临床微生物检验的数字化和自动化

传统的病原微生物鉴定方法首先是进行革兰染色,以区分革兰阴性菌还是阳性菌.革兰阴性杆菌进一步做氧化酶试验,革兰阳性球菌做触酶试验和凝固酶试验,再按不同类型进行生化学和血清学鉴定.

上海地区部分医院临床分离肺炎链球菌耐药性研究

目的 :了解上海地区肺炎链球菌耐药情况 ,以指导合理应用抗菌药物。方法 :用微量肉汤稀释法测定 9种抗菌药物对 79株肺炎球链菌的最低抑菌浓度。结果 :79株肺炎链球菌对青霉素总耐药率为 4 4 .3% ,其中高水平耐药率为 17.7% ,低水平耐药率为 2 6 .6 %。对头孢噻肟、头孢曲松、氯霉素、氧氟沙星的耐药率较低 ,分别为 12 .6 %、7.6 %、8.9%、3.8% ,对红霉素、四环素、复方磺胺甲唑有较高的耐药率 ,分别为 72 .2 %、83.5 %、83.6 % ,未检出对万古霉素耐药的菌株。结论 :肺炎链球菌对除万古霉素以外抗菌药有不同程度的耐药性 ,同时存在交叉耐药现象。

临床感染深部真菌的分离鉴定和药敏结果分析

目的 对 818株酵母样真菌进行鉴定和药敏试验 ,为临床提供参考。方法 科玛嘉真菌显色培养基分离真菌 ,用ID 32C鉴定 ,ATBFungus自动分析系统测定真菌对氟胞嘧啶两性霉素B、制霉菌素、咪康唑、益康唑以及酮康唑的药敏结果。纸片扩散法测定真菌对氟康唑的药敏结果。结果 818株酵母样真菌以念珠菌属为主 ,其中白色念珠菌的检出率居首位。 15 7株酵母菌的药敏结果 ,以两性霉素B、制霉菌素、氟胞嘧啶的作用最强 ,益康唑的作用最差。 95株酵母菌对氟康唑的药敏结果 ,以克柔念珠菌的耐药率最高 ,达 10 0 %。结论 广谱抗生素、免疫抑制剂和抗肿瘤药物的广泛应用 ,增加了酵母菌的感染机会 ,应加强真菌的检测和耐药性监测工作 。

从肺炎克雷伯菌临床菌株中检出质粒介导的AmpC DHA-1型β-内酰胺酶基因

目的 研究肺炎克雷伯菌的耐药机制 ,检测肺炎克雷伯菌中AmpC酶的基因。方法 用纸片扩散法药敏试验和三相水解试验 ,从 2 3株耐药的肺炎克雷伯菌临床菌株中初筛产AmpC酶的菌株 ;用PCR扩增耐药基因 ,将试验产物测序 ,并在Genbank中进行比对 ;用转化试验确证耐药基因是否通过质粒传播。结果 发现 3株肺炎克雷伯菌产诱导型质粒介导的DHA 1型AmpCβ 内酰胺酶。 结论 国内首次发现肺炎克雷伯菌出现质粒介导的DHA 1型AmpCβ 内酰胺酶。

外科监护病房非发酵菌及其耐药性分析

目的:观察外科重症监护病房(ICU)非发酵菌感染的发生情况及其耐药情况。方法:对我科2001年1月-2002年12月临床分离到的非发酵菌357株作体外药敏试验并分析结果。药敏试验采用K-B琼脂扩散法,按美国国家临床实验室标准委员会2000年版判断标准。结果:非发酵菌占革兰阴性杆菌的70.4％(357/507),其中铜绿假单胞菌190株,占革兰阴性杆菌的37.5％,居首位;其次为嗜麦芽窄食单胞菌74株(14.6％)、鲍曼不动杆菌45株(8.9％)及木糖氧化产碱杆菌20株(3.9％)和脑膜脓毒黄杆菌12株(2.4％)等。铜绿假单胞菌对头孢哌酮-舒巴坦的敏感率为60.5％,对亚胺培南的敏感率仅为17.4％;嗜麦芽窄食单胞菌对头孢哌酮-舒巴坦和替卡西林-克拉维酸最敏感,敏感率均为87.8％;鲍曼不动杆菌对亚胺培南敏感率为95.6％;脑膜脓毒黄杆菌对头孢吡肟、哌拉西林-三唑巴坦、头孢哌酮-舒巴坦均敏感(100％),对亚胺培南都不敏感。结论:非发酵菌已成为ICU中感染的最常见病原菌,对碳青霉烯类药物的耐药情况严重。

