神经肽对老化过程中神经细胞培养寿命影响的实验研究

采用小鼠神经母细胞瘤细胞无血清培养建立神经细胞老化实验研究模型。以倒置相差显微镜观察精氨酸加压素(AVP)、神经降压素(NT)和强啡肽(DYN)对老化过程中实验性神经细胞培养不同时间存活细胞个数的影响。结果发现NT和DYN都可使细胞存活个数增加(P<0.01)。提示这两种神经肽皆可延长实验性神经细胞的培养寿命而延缓细胞的老化进程,但不能阻止细胞老化的总趋势。

强啡肽A（1～8）对实验性神经细胞氨基酸类递质影响的实验研究

采用小鼠神经母细胞瘤细胞（ＮＢＡ２）无血清培养建立神经细胞老化实验研究模型。以氨基酸自动分析术观察强啡肽（ＤＹＮ）对实验性神经细胞内氨基酸类神经递质的影响。结果发现ＤＹＮ可使天门冬氨酸（Ａｓｐ）和谷氨酸（Ｇｌｕ）这两种兴奋性氨基酸含量显著降低（Ｐ＜０．０１）；使抑制性氨基酸中的甘氨酸（Ｇｌｙ）含量升高（Ｐ＜０．０５）。提示ＤＹＮ使兴奋性氨基酸Ａｓｐ和Ｇｌｕ含量降低及使抑制性氨基酸Ｇｌｙ含量升高的作用可能是其延缓实验性神经细胞老化的机制之一。

血管活性肠肽对神经细胞脂褐素影响的实验研究

采用小鼠神经母细胞癌细胞无血清培养建立神经细胞老化实验研究模型。以显微荧光分光光度术测定的细胞内脂褐素自发荧光值为神经细胞老化指标，观察血管活性肠肽（ＶＩＰ）对实验性神经细胞内脂褐素荧光值的影响。结果发现：ＶＩＰ作用５ｄ可显著升高细胞内的脂褐素荧光值（Ｐ＜０．０１）．提示ＶＩＰ可加速实验性神经细胞的老化过程。

神经肽对神经细胞脂褐素影响的实验研究

本研究采用小鼠神经母细胞瘤细胞无血清培养建立神经细胞老化实验研究模型,以显微荧光光度计测定的脂褐素自发荧光值为神经细胞老化指标,观察精氨酸加压素(AVP)、神经降压素(NT)和强啡肽(DYN)对脂褐素荧光值的影响。结果发现AVP、NT和DYN都可显著降低脂褐素荧光值(P<0.01)。提示这三种神经肽可以延缓神经细胞的老化进程。

神经降压素对实验性神经细胞内兴奋性氨基酸含量影响的研究

本研究采用小鼠神经母细胞瘤细胞（ＮＢＡ２）无血清培养建立神经细胞实验研究模型。以氨基酸自动分析术观察神经降压素（ＮＴ）对实验性神经细胞内氨基酸类神经递质的影响。结果发现：ＮＴ可使细胞内天门冬氨酸（Ａｓｐ）和谷氨酸（Ｇｌｕ）这两种兴奋性氨基酸含量显著降低（Ｐ＜０．０１），而对抑制性氨基酸中的甘氨酸（Ｇｌｙ）和γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）的影响不大（Ｐ＜０．０５）。结果提示：ＮＴ使兴奋性氨基酸Ａｓｐ和Ｇｌｕ含量降低的作用可能是其延缓实验性神经细胞老化的机制之一。

精氨酸加压素对实验性神经细胞老化过程中细胞周期和细胞总蛋白的影响

采用小鼠神经母细胞瘤细胞无血清培养，建立神经细胞老化实验研究模型。以流式细胞光度术观察精氨酸加压素（ＡＶＰ）对老化过程中实验性神经细胞的细胞周期和细胞总蛋白的影响。结果发现ＡＶＰ可产生延缓细胞老化的细胞周期和细胞总蛋白的变化。提示ＡＶＰ通过使细胞周期、ＤＮＡ和细胞总蛋白等发生变化来发挥其延缓实验性神经细胞老化的作用。

