的检测,结果HCMV-IgG抗体阳性率为93.5%,提示HCMV在育龄期妇女中的感染相当普遍。16～18岁、20～29岁和30～45岁三个年龄组,HCMV-IgG抗体阳性率分别为54.9%、89.7%和95.4%,表明HCMV的感染率随年龄增长而增加。该调查还同时表明HCMV感染与社会经济情况及婚姻状况有关。

上海地区麻鸭血中DHBV及其形态学的研究

本文应用电镜等方法对上海地区麻鸭中鸭乙型肝炎病毒(DHBV)及其形态学进行了研究。104只麻鸭血清标本DHBV阳性率为68.5%,其中1日～1月龄组为93.3%,6～12月龄组为72.7%,1～2年龄组为56.6%,表明DHBV阳性率随鸭龄增长而不断下降。鸭血清中除存在DHBV的40～45nm完全颗粒与40～60nm空心颗粒外,还发现一种20～30nm的小球形颗粒。鸭肝组织超薄切片的电镜观察,在肝细胞浆内质网中找到DHBV颗粒,同时在胞浆与核内均找到35～37nm裸露的核心颗粒。

脐血淋巴细胞生物性状的初步观察

为了开发利用正常胎儿脐血作为淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ）免疫治疗的细胞来源。本实验研究了脐血淋巴细胞的增殖能力、ＮＫ活性及细胞表型等。研究发现１．脐血淋巴细胞含量多、得率高和增殖快；２．脐血淋巴细胞增殖和分化表明：体外培养初期（７ｄ以内）其ＮＫ活性很低，经白细胞介素－２（ＩＬ－２）刺激培养１周后ＮＫ活性从２７．９％提高至７９．６％（Ｐ＜０．０５）。同样脐血淋巴细胞在培养初期较为幼稚，通过体外经ＩＬ－２等刺激后渐趋成熟，比例明显升高，分别为７６．４％、１３．６％、７０％和８５％，表明脐血可作为ＬＡＫ细胞的重要来源。

苦参总碱对小鼠脾细胞产生干扰素的影响

作者为了解苦参是否通过诱生干扰素而参与抗病毒作用,用微量细胞病变抑制法对苦参总碱在体外诱生小鼠脾细胞产生干扰素的作用进行了研究。结果表明苦参浓度在50～200μg/ml 能明显诱导脾细胞产生干扰素,且能明显对抗氢化考的松的抑制作用而促进干扰素产生增加,其作用与药物浓度(50～200μg/ml呈正相关。所以苦参可能通过诱导干扰素产生而发挥其抗病毒作用。

细胞凋亡荧光染色法检测肿瘤化疗药物敏感性并与MTT法的比较

本文根据化疗药物诱导肿瘤细胞产生凋亡的机制,采用细胞凋亡荧光染色法(AFS)分别检测了卵巢癌细胞株(3AO)、部分肺癌患者分离的癌细胞药物敏感性,并和传统的ATT法进行比较.用不同浓度的顺铂诱导3AO凋亡、两种方法学之间没有显著性差别(P>0.05);但用于肺癌患者分离的肿瘤细胞进行药物的筛选时,有显著性差别(P<O.05);AFS避免了MTT多种影响因素,比MTT快速、准确、敏感、重复性好,同时能观察凋亡、坏死及活细胞,有可能成为一种新的用于肿瘤化疗药物的筛选方法.

一种高活力分离肿瘤浸润淋巴细胞方法的建立

肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的增殖力、活力、杀伤力是ＴＩＬ临床治疗的基本问题。由于Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ方法存在着许多不足之处。本实验室对其一些重要步骤进行了改进：①用单一冷胶原酶消化肿瘤组织块；②省去影响ＴＩＬ活力的离心操作；③ＴＩＬ培养４８ｈ内除去掺杂在ＴＩＬ中的肿瘤细胞等。由于除去了影响ＴＩＬ活力的抑制因素，ＴＩＬ的增殖率、生存率、活力、杀伤力明显增加。有８０％肿瘤组织的ＴＩＬ经扩增可超过１×１０￣９细胞数，生长周期曲线反映了冷酶法的增殖率超过Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ方法。本方法的建立，为ＴＩＬ克隆、建株打下了基础，显示了ＴＩＬ临床治疗潜能的提高。

苦参抗柯萨基B组病毒的初步研究

本文报道了苦参在体外及体内抗柯萨基B组病毒(CVB)的作用。在体外,自1:4稀释度向上,苦参粗提液对HeLa细胞的毒性作用已丧失,在1:32稀释度时,苦参仍能对抗CVB(CVB_1除外)对细胞的致病变作用。在体内,Balb/C小鼠经腹腔感染CVB_3m,12只对照组小鼠平均存活时间为126小时,而经苦参治疗的试验组12只小鼠,2只完全康复,其余10只平均存活时间为161小时,两者有显著差异,P<0.01。

榄香烯对HeLa细胞端粒酶催化亚单位基因表达的作用

目的 :探讨HeLa细胞凋亡过程中 ,人乳头瘤病毒 18型E6 (HPV18 E6 )基因、p5 3基因、端粒酶催化亚单位 (hTERT)基因表达的变化 ,为临床诊断、治疗宫颈癌提供新思路。方法 :用流式细胞仪、电镜证实细胞凋亡 ;用PCR和RT PCR方法研究HPV18 E6基因、p5 3基因、hTERT基因表达在细胞凋亡过程中的变化及相互关系。结果 :在榄香烯作用下 ,HPV18 E6基因、p5 3基因表达没有变化 ,但hTERT基因表达受到抑制。结论 :榄香烯诱导HeLa细胞凋亡过程中 ,hTERT基因表达受到明显抑制 ,对于耐药性肿瘤 。

