真皮生物模板对成纤维细胞生物学行为的影响

目的 研究真皮生物模板的应用对皮肤组织创伤修复过程中成纤维细胞 (fibroblast,FB)生物学行为的影响 ,探讨其在影响组织修复及减轻瘢痕形成中的作用机制。 方法 SD大鼠 12 0只 ,在背部造成 2 .5 cm× 2 .5 cm的全层皮肤组织缺损创面 ,随机分为 4个处理组 ,即开放创面组、全厚皮移植组、刃厚皮移植组、复合移植组 (无细胞真皮基质 +刃厚皮移植 ) ,分别于术后 1、2、4、6及 12周取材。通过免疫组织化学及图像分析技术检测组织标本中肌成纤维细胞 (myofibroblast,MFB)的标志蛋白—— α平滑肌肌动蛋白 (α smooth muscle actin,α- SMA)的表达以及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、整合素 α2 、β1 及转化生长因子 β1 (transforming growth factorβ1 ,TGF- β1 ) )的表达量。 结果 复合移植组 α- SMA在术后 1～ 12周低于开放创面组 ,术后 1、4、6周低于刃厚皮移植组 ,术后 2、12周高于全厚皮移植组(P<0 .0 5 ) ;复合移植组 FN在术后 1～ 12周低于开放创面组和刃厚皮移植组 ,术后 1～ 4周高于全厚皮移植组 (P<0 .0 5 ) ;复合移植组整合素 α2 在术后 1～ 12周低于开放创面移植组 ,术后 1～ 4周低于刃厚皮移植组 ,术后 1、2周高于全厚皮移植组 (P<0 .0 5 ) ;复合移植组整合素 β1 在术后 1～

糖尿病大鼠皮肤的组织化学改变

目的 :研究糖尿病 (DM)大鼠皮肤的组织化学改变 ,探讨DM难愈创面形成和发展的病理机制。方法 :用链脲佐菌素 (STZ)将SD大鼠诱导成速发型DM大鼠模型 ,并以正常大鼠作对照 ,分别于致病后 4、8和 12周获取大鼠背部中央的皮肤标本。应用HE染色 ,观察皮肤组织学的改变 ;应用Beckman’s生化自动分析仪检测皮肤组织匀浆的糖含量 ;采用F - 30 10荧光分光光度计测定皮肤胶原提取液的荧光强度 ;应用免疫组化和图像分析技术检测皮肤组织晚期糖基化终末产物 (AGEs)含量。结果 :组织学观察可见 ,DM大鼠表皮组织变薄 ,表皮细胞层次欠清晰 ,部分表皮缺乏复层排列 ;真皮层部分胶原萎缩、肿胀 ,退化变性 ,并伴有程度不等的炎性细胞浸润 ;皮下脂肪进行性萎缩或消失。皮肤糖含量在各时相点均显著高于正常对照 (P <0 . 0 1)。皮肤胶原提取液的荧光值亦高于相应年龄正常鼠 (P <0 0 5 ) ,并随病程增加。AGEs蛋白主要沉积于真皮基质和细胞中 ,以及皮肤血管基底膜周围 ,并随病程的发展 ,染色逐渐加深 ,呈片状。结论 :DM皮肤在损伤前就已发生明显的组织化学改变 ,而这些改变可能是由于局部高糖和AGEs累积所引发 ,并可能是DM难愈创面形成和发展的病理基础之一。

EGF对大鼠深Ⅱ度烫伤创面成纤维细胞的影响

目的探讨鼠表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor,EGF)对大鼠深Ⅱ 度烫伤创面成纤维细胞的影响。 方法采用流式细胞仪测定成纤维细胞的细胞周期 ,透射电镜观察成纤维细胞的形态 ,HE染色观察肉芽组织范围以了解成纤维细胞的功能变化。 结果应用EGF组和对照组大鼠分别于用药后第 3、6d有成纤维细胞增殖活性的增加 ,后又迅速恢复近正常水平 ,电镜下可见用药组大鼠成纤维细胞明显增生迹象 ;两组大鼠在肉芽组织范围及肉眼观察创面愈合天数上无明显不同。 结论按临床常规用药方法 ,EGF可在一定时相内增加成纤维细胞增殖活性 。

