猪无细胞真皮基质对人皮肤成纤维细胞黏附及生长的影响

目的 比较成纤维细胞 (FB)在猪无细胞真皮基质 (ADM)上的黏附及生长特性 ,探讨 ADM作为组织工程化皮肤支架材料的可行性。 方法 FB2 ml细胞浓度为 2 .5× 10 5/ ml,分别接种于经戊二醛交联、未经戊二醛交联、戊二醛交联不含基底膜和戊二醛交联并打孔形成网状的猪 ADM中孵育 ,相同数量 FB接种于空白培养皿中作为对照 ,接种后 1、3及 5天行细胞计数 ,黏附有 FB的 ADM行 HE染色观察。 结果 FB在经戊二醛交联、未经打孔完整的ADM上的黏附增殖优于未经戊二醛交联或戊二醛交联并打孔的 ADM,是否含完整基底膜对成纤维细胞黏附增殖无明显影响。 结论 采用经戊二醛交联、完整的 ADM有利于 FB的体外培养 ,ADM经一定的修饰后可能作为组织工程化皮肤的支架材料。

深二度烧伤创面伤后24h内削痂的临床研究

目的 探讨深二度烧伤创面伤后24 h内削痂的可行性及其促进创面愈合的临床效果。方法19例烧伤总面积在200％～40％、以深二度为主的住院病人在伤后24 h内削痂;39例烧伤严重程度相似的病人在伤后3～5 d削痂作为对照。观察病人休克期的补液量、尿量、休克征象,回吸收期体温和心率,创面愈合时间以及并发症情况;同时对两组创面活检取材,进行组织学观察。结果 两组烧伤病人休克期补液量、尿量的比较均无差异(P>0.05);休克期后第1、2 d,对照组体温高于试验组(P<0.05);伤后24 h内削痂病人创面平均愈合时间(24.67±3.38)d,与对照组创面平均愈合时间(29.77±8.28)d比较明显缩短(P<0.05);组织学观察显示,经伤后24 h内削痂后,创面局部的炎症反应较对照创面明显减轻,创面组织未见进一步损害。结论烧伤后24 h内削痂对烧伤总面积在20％～40％、以深二度为主的成年病人是安全的,能通过改善局部过强的炎症反应而促进创面的愈合。

烧伤患者焦虑及抑郁障碍的药物治疗

目的 :研究抗焦虑和抗抑郁药物治疗对烧伤患者的焦虑障碍和 /或抑郁障碍的临床疗效 ,为建立合理的烧伤后心理治疗模式充实内容。方法 :选用焦虑自评量表 (SAS)、抑郁自评量表 (SDS)、Hamilton焦虑量表 (HAMA)以及抑郁量表 (HAMD)对 2 2 0例烧伤住院患者进行筛选 ,将 6 6例具有焦虑障碍和 /或抑郁障碍的烧伤患者分为治疗组和对照组 ,治疗组患者根据其焦虑或抑郁症状给予抗焦虑和抗抑郁药物治疗。结果 :治疗组患者的HAMA焦虑量表及HAMD抑郁量表的分值下降明显 ,有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :精神障碍是烧伤患者不可忽视的并发症之一 ,抗焦虑和 /或抗抑郁药物治疗能够明显改善烧伤患者的焦虑障碍和

糖基化细胞外基质对成纤维细胞生物学行为的影响

目的研究皮肤组织中细胞外基质(ECM)成分的糖基化对成纤维细胞(FB)黏附增殖能力的影响。方法对糖尿病患者皮肤组织中晚期糖基化终末产物(AGEs)的表达进行免疫组化测定;体外将FB的ECM糖基化处理,观察FB细胞的形态变化和糖基化基质对其黏附、增殖能力的影响,以非糖尿病皮肤组织作为对照。结果糖尿病患者皮肤组织中FB的细胞浆和ECM中AGEs的阳性表达明显多于非糖尿病皮肤;体外糖基化基质上接种的FB较小,胞体突起既少又短,黏附的细胞明显少于对照组(P<0.01);接种1 h,黏附细胞增多,逐渐与对照组接近,但仍低于对照组。结论糖尿病患者皮肤组织中的ECM被糖基化,产生的AGEs可抑制FB的黏附、增殖,可能是糖尿病创面愈合延迟的重要机制之一。

