酵母双杂交系统在病原生物学研究中的应用

酵母双杂交系统作为一种新型的研究蛋白质之间相互作用的方法是功能基因组学和蛋白质组学中一种重要的手段,其在病原生物学的后基因组研究中也日益广泛和深入.本文将从病原体与宿主蛋白之间相互作用、病原体内蛋白之间相互作用以及病原体蛋白自身相互作用等三方面作一综述.

病原微生物蛋白质组研究

随着蛋白质组研究技术的发展 ,微生物蛋白质组学研究进展很快。本文从病原菌遗传变异、致病机理。

基因芯片在细菌基因组学和细胞微生物学研究中的应用

利用基因芯片可以鉴定病原菌在不同宿主微环境中受到差异调节的基因、直接或间接由转录因子控制的基因,以及编码多步骤代谢和生物合成途径中各种组分的基因;通过比较基因组学研究,评价相关菌种和菌株的自然群体内遗传多样性的范围和特性,并在ORF水平描述病原体和共生体之间的差异;同时也可进行感染组织细胞基因表达分析,研究病原体和宿主之间复杂的相互作用关系。

严重急性呼吸综合征冠状病毒的分子生物学研究进展

引起严重急性呼吸综合征的冠状病毒是一种新型正股单链RNA病毒,长度约30kb。不同的流行毒株间,只存在点突变。病毒基因组中,存在着调控病毒转录、包装的关键序列。病毒编码的膜蛋白质(S、M、E)以及病毒内部的N蛋白和复制酶、蛋白酶,对于病毒进入宿主、复制、包装、病理等过程起看重要作用,因而成为重点研究对象。本文综述了该病毒分子生物学、生物信息学研究的进展。

微生物基因组研究进展

微生物基因组研究近年来发展很快,借助基因测序技术已完成多种微生物基因组测序。原核细胞生物基因组与真核细胞基因组具有各自特点。许多由基因控制的细菌遗传性状与细菌毒力有关,选择合适的靶基因研究可用于发展疫苗和开发新的诊断工具。同时,加快基因组功能性研究迫在眉睫。

微生物基因组与药靶研究

微生物基因组研究及其相关的技术平台发展迅速,为发现新的药靶和研制新型抗微生物药物提供了有利条件.除了毒力因子、保守基因外,其他一些分子也可成为潜在的药靶.基因功能研究为发现潜在的药靶提供了可能,也是药靶研究中的主要难点之一.现在已有了对候选药靶进行识别和有效性评估的系统,但还有待于进一步完善.

钩体LPS生物合成与装配途径及相关基因分析

目的 预测问号钩体黄疸出血型赖株脂多糖 (LPS)合成、装配途径 ,并对其中几个关键基因的特征进行深入分析。方法 使用NCBI/BlastX ,ProDom/Blast ,Jpred2 ,TMHMM对问号钩体黄疸出血型赖株全基因组ORF基因所编码蛋白进行在线分析 ,并使用Bioedit,PepTool软件进行蛋白质一、二级结构分析。 结果 确定了脂质A和核心多糖生物合成基因lpxA、lpxB、lpxC、lpxD、lpxK、kdsA、kdsB、kdtA、lnt、htrB和O -抗原生物合成基因簇rfblocus等以及装配、跨膜转运中的基因rf bP、rfbX、rfc、rfaL、rfe绘制了LPS合成及装配途径示意图。并对合成和装配途径中几个关键的基因编码蛋白 (LpxA、Rfc、RfbX、RfaL)的二级结构、跨膜区域、结构域等进行了分析。结论 问号钩体黄疸出血型赖株LPS合成、装配途径与典型的革兰阴性菌 ,如大肠埃希菌K - 12相似 ,主要差异在于钩体特殊的脂肪酸代谢途径和O -抗原多糖结构。该研究为进一步探讨钩体LPS基因功能及其与致病性关系奠定基础。

微生物蛋白质组研究进展

本文概括性地叙述蛋白质组相关的基本概念,主要蛋白质组技术,微生物学蛋白质组、比较蛋白质组、功能蛋白质组研究进展和蛋白质组技术在细胞微生物学研究中的应用。

树突细胞、病原体与免疫应答

当微生物侵入机体后,可诱导不同类型的免疫应答。对于胞内微生物,如病毒和某些细菌,CD4^+T细胞分化为分泌IFN-γ和具有一系列特定功能的Th1细胞。而对于胞外病原体,如蠕虫,则诱导产生Th2细胞,其所产生的细胞因子(IL-4、IL-5和IL-10)介导IgE和嗜酸性粒细胞破坏病原体。产生正确的免疫应答类型对机体生死攸关。在麻风病中,结核样型产生保护性Ⅰ型麻风反应,瘤型则为致死的Ⅱ型麻风反应。