脑啡肽对小鼠神经母细胞瘤细胞脂褐素影响的实验研究

本文应用小鼠神经母细胞瘤细胞A_2(NB-A_2)无血清培养建立的神经细胞老化实验研究模型,以显微荧光分光光度术测定单个细胞内脂褐素荧光值作为细胞老化指标,观察了脑啡肽(LE)对NBA_2细胞内脂褐素荧光值的影响。结果表明LE可显著降低细胞内的脂褐素荧光值(P<0.01)。提示LE可延缓NBA_2细胞的老化进程。

神经降压素对实验性神经细胞老化过程中细胞周期和细胞总蛋白的影响

目的：观察神经降压素（ＮＴ）对实验性神经细胞老化过程中细胞周期，ＤＮＡ和细胞总蛋白的影响。方法：采用小鼠神经母细胞瘤细胞无血清培养建立神经细胞老化实验研究模型。以流式细胞光度术测定的细胞周期，ＤＮＡ和细胞总蛋白为实验性神经细胞老化的指标，观察ＮＴ对这些指标的影响。结果：ＮＴ促使滞留于Ｇ１期的老化细胞向Ｓ期转化并降低伴随培养时间延长而增高的细胞总蛋白。结论：ＮＴ是通过使细胞周期、ＤＮＡ和细胞总蛋白发生变化来发挥其延缓实验性神经细胞老化的作用。

实验性神经细胞老化与DNA和细胞总蛋白的相关性研究

应用流式细胞光度术观察无血清培养对神经母细胞瘤细胞（ＮＢＡ２）的ＤＮＡ、细胞周期和细胞总蛋白的影响，以建立神经细胞老化实验研究模型，结果发现：无血清培养１天，多数细胞被阻滞于Ｓ期，细胞总蛋白降低；１０天时多数细胞停止于Ｇ１期，细胞总蛋白升高。结果表明：在无血清培养条件下，ＮＢＡ２细胞由分裂增殖转变为分化成熟老化，反映了神经细胞的老化过程，因而神经细胞老化实验研究模型建立良好。结果揭示：环境的剧烈变化可以改变细胞的老化过程，不良的生存条件可以加速细胞老化，并且这种改变可能是通过细胞自身调节合成ＤＮＡ和蛋白质的功能来实现的。

胆囊收缩素（CCK8）对实验性神经细胞老化过程中脂褐素的影响

目的 观察CCK8对实验性神经细胞老化过程中脂褐素的影响。方法采用小鼠神经母细胞瘤细胞（NBA2）无血清培养建立神经细胞老化实验研究模型。以显微荧光分光光度术测定单个细胞内脂褐素自发荧光值作为细胞的老化指标，观察CCK8对这些指标的影响。结果在无血清培养条件下，细胞内脂褐素荧光值随培养时间的延长而累积性增加（P<0.01）。将CCK8加入无血清培养液，CCK8作用10天和15天都可显著降低细胞内脂褐素荧光值（P<0.01）。结论在无血清培养条件下，NBA2细胞由分裂增殖变为分化成熟老化，反映了神经细胞的老化过程，而CCK8可延缓细胞的老化过程。

强啡肽对实验性神经细胞老化过程中M胆碱能受体位点数影响的研究

目的 探讨强啡肽 (DYN)对实验性神经细胞 M受体位点数的影响。方法 采用小鼠神经母细胞瘤细胞 (NBA2 )无血清培养建立神经细胞老化实验研究模型。以 M受体放射性配基分析术研究 DYN对实验性神经细胞的 M受体位点数的影响。结果 两种不同浓度的 DYN皆可使M受体位点数下降 (P<0 .0 1 ) ,以高浓度组更显著。结论 DYN使 M受体位点数下降的作用可能是延缓实验性神经细胞老化的机制之一。(最终浓度为 0 .1nmol/L) ,以测定非特异性结合。各管加入2 0 0 μl膜蛋白液 ,37℃振荡温育 4 0 min。冰冷缓冲液终止反应。6 9型纤维滤膜三层抽滤并淋洗 ,滤膜烘干 ,投入 5 ml闪烁液(含 0 .4 % PPO的三甲苯 )中 ,以 YSL- 76型液闪计数器做固相测定。1.8 数据处理 实验得到特异性结合的技术率 ,被测定效率除 ,等于特异性结合衰变率 ,再除以放射性配基活度 ,即等于特异性结合位点数〔7〕。采用 POMS方差分析 ,经 IBM微机处理数据。2 结果与讨论DYN对 NBA2 细胞 M胆碱能受体位点数的影响 ,见表 1。表 1 DYN对 M受体位点数的影响 (nmol/10 6 细胞 )组别 n M受体位点数 (x± s)BSD组 5 449.796± 356.730AID组 5 486.941± 2 4 7.1 65DYN- 7组 5 1 4 5.71 4± 77.82 61 )DYN- 8组 5 1 51 .873± 95.80 61 ) 注