真皮“生物模板”对创面愈合中胶原影响的研究

目的 探讨真皮“生物模板”对创面愈合中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响。方法 采用真皮“生物模板”(同种异体无细胞真皮基质)加自体刃厚皮片复合移植的方法,修复深度烧伤病人切痂后创面,并以单纯自体刃厚皮片移植为对照,分别于术后1、2、3、4周取组织标本,共48例次,采用免疫组化、原位杂交技术和图像分析技术对组织标本中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达进行检测。结果 真皮“生物模板”移植术后1～4周,组织标本中Ⅰ型胶原含量逐渐增加,Ⅰ型前胶原mRNA表达第2、3周达到高峰,然后逐渐降低,真皮“生物模板”试验组和对照组两者之间无显著差异(P>0.05)。组织标本中Ⅲ型胶原含量,随着创面愈合,试验组明显减少,对照组则减少不明显(P<0.05);同时,试验组Ⅲ型前胶原mRNA的表达在术后1、2周达高峰,随后逐渐降低,而对照组Ⅲ型前胶原mRNA的表达一直在较高水平,且各时相点均高于试验组,两组差异明显(P<0.05)。结论 真皮“生物模板”通过减少创面局部Ⅲ型胶原的产生,减少和(或)减轻疤痕增生,改善愈合质量。

糖尿病病程对真皮成纤维细胞生物学行为的影响

目的探讨病程对糖尿病皮肤和真皮成纤维细胞(FB)生物学行为的影响。方法通过制备不同病程糖尿病模型,对皮肤中的组织生化和真皮FB的生物学行为进行检测。结果短程糖尿病皮肤厚度变薄,糖含量升高,且病程至8周有晚期糖基化终末产物(AGEs)蓄积,真皮S期细胞比例升高和单位面积皮肤羟脯氨酸含量减少。高糖和AGEHSA导致真皮FB生长抑制和凋亡,呈剂量依赖性。结论糖尿病皮肤随着病程延长,病理生理异常会不断加重;糖尿病真皮FB的生物学改变与皮肤高糖和AGEs蓄积存在直接关系。

1494例小儿烧伤创面特点的临床分析

目的探讨影响小儿烧伤创面大小和深度的因素。方法通过对1494例0～14岁急诊小儿烧伤住院患者病史资料的分析,探讨不同性别、年龄、烧伤原因和不同年代或人口组成对小儿烧伤创面的影响。结果患儿平均烧伤面积为(11.842±9.897)%TBSA,Ⅲ度烧伤面积为(1.236±3.87)%TBSA,性别间无统计学差异(P>0.05),并随着年代越近平均烧伤面积和Ⅲ度烧伤面积逐渐减小。烧伤创面主要分布在头面颈、躯前侧;热液是主要烧伤原因,非热液的Ⅲ度烧伤面积显著较大;居家是发生烧伤主要场所,而公共场所Ⅲ度烧伤面积显著较大(P<0.01);4～6岁组患儿平均烧伤面积显著较大(P<0.01),7～14岁组Ⅲ度烧伤面积最大(P<0.01);本市和外来患儿烧伤总面积和Ⅲ度烧伤面积无统计学差异(P>0.05)。结论患者年龄、烧伤原因、烧伤场所是影响烧伤面积大小的重要因素。

真皮“生物模板”与自体薄皮复合移植组织学观察

目的探讨真皮“生物模板”移植人体后的动态组织学变化。 方法采用真皮“生物模板”(异体无细胞真皮基质)加自体刃厚皮片复合移植的方法,修复深度烧伤病人切痂后创面,并以单纯自体刃厚皮片移植作对照,分别于术后1、2、3、4、6、8周,3、6、12个月取组织活检标本84例次;采用HE、Masson’s染色和透射电镜的方法,对创面组织标本进行动态组织学观察。 结果真皮“生物模板”与自体刃厚皮片复合移植后,修复细胞和血管循真皮模板胶原束间隙长入,新生胶原纤维排列较为规则有序,真皮修复后其结构接近正常真皮组织;而单纯自体薄皮移植修复创面后,真皮内胶原纤维排列紊乱。 结论真皮“生物模板”可以诱导包括成纤维细胞等修复细胞长入模板,合成新生的胶原和血管,创面修复后形成具有和正常真皮结构相似的“新生真皮”。