原位肝移植术后早期细菌、真菌感染的临床研究

目的:探讨原位肝移植术后病人细菌、真菌感染的临床特点,常见病原菌及其耐药性,总结防治经验。方法:就74例原位肝移植病人术后,针对感染进行各个系统的定期检测,观察感染发生时间、部位、病原谱及药物敏感性等指标。结果:74例肝移植病人中,术后并发感染者48例,感染率为64.9%;包括单纯细菌感染24例(32.4%),单纯真菌感染6例(8.1%),混合感染(细菌合并真菌)18例(24.3%)。其中革兰阴性杆菌共占34.6%,革兰阳性球菌占34.1%。真菌占31.3%。感染大部分发生在术后1个月以内。最常见的感染部位是呼吸道,其次为尿道和胆道。感染的病原菌依次为金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌。病原菌中革兰阴性杆菌对头孢吡肟和美罗培南敏感性较高,革兰阳性球菌对万古霉素和替考拉宁敏感性较高。结论:肝移植病人术后感染是影响存活的重要因素,应重视移植术前后对病人的监测和预防性抗生素应用等措施。在处理感染病情时,应综合考虑病原菌谱、药敏结果、多部位复合感染及混合感染等因素。

医院感染的分子流行病学研究方法及应用

医院感染是当前影响医疗质量提高的重大障碍之一,及时判定感染的发生及其来源是进一步控制和预防医院感染的基础。分子流行病学为医院感染研究提供了快速而可靠的工具。

UF-100尿液分析仪筛检尿路感染临床意义的探讨

目的 探讨UF 10 0尿液分析仪筛检尿路感染的临床意义。方法 对UF 10 0作重复性试验 ,用UF 10 0检测 32 5份尿中细菌和白细胞 ,同时作定量细菌培养并将结果作比较。用Yerushalmy模式评价 2种方法的一致性及UF 10 0筛检的灵敏度、特异性等。结果 重复试验中 ,UF 10 0细菌计数CV值低于白细胞计数CV ,与定量细菌培养结果比较 ,细菌计数的筛检灵敏度为 80 .0 % ,特异性为 5 0 .4 % ,阳性预计值为 2 8.7% ,阴性预计值为 91.0 % ,假阳性率为 39.7% ,假阴性率为 4 .0 % ,准确率为 5 6 .3%。结论 UF 10 0具有良好的分析尿液的性能 ,在临床尿路感染筛检时可用细菌一项指标 ,90 %结果阴性的标本可在短时间内筛去 ,大大减少实验人员繁复劳动 ,降低检验成本 ,但应注意假阴性 ,更不可替代尿定量细菌培养。

一株同时产OXA-23型碳青霉烯水解酶和PER-1型超广谱β-内酰胺酶的鲍曼不动杆菌

目的 分析多重耐药鲍曼不动杆菌对 β 内酰胺耐药的原因及其耐药基因的转移方式。 方法 用等电聚焦电泳试验和三维试验分析多重耐药鲍曼不动杆菌临床菌株所产 β 内酰胺酶 ,并进行初步分类 ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增和产物测序方法确认 β 内酰胺酶基因 ,用PCR扩增整合子全可变区和质粒接合实验来判定其耐药基因的转移方式。结果 该临床菌株产超广谱 β 内酰胺酶 ,经分子生物学方法证实有blaPER 1基因 ,同时还有blaOXA 2 3 基因和aacA4基因。结论 发现一株产OXA 2 3型碳青霉烯酶和可转移的PER 1型超广谱 β 内酰胺酶的鲍曼不动杆菌 ,blaPER