精氨酸加压素、神经降压素和强啡肽对神经母细胞瘤细胞cAMP和cGMP的影响

本文报道小鼠神经母细胞瘤细胞在无血清培养条件下,用cAMP和cGMP放射免疫测定方法,观察AVP、NT和DYN对小鼠神经母细胞瘤细胞内cAMP和cGMP水平及cAMP/cGMP比值的影响。结果发现:AVP使cAMP水平和cAMP/cGMP比值显著升高(P<0.01);DYN使cGMP水平升高(P<0.01),但cAMP/cGMP比值下降;NT使cAMP水平和cAMP/cGMP比值下降,同时又使cGMP水平升高。结果提示:这三种神经肽可以分别对神经母细胞瘤细胞内cAMP、cGMP水平和cAMP/cGMP比值产生影响。

人胚胎海马发育的形态学研究──Ⅱ．神经细胞与神经胶质细胞的分化

利用Ｈ－Ｅ和Ｎｉｓｓｌ染色法、免疫细胞化学法、Ｇｏｌｇｉ镀银法及透射电镜技术，对６０例６周至足月人胚胎海马神经细胞及神经胶质细胞的分化、发育进行了观察。结果表明；神经细胞及神经胶质细胞均由未分化细胞转化而来。未分化细胞、神经细胞和神经胶质细胞在对硝酸银的嗜染性、免疫细胞化学特征及超微结构特征等方面都有显著差别。神经细胞为神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）阳性细胞，主要有锥体细胞、颗粒细胞和篮状细胞等。星形胶质细胞和放射状胶质细胞为胶质原纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）阳性细胞。未分化细胞体积小、球形、胞质少，为ＮＳＥ及ＧＦＡＰ阴性，硝酸银镀染也不着色；透射电镜下未分化细胞核异染色质丰富，胞质内缺乏特化的细胞器，但糖原含量丰富。胚胎早期室管膜神经上皮细胞及由此迁徙而来的中间层细胞均由未分化细胞构成。星状胶质细胞和放射状胶质细胞出现较早，第１１周开始出现于室管膜下的室床及海马伞部；随胎龄增加，单位面积垦状胶质细胞数量增加，１７周后维持在相对稳定状态，并且均匀分布于海马各个部位与区域。１５周后中间层细胞陆续开始分化为锥体细胞和颗粒细胞，到足月胚胎锥体层及颗粒层不再有未分化细胞。

强啡肽［DynA（1－8）］对体外神经细胞老化过程中细胞周期和总蛋白的影响

用小鼠神经母细胞瘤细胞无血清培养建立神经细胞老化实验模型。以流式细胞光度术观察ＤｙｎＡ（１－８）对老化过程中神经细胞的细胞周期和细胞总蛋白的影响。结果发现ＤｙｎＡ（１－８）可延缓细胞老化的细胞周期和细胞总蛋白的变化。提示ＤｙｎＡ（１－８）是通过使细胞周期和细胞总蛋白发生变化以发挥其延缓神经细胞老化的作用。