伤后24h内削痂对深二度烧伤创面生长因子释放的影响

目的 探讨伤后24 h内削痂手术对深二度烧伤创面局部表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血小板衍生生长因子(PDGF)释放的影响。方法 12例深二度烧伤患者,伤后24 h内实施削痂手术。削痂术前先切取手术前实验区组织标本。术中部分创面保留不予手术,作为未手术实验区。伤后5～7 d行再次手术,分别切取经削痂处理和未手术区的创面组织,作为手术后和未手术实验区标本。分别检测创面组织释放生长因子EGF、FGF-2和PDGF-AB的含量,并进行组织学观察和新生肉芽形成半定量分析。结果 削痂手术创面组织局部释放EGF、FGF-2和PDGF-AB的水平较手术前和未手术创面有显著升高(P<0.05);组织形态学观察显示,削痂手术后创面新鲜肉芽组织形成较手术前和未手术创面显著(P<0.05)。结论 伤后24 h内削痂手术可以促进局部创面组织释放EGF、FGF-2和PDGF-AB,促进新生肉芽形成,有利于深二度烧伤创面愈合。

MCI-186对高糖环境中受损人真皮微血管内皮细胞的保护作用

目的 观察高糖环境对人真皮微血管内皮细胞(HDMEC)功能的影响,探讨清除自由基对高糖所致HDMEC损伤的保护作用。方法 建立高糖环境下HDMEC培养的体外模型,并加入自由基清除剂MCI-186予以干扰,同时检测细胞的增殖、形态、黏附等生物学行为。结果 高糖环境可影响内皮细胞的增殖,改变其特异性形态,增加H2O2诱导的细胞毒性。MCI-186可缓解高糖所致的内皮细胞增殖受抑,降低内皮细胞表面黏附性,下调高糖诱导的细胞凋亡。结论 控制血糖的同时清除有害自由基,可能对糖尿病合并难愈创面的治疗起到积极作用。

重组人生长激素对烧伤创面愈合的影响

目的评价重组人生长激素（ｒｈＧＨ）对烧伤创面愈合的影响。方法８４例不同程度烧伤病人分成给药组和不给药组。给药组予以皮下注射ｒｈＧＨ，其他治疗与不给药组相同。分别观察创面愈合时间，住院天数，测定严重烧伤病人２４ｈ尿尿素氮（ＵＵＮ）排出量。结果应用ｒｈＧＨ的病例创面愈合时间明显缩短，住院天数明显减少，严重烧伤病人２４ｈＵＵＮ排出量明显减少。结论ｒｈＧＨ能促进烧伤病人蛋白质合成，加速创面愈合。

糖尿病大鼠皮肤组织表皮细胞增殖相关事件的研究

目的研究糖尿病大鼠皮肤组织中表皮细胞的增殖改变及其可能机制。方法12只SPF级SD大鼠随机分为糖尿病组(6只)和正常对照组(6只),糖尿病大鼠以STZ诱导。成模后8周,二组同时采集背部皮肤,观察表皮的组织学特征;流式细胞术检测表皮细胞的细胞周期;Westernblot检测细胞增殖调节因子cyclinD1、cyclinB1和cdk4的表达水平,并测定表皮细胞丝裂期促进因子(MPF)的组蛋白激酶活性。结果与正常组相比,糖尿病大鼠表皮结构欠清晰,部分表皮缺乏复层排列,表皮细胞数量明显减少,表皮层厚度明显变薄;S期和G2/M期表皮细胞百分比均显著降低(P<0.01,P<0.05);糖尿病组cdk4的表达水平显著低于正常组(P<0.05),两组间cyclinD1、cyclinB1表达无显著差异(P>0.05);糖尿病组表皮细胞MPF活性显著降低(P<0.01)。结论糖尿病大鼠皮肤表皮细胞处于明显增殖抑制状态,这种增殖抑制可能与cdk4的低表达和MPF活性下降有关。

