丁酸诱导结肠癌细胞凋亡机制的实验研究

目的:探讨膳食纤维在结肠中的酵解产物丁酸(butyrate)诱导人结肠癌细胞凋亡的作用机制。方法:人传代结肠癌细胞株SW 1116经不同浓度(0、2、3、4、7和10 mmol/L)丁酸处理后,在不同时段(6、24、48和72 h)分别收集细胞,用RT-PCR和W estern B lotting检测肿瘤细胞bcl-2和bax基因及其蛋白表达的变化,并用流式细胞仪和荧光定量法分别测定其p53蛋白浓度和caspase-3活性的变化。结果:实验过程中,肿瘤细胞的bc l-2 mRNA及其蛋白均无表达,但随着培养液中丁酸浓度的不断增加和培养时间的延长,其bax mRNA及其蛋白的表达则逐渐增强,同时伴有p53蛋白浓度和caspase-3活性的增加。结论:丁酸以p53依赖方式通过上调肿瘤细胞bax mRNA及其蛋白的表达而诱导SW 1116细胞凋亡。

人rG1特异反应性T细胞生物学特性的研究

目的分析重组人软骨抗原凝集原 (rG1 )体外诱导建立的 1 1株rG1特异性T细胞株的生物学特性。方法采用直接标记免疫荧光法对rG1特异性T细胞株进行表型分析 ;采用QuantikineELISAKits定量检测细胞培养上清液中的IFN -γ与IL - 4;采用RT -PCR方法分析其BV的限制性取用。 结果所建细胞株均表现为CD3阳性 (98.6 %± 1 .5 % ) ,大部分细胞株 (9/ 1 1 )为CD4阳性 (97.1 %± 2 .5 % ) ,而其余 2株为CD4和CD8混合表达 ,其中CD4阳性为 82 .95 % ,CD8阳性为 36 .5 0 %。 8株分泌IFN -γ(5 44± 390 pg/ml) ,而IL - 4阴性 ,为Thl细胞 ;1株同时分泌IFN -γ和IL - 4,为Th0细胞 ;2株细胞未测出IFN -γ和IL - 4分泌 ;无Th2细胞株出现。所有T细胞株均选择性取用αβ(97.4%± 2 .4% )TCR受体。 结论所建立的rG1特异性T细胞株经表面鉴定为纯度很高的CD3阳性T细胞 ,多表现为CD4阳性 ,细胞因子分泌类型多属Th1T细胞。

p27蛋白分子生物学及其与消化系肿瘤的关系

p27蛋白是一种细胞周期的负性调节物,在细胞增殖、凋亡、肿瘤的发生发展等过程中具有重要的调节作用。人类肿瘤中p27蛋白表达改变与其生物学行为密切相关。本文时p27基因和蛋白的生物学特性和功能及其与消化系肿瘤的关系作一综述。

急性重症胰腺炎血液滤过治疗的机制

目的:探讨血液滤过减轻急性重症胰腺炎(SAP)全身炎症反应的机制. 方法:逆行性胰管注射50 g/L牛黄胆酸钠/自身胆汁制备犬SAP动物模型,2 h后实施血液滤过2 h,并设立对照组(制模后仅给予深静脉穿刺插管而不血液滤过).记录不同时间段心率,12 h处死动物后通过病理学评分评价肺、肝脏和胰腺组织损伤情况,Westen blotting法检测肺和肝脏组织核转录因子NF-κB的核移位及RT-PCR检测肿瘤坏死因子TNF-αmRNA表达,通过比较血滤组和对照组脏器组织炎性激活和损伤的情况,分析血液滤过的作用机制. 结果:血滤前心率两组之间无显著差异,血滤后各时间点均为对照细显著高于血滤组.病理学评分显示血滤减轻肺脏的损伤,而对肝脏和胰腺损伤作用不明显.NF-κB核移位和TNF-αmRNA表达均为血滤组低于对照组. 结论:血液滤过减轻肺、肝脏等远离病灶器官的炎症激活和损伤,这一作用可能同血液中致炎因子的滤过清除有关.