人胚胎海马发育的形态学研究Ⅲ．肽能神经元的发生

利用Ｇｏｌｇｉ镀银法、免疫组织化学法，对不同胎龄人肛胎海马的肽能神经元进行了研究．发现ＳＳ阳性神经元于胚胎１９周出现，ＳＰ阳性神经元、ＮＰＹ阳性神经元于１７周出现，ＧＡＢＡ阳性神经元在１６周即已显示。随胎龄增加，肽能神经元不断增多．肽能神经元广泛分布于海马的各区，但以多形层最为多见．和锥体细胞及颗粒细胞相比，肽能神经元有下列形态特点：（１）细胞形态和大小差异较大；（２）细胞突起多少不一，出现部位也无一定规律；（３）轴突投射范围小，但分枝多．Ｇｏｌｇｉ可以同时显示多种不同肽能神经元．ＧＡＢＡ阳性细胞与ＳＳ阳性细胞在发生时间和形态特点方面具有高度一致性，说明ＳＳ可与ＧＡＢＡ共存。

人胚胎海马发育的形态学研究 Ⅳ SS能神经元的原位杂交法观察

本研究用原位分子杂交技术对24例不同胎龄的人胚胎海马中生长抑素（SS）编码的mRNA进行了检测，现察了SS杂交阳性细胞的发生、发育规律．观察结果表明：SS的原位杂交阳性细胞于胚胎16周开始出现，主要位于Ammon’s角、齿状回的多形层，也有一部分出现于锥体细胞层．分子层则未发现有SS杂交阳性细胞存在．SS阳性细胞的数量随胎龄增加而不断增多．其形态特点、数量变化和分布规律，都显示SS能神经元在结构上的完善与海马功能的成熟之间存在着密切关系．

神经肽对神经母细胞瘤细胞分裂和代谢的影响

神经-内分泌-免疫系统作为机体的整合系统,在衰老变化的发生和发展过程中起着重要的作用。一些资料表明,伴随神经系统的老化,脑和脑脊液中一些神经肽也显著变化。本实验采用小鼠神经母细胞瘤细胞无血清培养建立神经细胞老化实验研究模型,以流式细胞光度术研究神经肽对无血消培养的神经母细胞瘤细胞的细胞周期和细胞总蛋白的影响。以了解神经肽对神经细胞老化过程中的DNA和细胞总蛋白的影响。1

生物肽对鼠脑微血管内皮细胞的影响

用脑组织匀浆及尼龙网逐级过滤技术分离鼠脑微血管，再用胶原酶及胰酶处理使血管细胞分散后进行细胞培养，脑微血管内皮细胞Ⅷ因子相关抗原，γ－谷氨酰转肽酶及碱性磷酸酶染色均为阳性，光镜与电镜检查均显示为微血管内皮细胞结构。研究了７种生物肽对培养的内皮细胞的影响：它们都未能使细胞γ－谷氨酰转肽酶活力发生变化，对细胞的增殖效应也无统计学意义。但血管活性肠肽、神经降压素及强啡肽使细胞内ｃＡＭＰ含量提高（Ｐ＜０．０５），提示这３种生物肽在调节脑微血管内皮细胞正常生理功能上可能起一定作用。

干细胞与神经元、神经胶质细胞的分化

神经细胞与神经胶质细胞的分化是发育神经生物学中颇具挑战性问题，目前仍有许多问题有待探索与解决。对这一领域的研究作一回顾与总结，有助该课题的深入研究。

人胚胎海马发育的形态学研究──Ⅰ．一般结构观察

利用Ｎｉｓｓｌ染色及体视学方法，对６０例６周至足月人胚胎海马进行了研究。根据海马形态变化及锥体细胞分化特征，将海马发育分为三个阶段．第一期以海马外形及内部结构建立为主；第二期以锥体细胞的形成和海马外形、内部结构进一步完善为特征；第三期锥体细胞日趋成熟．在胚胎早期，锥体层和颗粒层由大量未分化细胞构成，细胞为球状，体积小，胞质少，染色深，以后逐步分化为锥体细胞及颗粒细胞．体视学资料表明，颗粒细胞、锥体细胞的数密度及细胞核体密度随胎龄增长而降低，而细胞算术平均体积则逐步增加。上述参数变化因其部位不同而有所差异，说明锥体细胞分化、发育是不均匀的。ＣＡ２区分化快，发育好，颗粒细胞分化最迟缓。