105株志贺菌流行菌株的血清分型及耐药性分析

目的 调查志贺菌在上海地区流行的主要血清型和耐药性。方法 收集临床分离的志贺菌 1 0 5株进行生化鉴定、血清学分型和抗生素敏感性试验。结果 1 0 5株志贺菌中 5 1株为宋氏志贺菌 ,占 4 8.6 % ;5 4株为福氏志贺菌 ,占 5 1 .4 % (包括 5株福氏变异株 ,占总数的 4 .7% )。宋氏志贺菌对抗菌药物的敏感率依次为氟喹诺酮类 1 0 0 %、头孢噻肟 94 .1 %。而福氏志贺菌对抗菌药物的敏感率依次为头孢噻肟 98.1 %、氟喹诺酮类70 %。结论 上海地区志贺菌感染以福氏志贺菌和宋氏志贺菌为主 ,福氏志贺菌中以福氏 2型为主 ,占 6 6 .7% ,其次为福氏 1型 ,占 2 0 .4 %。福氏志贺菌对各种抗生素耐药性有增高趋势 。

住院病人中分离的革兰阴性杆菌的分布与耐药特征

目的 :研究从住院病人分离的革兰阴性杆菌的分布及其耐药特征 ,指导临床合理使用抗菌药物。方法 :用Etest法对一定时期内我院住院病人中连续分离的革兰阴性杆菌共 2 0 0株进行药敏试验和超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)的检测 ,并用WHONET5进行分析。结果 :我院住院病人分离的革兰阴性杆菌的主要构成依次为铜绿假单胞菌 (2 1.5 % )、大肠埃希菌 (18.0 % )、鲍曼不动杆菌 (12 .0 % )、肺炎克雷伯菌 (12 .0 % )、阴沟肠杆菌 (6 .5 % )和嗜麦芽窄食单胞菌 (6 .5 % )。这些临床分离菌株对 12种抗菌药物的敏感率各不相同。大肠埃希菌和克雷伯菌ESBLs的检出率分别为 16 .7%和 32 .1% ,产ESBLs菌株对抗菌药物的敏感率均显著降低。结论 :从我院住院病人中分离的革兰阴性杆菌耐药性强且多重耐药 ,应了解各菌种的耐药特点和耐药机制 ,合理使用抗菌药物并严密监控新的耐药菌的产生。

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 评价头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)在临床的应用价值。方法 用头孢西丁纸片扩散法检测临床分离的 94株金黄色葡萄球菌 ,并与苯唑西林纸片扩散法、琼脂稀释法及mecA基因检测进行比较。结果 mecA基因阳性的 77株金黄色葡萄球菌 ,头孢西丁纸片扩散法均显示耐药。结论 头孢西丁纸片扩散法与mecA基因检测高度一致 ,是筛选和确认MRSA的一种可靠的试验方法。

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶的基因分型

目的 :分析我院大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌临床分离株中超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)的主要基因型。 方法 :用表型确证试验确定临床标本中产ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯菌 ,用Etest检测其最低抑菌浓度 (MIC) ,分别用TEM、SHV和CTX M通用引物进行聚合酶链反应 (PCR)扩增并对PCR产物进行序列分析。结果 :大部分产ESBLs菌株体外对头孢噻肟耐药而对头孢他啶敏感 ,PCR扩增结果显示TEM、SHV和CTX M的阳性率分别为 6 8%、39%和 83% ,序列分析证实TEM扩增产物均属于TEM 1基因 ,CTX M扩增产物均属于CTX M 3基因 ,而SHV扩增产物则分别属于SHV 12、SHV 11或SHV 1基因。结论 :CTX M 3和SHV 12是我院产ESBLs菌株的主要基因型 ;尚未发现TEM起源ESBLs。