SEREX方法鉴定胃癌肿瘤相关抗原基因

目的采用重组CDNA表达文库血清学分析法(SEREX法)寻找胃癌相关肿瘤抗原的编码基因。方法抽提胃癌细胞株SGC7901和1例胃癌组织标本PolyA+RNA,分别构建2个胃癌cDNA表达文库,用含有抗体的胃癌患者血清对2个文库进行筛选,并对筛选所得到的阳性克隆进行测序和生物信息学分析。结果经测定2个原始文库滴度分别为1.6×106pfu和2.5×106pfu,重组率为95%和98%。2个文库经3轮筛选共获得14个胃癌肿瘤相关抗原编码基因,其中一个为未知基因。13个已知基因编码产物包括代谢酶、RNA转录和翻译调控蛋白、蛋白代谢相关分子、自身免疫疾病相关抗原及未知功能蛋白分子。结论 胃癌相关肿瘤抗原编码基因的筛选和鉴定,为胃癌的临床诊断和特异性免疫治疗提供了靶点,有助于对胃癌发生机制的深入理解。

凋亡途径与肿瘤治疗

经典的凋亡途径是指死亡受体途径和线粒体途径,其调控可通过死亡受体、线粒体、凋亡抑制蛋白和Caspase酶等多个水平实现,也受相关传导通路信号的调节.凋亡与肿瘤的发生、发展和治疗密切相关,利用有关的凋亡诱导和调控机制诱导肿瘤细胞凋亡已经成为治疗肿瘤的一个重要途径,我们即对该方面的研究进展进行综述.

丁酸对结肠癌细胞株凋亡的影响

目的 :观察膳食纤维在结肠中的酵解产物丁酸对人结肠癌细胞株细胞凋亡的影响 ,探讨其预防结肠癌的作用机制。 方法 :人传代结肠癌细胞株SW 1116经不同浓度 (2、3、4、7和 10mmol/L)丁酸处理后 ,在不同时段 (6、2 4、4 8和 72h)收集细胞 ,分别用四唑蓝法检测肿瘤细胞生长的增殖率 ,用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化 ,以及用电镜观察其形态学改变。 结果 :随着培养液中丁酸浓度的不断升高和培养时间的延长 ,SW 1116细胞的生长逐渐受到抑制 ,最高抑制率达 5 9.19%。同时G1期细胞明显增多 ,而S期细胞明显减少 ,而细胞凋亡率逐渐增高 ,最高达 30 .6 2 % ,电镜观察出现细胞凋亡的特征性改变。 结论 :丁酸既能抑制结肠癌细胞的生长增殖 ,又能诱导其细胞凋亡。

支气管上皮细胞IL-6和IL-8的表达

目的以支气管上皮细胞株BEAS-2B细胞为研究对象,观察在Th2型细胞因子和促炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNFα)的作用下,IL-8和IL-6的表达变化。方法通过RT-PCR方法测定Th2型细胞因子IL-4、IL-13以及促炎症因子TNFα单独和协同刺激下BEAS-2B细胞IL-8和IL-6的基因表达;通过ELISA方法测定细胞培养上清液中蛋白质的表达。结果在IL-4、IL-13和促炎症因子TNFα的单独刺激下,IL-6和IL-8的基因和蛋白质表达均较未刺激组显著增高;但IL-4、IL-13和TNFα协同刺激后,IL-8的基因和蛋白质表达进一步增高,而IL-6反而降低。结论支气管上皮细胞在TNFα和Th2型细胞因子的协同刺激下,通过调节IL-6和IL-8的表达,进一步调节嗜酸粒细胞性和非嗜酸粒细胞性炎症。

右旋甲硫氨酸对胃癌细胞作用初探

目的 :探讨右旋甲硫氨酸 (D Met)对胃癌细胞的作用及其可能的机制。 方法 :用两种培养液培养 6株胃癌细胞 ,含D Met的培养液为实验组 ,含L Met的培养液为对照组。用MTT法检测细胞的增殖活性 ,用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期。 结果 :实验组各株胃癌细胞的吸光度 (A值 )均显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,而且其差异随时间延长而加大。实验组SUN 16、NCI N87和SGC 790 1细胞的凋亡率显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,其余细胞株的实验组凋亡率与对照组差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。KATO Ⅲ细胞的G0 /G1期比例显著增高 (P <0 .0 5 ) ,NCI N87、AGS、MKN4 5、SGC 790 1细胞的S期比例显著增高 (P <0 .0 1)。 结论 :这 6株胃癌细胞都具有Met依赖性。用D Met替代L Met培养胃癌细胞 ,胃癌细胞增殖活性受到抑制 ,这可能是通过诱导胃癌细胞凋亡或 (和 )周期阻滞实现的。