疫苗类型与病原体毒力演变的关系

Gandon通过建立病原体毒力演变数学模型,研究有缺陷疫苗对病原体毒为演变的影响。发现4种类型疫苗中抗生长疫苗、抗毒疫苗使用后会导致病原体演变为高毒力株,抗感染疫苗使用后可使病原体演变为低毒力株,抗传播疫苗对病原体毒力影响较小。这一发现有助于疫苗的研究和应用。

卡氏肺孢子虫肺炎的病原、诊断和治疗药物

主要对卡氏肺孢子虫肺炎病原的分类地位 。

猪粪经蝇蛆生态处理后粪臭素和排污量的变化

观察家蝇幼虫 (蝇蛆 )生态处理猪粪后 ,猪粪中粪臭素和排污量的变化。以养猪场的猪粪为试验材料 ,经当地蝇蛆处理的猪粪作为处理组 ,未经蝇蛆处理的猪粪为对照组 ,测定两组猪粪样本中粪臭素 ( 3 -甲基吲哚 ,简称 3 -MI)、CODCr、BOD5和 NH3-N的质量浓度。经蝇蛆处理后每 kg猪粪中的 3 -MI、CODCr、BOD5和 NH3-N分别为 2 .76× 10 - 3、5 6.3 6、14 .84和 3 .41g;对照组中上述物质分别为 3 8.5 8× 10 - 3、12 3 .0 1、60 .0 7和 3 .64 g。经蝇蛆处理后的猪粪中的 3 -MI、CODCr和 BOD5分别减少了 92 .8%、5 4.2 %和75 .3 %;而 NH3-N的含量仅减少 6.3 %。蝇蛆生态处理猪粪可有效减少粪臭素和有机污染物 。

家蝇幼虫处理猪粪的效果研究

目的 观察家蝇幼虫 (蝇蛆 )处理猪粪的效果和猪粪中粪臭素和排污量的变化。方法 随机挑选约 40 0 0只蛹孵化成蝇 ,取产卵高峰期所产的卵 ,置于猪粪内孵化饲养 ,1周后计算出得蛆量、剩余粪量和处理前后粪内大肠菌群数的变化 ,并检测两组猪粪样本中粪臭素 (3 甲基吲哚 ,3 MI)、化学需氧量 (COD)、生化需氧量 (BOD5)和氨氮 (NH3 N )的含量。结果 平均得蛆量为粪量的 10 .49%～ 11.3 4% ,粪量平均减少到处理前粪量的 5 3 .73 %～ 5 4.83 % ;每克粪大肠菌群数减少 99.96%。经蝇蛆处理后猪粪中的 3 MI、COD和BOD5分别减少 92 .80 %、5 4.17%和 75 .3 0 % ,有显著性变化(P <0 .0 1) ;NH3 N的含量仅减少 6.3 0 % ,无明显变化 (P >0 .0 5 )。结论 家蝇蛆生态处理猪粪 ,可减少粪的排放量和粪中的大肠埃希菌 ,也可有效地减少粪臭素和有机污染 ,有利于改善环境。

钩端螺旋体赖株豚鼠感染模型的建立和免疫组化法对钩体抗原的检测

目的 建立钩端螺旋体赖型赖株感染豚鼠的动物模型 ,并用免疫组化法检测钩端螺旋体抗原在组织中的分布。方法 不同剂量钩端螺旋体赖株通过腹腔内注射感染豚鼠 ,观察豚鼠发病情况 ,及时解剖死亡豚鼠 ,HE染色观察肝、肾、肺等器官病变 ,EnVision二步法染色检测肝、肾、肺组织中钩体抗原。结果 感染后豚鼠发病 ,死亡与感染的钩端螺旋体剂量明显相关 ,大体标本及HE染色光镜下均出现典型钩体病病变。免疫组化显示在肝、肾、肺组织中均存在钩体抗原。结论 通过钩端螺旋体赖株腹腔注射的方法成功地建立了豚鼠动物模型。应用EnVision二步法染色 ,可有效显示组织中的钩体抗原。为进一步研究钩端螺旋体发病机制奠定了基础。