PER-1型超广谱β内酰胺酶在革兰阴性杆菌中的流行情况调查

目的:了解PER-1型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)在革兰阴性杆菌中的流行情况。方法:采用纸片扩散试验初筛和确证ESBLs表型,用聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因及PCR产物测序验证PER-1型ESBLs。结果:ESBLs的总检出率27.3％(179/656),PER-1型占ESBLs的8.9％(16/179),产酶菌以鲍曼不动杆菌为主。结论:应加强对PER-1型ESBLs的检测,以有效控制由产生该型ESBLs细菌引起的医院感染。

用纸片双抑制剂平行抑制试验分析阴沟肠杆菌AmpC酶

目的 建立一种能快速有效分析阴沟肠杆菌AmpC酶的方法。方法 分别以大肠埃希菌(ATCC25922)、肺炎克雷伯菌(ATCC700603)、阴沟肠杆菌(029、029M和1194E)为β内酰胺酶阴性对照、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、普通型阴沟肠杆菌、持续高产型AmpC酶、高诱导型AmpC酶标准菌株,用纸片双抑制剂平行抑制试验(DDIST)对华山医院连续的不重复的58株阴沟肠杆菌临床菌株进行AmpC酶分析,用三维试验检测高产AmpC酶以验证DDIST。结果 三维试验法从58株阴沟肠杆菌中检出持续高产型AmpC酶产株21株,DDIST检出持续高产型AmpC酶产株18株、高诱导型AmpC酶产株6株。结论 DDIST是一种能快速有效分析阴沟肠杆菌AmpC酶的方法。

介导VIM-2型金属β内酰胺酶的整合子的研究

目的 :分析 1株对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌的耐药机制。方法 :用改良的三相水解试验分析该菌株所产的 β内酰胺酶 ,并进行初步分类 ;用聚合酶链反应 (PCR)扩增该菌的耐药基因 ,用PCR 限制片段长度多态性 (RFLP)初筛整合子并分型 ,用长片段PCR扩增整合子的可变区并测序 ,以确认 β内酰胺酶基因种类及其转移特性。 结果 :发现铜绿假单胞菌RJ2 1 3携带一个整合子介导的blaVIM 2基因。结论 :在上海和中国大陆地区首次发现铜绿假单胞菌产生的整合子介导VIM 2型金属 β内酰胺酶 。

不同人群患者中段尿培养分离的大肠埃希菌药物敏感性对比

目的分析和对比国内外患者中段尿培养分离的大肠埃希菌对常用抗生素的药物敏感性。方法采用ATB系统鉴定细菌,纸片扩散法进行药敏试验,WHONET5软件分析药敏结果,χ2检验比较国内外患者之间药敏结果差异的显著性。结果国内患者中段尿培养分离的大肠埃希菌产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)株的检出率明显高于国外患者,对大多数常用抗生素敏感率均明显低于国外患者。结论国内外患者中段尿培养分离的大肠埃希菌对常用抗生素的药物敏感性差异有显著性。

4株AmpC启动子和衰减子突变大肠埃希菌的分析研究

目的 研究启动子和衰减子突变与大肠埃希菌高产AmpC酶的关系。 方法 用琼脂稀释法、双纸片法、三相试验、等电聚焦电泳 (IEF)和聚合酶链反应 (PCR)检测其耐药机制 ,并对其AmpC的启动子和衰减子直接进行基因序列分析。衰减子的发夹状二级结构用DNASIS软件分析。结果 琼脂稀释法、双纸片法、三相试验、IEF和PCR证明这 4株菌都产染色体AmpC酶 ,基因序列分析提示它们在启动子和衰减子上都有不同程度的突变 ,同时还观察到其中一株菌的衰减子的G C发夹状二级结构由于突变导致△G 7.6kcal/mol的变化。