癌症高表达蛋白——Hec1在纺锤体组装检查点中的作用

细胞增殖依赖于细胞分裂前染色体的复制及随后的姐妹染色单体分离到达两极。纺锤体组装检查点具有确保染色体信息传递保真性的作用,检查点的缺失可能导致染色体的分离异常和肿瘤形成。癌症高表达蛋白(Hec1)通过与调控G2/M期的蛋白间的相互作用而在染色体的分离中发挥重要作用。Hec1与Nuf2的复合物,在G2/M期与动粒相结合,Hec1的缺失将导致严重的染色体分离错误。Hec1具有召集Mps1和Mad1/Mad2复合物结合到动粒上的作用,这种结合可以激活纺锤体组装检查点途径中非常重要的APCCdc20途径。但是Hec1、Mps1、Mad1三者之间的相互作用仍未明了。Hec1还可以通过与26S蛋白酶复合物的不同亚基结合调控其功能。Hec1是一种丝氨酸磷酸化蛋白,其磷酸化是由Nek2在G2/M期完成的。

去甲硫氨酸环境加化疗药物对人胃癌原代细胞生长的阻抑

目的 :探索人胃癌原代细胞在体外去除甲硫氨酸 (Met)但含同型半胱氨酸 (Hcy)的培养基 (Met-Hcy+)中能否正常生长和去Met状态是否增加化疗药物对胃癌细胞的杀伤作用。 方法 :将 40例新鲜人胃癌组织制成单细胞悬液 ,分别置于Met-Hcy+和Met+Hcy-(含Met不含Hcy)的培养基中培养 48h ,利用MTT等方法检测各组细胞增殖情况以及在不同培养基中分别加入ADM、DDP、5 FU、MMC和MTX化疗药物后对各组细胞增殖的抑制程度。 结果 :①人胃癌原代细胞在Met-Hcy+培养基中表现为细胞总数减少 ;②Met-Hcy+培养基分别与ADM、DDP、5 FU、MMC和MTX联合时 ,可显著提高各化疗药物对胃癌原代细胞的杀伤作用。 结论 :①人胃癌原代细胞在体外培养中表现出对Met的依赖性 ;②Met-Hcy+培养环境联合应用各化疗药物 ,可提高对人胃癌原代细胞的杀伤作用 ;③MTT法是检测“Met饥饿法”联合个体化化疗药物敏感性的有效手段。

我国胰腺外科研究工作的展望

在普外科中，胰腺外科起步较晚，发展较慢，有关重大胰腺疾病的疗效也不够满意，因此，在新的一年和新的世纪更对其寄以重望。以胰头癌为例，虽然，我国有的单位的胰头癌切除率已达到３０％以上，５年生存率已超过２５％，还出现了连续百例胰十二指肠切除术无死亡的好成绩...

E-钙粘附素-连环素复合体与肿瘤细胞的粘附和转移

Ｅ钙粘附素是一种细胞细胞间粘附分子，与连环素结合形成复合体介导同种细胞间粘附反应，在肿瘤浸润转移中发挥重要作用，许多人类肿瘤中有Ｅ钙粘附素连环素复合体的表达下调。本文就Ｅ钙粘附素和连环素分子的生物学特性及其在肿瘤浸润转移中的作用进行综述。

p16和Rb蛋白在胃癌中的表达及其意义

目的 探讨胃癌组织中ｐ１６ 和Ｒｂ 蛋白的表达及其与临床病理因素的关系。方法 采用免疫组织化学方法检测了４０ 例胃癌组织中ｐ１６ 和Ｒｂ 蛋白的表达。结果 在胃癌组织中，ｐ１６ 和Ｒｂ 蛋白表达阳性率分别为３５ ．０ ％ （１４／４０） 和７２ ．５ ％ （２９／４０） ，ｐ１６ 蛋白阳性胃癌的Ｒｂ 蛋白阳性率明显低于ｐ１６ 蛋白阴性胃癌（ Ｐ＜ ０ ．０１） 。ｐ１６ 蛋白在胃癌中的表达与肿瘤组织学类型、浸润深度、淋巴结转移和ＴＮ Ｍ 分期密切相关，Ｒｂ 蛋白在胃癌中的表达与肿瘤组织学类型、淋巴结转移密切相关。结论 ｐ１６ 和Ｒｂ蛋白在胃癌中的表达下降与肿瘤的进展密切相关，ｐ１６ 和Ｒｂ 蛋白的表达相互抑制，呈明显的负相关。