大鼠烧伤休克期手术对炎症反应和T细胞免疫的影响

目的探讨烧伤休克期手术后炎症反应和T细胞免疫的变化。方法 将大鼠随机分为未烧伤组、烧伤手术组和烧伤未手术组,在其背部制成30％,TBSA的三度烧伤模型。手术组于烧伤后4 h行创面切痂和辐照猪皮覆盖术。各组动物于伤后3、6、10 d分别测定TNF-α、IL-2、IL-6和CD4+细胞、CD8+细胞。结果 烧伤后3 d,未手术组CD4+细胞、CD8+细胞和IL-2、IL-6、TNF-α显著增高(P<0.05);手术组CD4+细胞、CD8+细胞显著下降,IL-2水平下降,IL-6和TNF—o明显上升,但TNF-α较未手术组显著降低(P<0.05)。伤后6 d,未手术组CD8+细胞显著增加,同时IL-2、IL-6开始下降(P<0.05);手术组CD4+细胞、cD8+细胞显著增高,而IL-2、TNF—α显著降低(P<0.05)。烧伤后10 d,未手术组CD4+细胞和CD8+细胞都显著下降(P<0.05);手术组CD4+细胞增高,CD8+细胞显著下降,IL-2和IL-6显著下降,而TNF-α继续增高(P<0.05)。结论 大鼠烧伤休克期切除创面,虽然不能阻止烧伤后全身炎症反应的发生,但能减轻炎症反应,使病情趋于稳定。手术降低了血清中炎性介质,减轻全身的炎症反应,上调T细胞的免疫力。

兔无细胞真皮基质的研制

目的 探讨制备兔无细胞真皮基质(ADM)的最佳方法。 方法 选用三种不同的去表皮处理液,即高渗NaCl溶液、dispase Ⅱ分离酶和嗜热蛋白酶(thermolysin),结合去污剂0.5％十二烷基硫酸钠(SDS)处理,分别制备兔ADM,并对其进行组织学检测。 结果 高渗NaCl-SDS制备的兔ADM尚有少量表皮残留,乳白色中夹杂浅黄色,组织学观察可见真皮中有较多细胞碎屑;而经dispase Ⅱ-SDS和thermolysin-SDS制备的兔ADM表皮完全去除,呈乳白色,组织学观察发现真皮中已不见任何细胞成分,胶原纤维排列规则。电镜观察,上述三种方法制备的兔ADM基底膜结构均完整。 结论 由dispase Ⅱ-SDS法和thermolysin-SDS法制备的兔ADM达到了完全去细胞化,符合制备要求。

胰岛素对表皮角质形成细胞的作用

目的观察胰岛素对大鼠烫伤创面以及体外培养的表皮角质形成细胞(KCs)的作用,探讨其促进创面愈合的可能机制。方法水浴法致SD大鼠背部深Ⅱ度烫伤,局部创面下浸润注射生理盐水(对照组)或0.1U长效混悬锌胰岛素(胰岛素组)记录创面再上皮化时间;RTPCR测定KCs表皮生长因子(EGF)mRNA表达;Westernblotting检测KCs层粘蛋白(LN)表达。计算体外培养的人KCs经胰岛素作用后的细胞黏附率。结果胰岛素组创面再上皮化时间较对照组明显缩短。胰岛素组大鼠KC烫伤后第4、6d的EGFmRNA表达以及第14d和创面再上皮化当日的LN表达,均较对照组明显增强(P<0.05)。体外培养的人KCs经胰岛素作用后,在不同细胞外基质上的黏附率均明显增加。结论胰岛素提高体外培养KCs的黏附能力并增强创面局部KCs分泌EGF和LN的功能,是其促进创面愈合的可能机制。

Ⅲ度烧伤患者血、尿肌红蛋白浓度的变化

检测２６例Ⅲ度烧伤病人伤后６ｄ内血、尿肌红蛋白浓度的变化，结果发现病人尿肌红蛋白的动态变化与血相似，可通过测定尿肌红蛋白浓度来推测烧伤的严重程度；血肌红蛋白浓度与Ⅲ度烧伤面积呈正相关（ｒ＝０．８０７９，Ｐ＜０．００１）；肌红蛋白血症的严重程度与病人早期死亡率无关，但可能与肾功能损害有一定关系。

系统控制的计算机仿真──应用于烧伤抗休克复苏临床治疗

采用仿真系统反馈算法，对5例烧伤休克病人的循环血浆容量，血浆蛋白浓度，血球压积和电介质的变化实行目标控制的计算机仿真。在这基础上获得了该病人的抗休克复苏的一个较优的补液方案。临床应用表明该方法可使目前烧伤临床上使用的抗休克复苏公式更加合理。