拉米夫定治疗中乙型肝炎病毒YMDD野毒株和变异株的变化

目的 观察慢性乙型病毒性肝炎 (CHB)患者应用拉米夫定治疗前后 ,YMDD野毒株及变异株的动态变化 ,并分析其临床意义。方法 取 5例CHB患者治疗前与治疗 48周的 10份血清标本 ,先用PCR法扩增包括YMDD基序的乙型肝炎病毒 (HBV )部分核苷酸序列 ,然后进行DNA序列测定 ,同时分别进行克隆 ,每份标本随机挑选 2 0～ 2 4株单克隆 ,用实时荧光PCR法检测YMDD野毒株及其变异株。结果 5例CHB患者治疗前PCR产物直接测序结果未检出YMDD变异 ,治疗 48周时有 4例检出YMDD变异 ,但对每株克隆的分别检测显示 :治疗前YMDD变异株 (YIDD/YVDD)所占比率分别为 0 %、9.5 %、0 %、4.5 %、5 .6%;治疗 48周时所占比率分别为 10 0 %、10 0 %、65 %、10 0 %、0 %。其中 1例患者治疗前检出YIDD变异株 ,而治疗 48周时YVDD变异株则变成优势株。治疗 5 2周时 ,4例YMDD变异患者中 2例HBVDNA和血清丙氨酸转氨酶 (ALT)突破 ,1例患者ALT突破 ,但HBVDNA为阴性。结论 YMDD变异株在拉米夫定治疗前的血清中已存在 ,在服用拉米夫定后 ,由于选择性抑制了野毒株 ,使YMDD变异株由弱势株变成优势株 ,部分患者可导致拉米夫定临床耐药。

实时荧光聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒聚合酶基因变异

目的 建立一种在拉米夫啶治疗过程中的聚合酶酪氨酸 蛋氨酸 天冬氨酸 天冬氨酸(YMDD)基序变异的检测方法。方法 根据寡核苷酸探针与模板结合时 ,不匹配碱基显著影响熔解温度的原理 ,设计合成 2条荧光标记的特异性探针 ,用实时荧光聚合酶链反应 (PCR)方法对 2 97例患者的 35 4份标本进行YMDD变异检测。结果 35 4份标本中 ,检出YMDD变异株 15 6份 ( 44 1% ) ,其中混合株占 34% ( 5 3/15 6 ) ;有 9份血清标本同时进行了DNA序列分析 ,测序结果同本试验检测的结果完全一致 ;同时发现YMDD变异与血清谷丙氨酸转氨酶异常相关 (P <0 0 1)。结论 本研究建立的实时荧光PCR方法简便、快速、灵敏、经济 ,可用于临床拉米夫啶治疗中YMDD变异的检测。