榄香烯诱导HeLa细胞凋亡的实验研究

目的从 8种抗病毒、抗肿瘤药物中筛选出诱导HeLa细胞凋亡的药物 ,并对其抗肿瘤机理进行探讨。方法应用相差显微镜、电镜和流式细胞仪等检测手段 ,证实HeLa细胞凋亡 ,并对凋亡的HeLa细胞周期变化进行分析。 结果榄香烯阻滞HeLa细胞在G2 /M期 ,降低HeLa细胞分裂能力 ,抑制其增殖 ;榄香烯抗肿瘤作用存在明显的阈值 ,即达到某一有效剂量 ,就可发挥强烈的抗肿瘤作用。 结论榄香烯是一种有效的诱导细胞凋亡的药物 ,对指导临床药物治疗宫颈癌具有重要意义。

病毒性心肌炎致病机理的实验研究——组织病理和心电图观察

BALB/C小鼠注射柯萨奇B3病毒(CVB3m)后,第2天出现病毒血症,并从心肝肾脑等脏器分离出病毒,肝组织呈肝炎或重症肝炎病理图象,第5天抗体产生,病毒血症终止,除心脏外,其它脏器中病毒消失。病理检查可见心肌坏死,第8,9天,心肌坏死达高峰,心肌内病毒、循环抗体消失。心肌超微结构显示线粒体、心肌纤维、心肌组织等进行性病变。89%(54/63)的小鼠种毒后第3天开始出现心电图改变,主要表现在P波倒置,QRS时间延长,房室传导阻滞和出现异常Q波。心电图检测的成功,对利用动物模型进行致病机理、免疫,药物治疗等研究提供了方便。

卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞某些细胞因子基因表达的研究

目的:研究卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞在体外扩增后某些细胞因子的表达.方法:利用RT-PCR和免疫学方法,分离5例刚分离的上皮性卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和其中3例腹水标本中肿瘤相关淋巴细胞(TAL),检测其在体外扩增后,IL-2,IL-2R,TNF-α,IFN-γ,IL-6等细胞因子基因的表达的水平与变化;测定细胞培养上清液中细胞因子的活性,分析TIL或TAL扩增前后杀伤肿瘤细胞的能力和免疫学特性的变化.结果:TIL在扩增前后的4周时间内,仅TNF-α mRNA基因表达是持续的,并可维持相当长一段时间;IFN-γmRNA基因的表达缺乏;IL-2mRNA基因表达只是一过性.体外加入抗CD3单抗或PHA(合适浓度)刺激TIL或TAL,IL-2,TNF-α,IhN-γmRNA表达明显增强.和TIL细胞因子基因表达不尽相同的是,TAL表达IL-6 mR-NA.结果还发现,体外IL-2的浓度对TIL的免疫学特性有很大的影响.结论:TIL在体外经rIL-2扩增后,免疫活性有明显提高.TIL的抗肿瘤活性在很大程度上依靠其分泌的多种细胞因子.

超抗原SEB和D-氨基半乳糖对小鼠肝细胞的作用观察

用超抗原葡萄球菌Ｂ型肠毒素（ＳＥＢ）、Ｄ－氨基半乳糖（Ｄ－ＧａｌＮ）及两者合用腹腔注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，于２、６、１２、２４ｈ取肝脏和血标本，从形态学和生化指标来研究肝细胞的死亡模式；同时还检测了小鼠２４ｈ死亡率。结果发现单用ＳＥＢ可诱导肝细胞凋亡，其机制可能与ＴＮＦ、ＩＦＮ－γ等细胞因子的产生和作用有关。单用Ｄ－ＧａｌＮ可同时引起肝细胞凋亡和变性，ＳＥＢ和Ｄ－ＧａｌＮ合用２、６ｈ见肝细胞凋亡，１２ｈ后以肝细胞坏死为主，小鼠２４ｈ死亡率达５０％。因而，推测凋亡与坏死间存在一定的联系。

溶脲脲原体与人精子共同抗原的研究

Shepard首先从非淋球菌性尿道炎患者分离到类似肺炎支原体样的微生物,因培养所形成的菌落微小被称为T株和T支原体。近年来按其能溶解尿素的特性被命名为解脲脲原体或溶脲脲原体(Ureaplasma urealyticum)。随着研究的深入,越来越多的证据表明该支原体对成人泌尿生殖道及对新生儿和胎儿具致病作用,并认为与某些不孕症有关。现将溶脲脲原体的一般特性、分离鉴定和致病作用做一简述。

柯萨奇B组病毒3型VPI基因疫苗免疫效果的研究

目的为研制防治病毒性心肌炎的基因疫苗打下基础。方法以带有CVB。P1、P2区核酸序列的pGEM质粒为模板，用PCR方法克隆CVB3VP1基因cDNA，插入真核表达载体pcDNA3中的HindⅢ和XbaⅠ位点之间，构建成重组质粒。经大量扩增纯化后，肌肉注射免疫BALB／c小鼠3次，用CVB3毒株攻击小鼠，取血及脾细胞检测其免疫效果。结果小鼠经3次免疫后，虽未测出明显免疫应答指标，但诱导了T、B细胞的免疫记忆反应，免疫组鼠在CVB3毒株攻击后，迅速诱导产生了强烈的二次免疫应答。结论CVB3VP1基因疫苗对CVB3毒株的攻击有一定程度的保护作用。