荷胃癌小鼠自杀基因治疗后宿主免疫功能观察

目的研究自杀基因疗法是否能诱导肿瘤宿主产生免疫应答。 方法将小鼠前胃癌细胞株 (MFC)接种于小鼠背部制作肿瘤模型 ,以单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV -tk)和大肠杆菌胞嘧啶脱氧基酶基因 (CD)注射于瘤体内 ,并于瘤体周围注射mIL - 2和mGM -CSFDNA及向腹腔内注射前药 9-丙氧乌苷 (GVC)和 5 -Fc。治疗第5周取肿瘤消退小鼠的脾细胞测自然杀伤细胞 (NK)和LAK活性 ;第 12周取PBL和脾细胞测NK和细胞毒细胞(CTL)活性。 结果在TK/CD基因联合细胞因子及前药治疗后第 5周 ,实验组脾细胞NK和LAK活性均明显高于荷瘤鼠对照 (P <0 .0 1)。 12周后 ,实验组PBL的NK和CTL活性均显著高于正常对照组 (P =0 .0 5 ,P <0 .0 1) ;而脾细胞NK活性与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )。 结论自杀基因疗法能较长时间提高宿主抗肿瘤免疫反应。

右旋甲硫氨酸与紫杉醇联合应用治疗胃癌

目的:研究右旋甲硫氨酸(D-Met)与紫杉醇联用治疗胃癌的效果。方法:选用D-Met培养液培养7株胃癌细胞5d,用流式细胞仪检测细胞周期;然后再用D-Met培养液培养7株胃癌细胞达96h后,添加紫杉醇继续培养24h,用氮四唑(MTT)法检测其吸光度(A490)。另设L-Met培养液组为阴性对照组,Met-培养液组为阳性对照组,不添加紫杉醇组为平行对照组。结果:与L-Met组相比,D-Met培养液组中除NCI-N87细胞的S期比例显著增高(P<0.01)外,其余6株胃癌细胞的G2/M期比例均显著增高(P<0.05或P<0.01);Met-培养液组的7株胃癌细胞的G2/M期比例均显著增高(P<0.05或P<0.01)。添加紫杉醇的D-Met和Met-培养液中,各株胃癌细胞抑制率均显著高于同种培养液不加药组(P<0.05)和添加紫杉醇的L-Met培养液组(P<0.01);D-Met培养液加紫杉醇组对MKN45细胞的抑制率显著高于Met-培养液加紫杉醇组(P<0.05)。结论:D-Met环境作用于胃癌细胞5d,可将大多数胃癌细胞阻滞于G2/M期,其效果与Met-环境相似;D-Met与紫杉醇联用可起到协同作用,对于MKN45细胞D-Met与紫杉醇联用的效果大于Met-与紫杉醇联用。

D-甲硫氨酸联合化疗对胃癌细胞株代谢周期的影响

目的:通过体外实验观察D-甲硫氨酸(D-Met)合并应用细胞周期特异性化疗药物对胃癌细胞株代谢周期的影响。方法:将人胃癌细胞株SGC-7901分别置于含L-Met、D-Met或以同型半胱氨酸替代Met(Met-Hcy+)的不同培养基中,或在上述诸培养基中分别加入5-氟脲嘧啶(5-FU)。培养48h后,应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡细胞的比例。结果:G0/G1期和G2/M期细胞的比例均示D-Met和Met-Hcy+组低于L-Met组,而S期细胞比例则示D-Met组最高,凋亡细胞比例也以D-Met组诸组为最高;与未加入化疗药物诸组相比,联合应用5-FU后,各组的G0/G1期细胞比例增高,S期和G2/M期细胞比例降低,凋亡细胞比例有所增高。结论:D-Met可干扰人胃癌细胞株的代谢周期,趋向阻滞肿瘤细胞于S期,有助于周期特异性化疗药物5-FU对此期肿瘤细胞的杀份。