糖尿病烫伤大鼠血糖变化及其与创面皮肤组织糖含量的关系

目的 :探讨 2型糖尿病大鼠二度烫伤后血糖变化及其与创面组织糖含量之间的关系。方法 :采用清洁级大鼠 ,分成正常组 (n =2 4 )和枸橼酸 枸橼酸钠镁液配置成 2 %浓度 (STZ)诱导的速发型糖尿病组 (n =2 4 ) ,造成 10 %体表总面积 (TBSA)的浅二度烫伤模型 ,分别取伤后 1、3、5、7、10d和 14d创面皮肤组织块样本 ,采用生化技术测定血糖浓度和创面皮肤中的糖含量 ;并对创面进行组织学观察。结果 :皮肤组织创面中局部的糖含量与血糖变化有显著的相关性 (P <0 .0 5 ) ,糖尿病大鼠浅二度烫伤创面中局部糖含量明显高于正常组 (P <0 .0 1) ,且创面呈现延迟愈合或者加深不愈。结论 :糖尿病大鼠局部创面组织糖含量增加与血糖变化密切相关 ,而创面局部糖含量的增加与创面愈合延迟存在着不可分割的联系。

FGF—2生物活性与肝素类化合物

成纤维细胞生长因子—2(FGF—2)属能与肝素结合生长因子的大家族成员之一。FGF—2是潜在的促血管生长因子，对创面愈合和组织修复具有积极的促进作用。肝素类化合物对FGF—2生物学活性具有保护作用；肝素类化合物可通过与FGF—2的结合调节FGF—2储存和释放并参与形成FGF—2、FGFR分子，广泛的分布在所有哺乳动物组织和器官中。化学组成通常含有两种类型交替出现的单糖单位，如乙酰己糖胺和糖醛酸，并且至少含有一个酸性基(羧基或硫酸根)。

表皮、真皮因素对创面愈合中成纤维细胞生物学行为的影响

成纤维细胞参与创面愈合的全过程，是创伤愈合中主要的修复细胞之一，创伤后成纤维细胞被激活，发生迁移、增殖，分泌包括胶原在内的细胞外基质，参与肉芽组织及疤痕形成。在这一过程中成纤维细胞的生物学行为受多种因素的调控。表皮成分、真皮模板通过对成纤维细胞生物学行为的影响，可减少创伤后伤口收缩以及疤痕增生，从而改善了创面愈合质量。

晚期糖基化终产物修饰人血清白蛋白对人血管内皮细胞的生长抑制作用

目的 探讨晚期糖基化终产物 (AGE)在糖尿病难愈创面形成和发展中的作用机制。方法 将人脐静脉内皮细胞株ECV30 4细胞与不同浓度的AGE修饰人血清白蛋白 (AGE HSA)在体外共同培养。应用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法、锥虫蓝排斥实验和活细胞计数检测AGE HSA对血管内皮细胞的生长抑制作用。采用AnnexinVFitc和碘化丙啶 (PI)染色 ,通过流式细胞仪检测细胞凋亡百分率 ,同时应用荧光共聚焦显微镜观察凋亡或死亡细胞AnnexinVFitc和PI的荧光染色 ;利用透射电镜和光镜观察AGE HSA对内皮细胞的形态学影响。结果 内皮细胞经 12 .5、2 5和 5 0 μg/mlAGE HSA干预 2d后 ,各干预组细胞数与对照组比较无明显差异 (均P >0 0 5 ) ,而于 4d和 6d后明显低于对照组 ,细胞增殖抑制率显著上升。内皮细胞经 10 0或 2 0 0 μg/mlAGE HSA干预 6、12、2 4、4 8h后 ,MTT法测其吸光度A值在各时相点均显著低于对照组 (P <0 0 1) ,同时内皮细胞出现特异性的凋亡形态学变化 ,AnnexinVFitc阳性和 /或PI阳性的细胞逐渐增多 ,流式细胞仪测定的各时相点凋亡细胞百分率均显著高于对照组 (P <0 0 1) ,且凋亡或死亡细胞数量随AGE HSA作用时间及浓度的增加而增多。结论 AGE HSA能抑制内皮细胞增殖 ,并可以诱导其凋亡 ,而且与作用时间及浓?