日本血吸虫Sjp50重组蛋白用于免疫诊断的研究

目的 克隆和表达日本血吸虫免疫素 Sjp5 0的编码基因 ,初步研究其免疫反应性。方法 根据 EST测序的结果设计引物 ,从含有免疫素基因片段的克隆中扩增得到该编码基因 ,亚克隆入原核表达载体 p GEX4 T- 1中表达 ,然后用 EL ISA方法初步检测重组蛋白的免疫反应性。结果 成功克隆和表达了日本血吸虫 Sjp5 0基因。该重组蛋白用于血吸虫抗体的 EL ISA检测 ,在动物实验中检测特异性和敏感性分别为 94 .12 %和 76 .6 7% ,非治疗组兔体内的抗体在感染后 9- 11周上升到高水平 ,并在感染后 2 1周仍维持在高水平 ,而治疗组兔血清中抗 Sj Fp5 0抗体水平在治疗后 11周迅速下降至感染前抗体水平。用于血吸虫病人血清中的抗体检测的特异性为 98.30 % ,急性病人和慢性病人检测的敏感性分别为 95 .2 0 %和 6 3.2 0 %。结论 获得了 Sjp5 0的重组蛋白 ,该蛋白能被日本血吸虫病人的血清所识别 ,且在动物实验中其抗体水平在药物治疗后 11周降至感染前的水平 ,具有诊断现症感染病人和疗效考核的潜能。

问号钩端螺旋体溶血素基因特征分析

目的 预测问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株致病因子———溶血素基因 ,并对其编码蛋白结构特征进行深入分析。方法 使用NCBI ,Swissprot/TrEMBL ,ProDom ,Pfam ,Jpred2 ,TMpred ,SignalP ,ClustW对问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株溶血素基因诠释 ,所编码蛋白进行在线分析 ,并使用Bioedit软件进行氨基酸同源性比较分析。结果 确定了问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株 9个溶血素基因 ,分为两大类 :鞘磷脂酶类溶血素基因和非鞘磷脂酶类溶血素基因。并对溶血素基因编码蛋白二级结构、结构域、跨膜区域、信号肽及进化等进行了分析。结论 多种类型多条溶血素基因同时存在于钩端螺旋体菌中 ,暗示溶血素基因和钩端螺旋体致病性之间有密切的关系 。

猪粪经家蝇幼虫生态处理后肥料养分和微量元素含量变化的研究

采用室内培养试验方法,观察研究了猪粪经家蝇幼虫(蝇蛆)处理后肥料养分和微量元素含量的变化。结果表明,Y株和Z株2株蝇蛆处理后猪粪中的有机质、氮、磷、钾等肥料养分和铜、铁、锌、锰4种微量元素的含量无显著性差异。处理组猪粪中的全磷、速效磷、全钾、铜、铁和锰的含量分别比对照组增加64.2%、25%、44.2%、18.9%、37.9%、39.9%;有机质和全氮含量则比对照组分别下降19.8%和34.8%。说明猪粪经蝇蛆生态处理后其全磷、速效磷、全钾、铁和锰含量明显增加,而有机质和全氮含量则明显减少。

蝇蛆生态处理猪粪对家蝇产卵和孵化的影响

目的 观察猪粪经蝇蛆生态处理后 ,家蝇孳生繁殖的变化。 方法 分别以经蝇蛆处理和未处理的猪粪作为家蝇孳生繁殖场所 ,比较两种孳生场所家蝇产卵量和孵化率。 结果 处理猪粪中家蝇的产卵量仅占总产卵量的17 7% ,未处理猪粪中家蝇的产卵量占总产卵量的 82 3 %。处理的猪粪中的蝇卵孵化率为 41 4% ,未处理猪粪中的蝇卵孵化率为 85 1%。 结论 猪粪经蝇蛆生态处理后 。

幽门螺杆菌VacA真核表达载体的构建及其诱导细胞空泡化和凋亡

目的 :研究幽门螺杆菌空泡毒素作为单一毒力决定簇对真核细胞的作用。方法 :用 PCR扩增vac A基因片段 ,克隆入真核表达载体 p EGFP- N 1,构建重组质粒 p EGFP- vac A,转染 He L a细胞 ,通过相差显微镜和电子显微镜观察细胞形态与结构的变化。结果 :重组质粒转染 He L a细胞 2 4 h,10 %～ 2 0 %细胞的胞质内出现明显空泡 ,其中少数细胞发生凋亡改变。结论 :成功构建了用于真核表达的重组 vac A质粒 ,转染真核细胞后 ,观察 Vac A作用导致的细胞形态结构的变化 ,为研究 Vac