初发系统性红斑狼疮患者Th1/Th2及其调控因子IL-10IL-12基因研究

目的 探讨初发系统性红斑狼疮 (SLE)病人Th1/Th2分布及其调控细胞因子、细胞因子受体基因表达的差异。方法 运用三色荧光标记法流式细胞术检测 42例未经药物治疗初发狼疮病人 ,T细胞亚群分布 ,并以 10名正常人作对照 ;同时运用ABI 770 0实时监测定量PCR法检测其中 38例病人和 2 8名正常人IL 10 /IL 12mRNA及其受体表达的差异。结果 ①初发SLE病人Th1较正常人明显减低 (P <0 0 5 ) ;但Th1/Th2无显著性改变。②与正常组相比 ,SLE组病人IL 10mR NA表达差异无显著性 ,但IL 10R表达明显升高 (P <0 0 5 ) ;SLE组病人IL 12mRNA及其受体表达较正常人明显降低 (P均 <0 0 5 )。③红斑组病人Th1/Th2、IL 12 p35较正常组降低 (P均 <0 0 5 ) ;IL 10R较正常组显著增高 (P <0 0 5 )。④RNP阳性组病人IL 10、IL 12p40较正常组升高 ,IL 12p35较正常组降低 (P均 <0 0 5 )。 结论 SLE是一种以Th1细胞下降 ,Th2细胞相对占优势的免疫介导的自身免疫性疾病 ,源于诱导向Th1细胞分化的IL

干扰素诱导表达的淋巴细胞抗原6复合体E和干扰素诱导蛋白1基因与系统性红斑狼疮患者病情活动性的关系

目的 探讨系统性红斑狼疮 (SLE)患者外周血单个核细胞 (PBMC)中干扰素诱导表达的淋巴细胞抗原 6复合体E(LY6E)基因与干扰素诱导蛋白 1(IFIT1)基因的实时定量表达水平与SLE疾病特异性和病情活动的相关性。方法 收集 14 4例SLE患者、2 7例非SLE患者与 5 9名正常对照人群的临床资料 ,取外周血抽提总RNA并逆转录成cDNA ,运用SYBRgreendyeⅠ实时定量聚合酶链反应 (PCR)在ABIPRISM 790 0H基因测序仪上检测患者组和对照组的LY6E和IFIT1mRNA定量表达水平 (以 -ΔΔCT值表示 )的差异 ,并与病情活动度进行分组比较 ,分析其意义。结果 ( 1)SLE患者总体的LY6EmRNA -ΔΔCT值 ( 5 5± 2 0 )显著高于非SLE患者 ( 3 4± 1 7,P =0 0 0 0 )和正常人 ( 4 5± 1 6 ,P =0 0 0 1)。 ( 2 )SLE活动组的LY6E和IFIT1的mRNA -ΔΔCT值 ( 6 2± 1 8,6 5±2 6 )均显著高于SLE非活动组 ( 4 4± 1 8,4 1± 2 6 ) (均P =0 0 0 0 )。 ( 3)SLE患者组的LY6E和IFIT1mRNA -ΔΔCT值与SLEDAI积分、符合SLE分类标准的条数之间有相关性 (P <0 0 0 1)。结论 作为干扰素诱导表达的基因 ,LY6EmRNA定量水平的升高对SLE患者的诊断有一定的特异性 ,LY6EmRNA和IFIT1mRNA的实时表达水平对SLE患者的病情活动度判断均有较大价值 。

系统性红斑狼疮患者外周血干扰素基因的定量表达

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中IFN α、 β、 ω和 γmRNA与蛋白的定量表达水平与SLE疾病特异性和病情活动性是否相关。方法 对 144例SLE患者、27例非SLE患者与 59例正常人取外周血抽提总RNA并逆转录成cDNA,运用实时定量PCR法在基因测序仪上检测 4种IFN的mRNA表达水平,分离血浆,用ELISA法检测 4种蛋白水平,并与病情特异性和活动性进行分组比较,分析其意义。结果 (1)SLE患者组的 4种IFNmRNA定量表达水平均显著低于正常对照组, 差异有统计学意义 (P值均<0 01);SLE患者组的IFN αmRNA定量表达水平同时显著高于非SLE对照组 (P<0 01 )。(2)SLE活动组与非活动组之间的 4种IFN表达水平差异无统计学意义(P值均>0 05),SLE患者组的 4种IFNmRNA表达水平与有无肾、肺、脑损害无相关性。(3)SLE患者组的IFN积分显著低于正常对照组, 差异有统计学意义 (P<0 01 )。(4)SLE患者组和正常对照组组内的 4种IFN表达水平之间均呈强正相关 (各组间P<0 01 )。(5)IFN α、 β和 ω的蛋白水平在正常对照和SLE患者中差异均无统计学意义 (P值均 >0 05),IFN α的蛋白水平在活动期SLE患者比非活动期显著增高 (P<0 01 )。IFN γ的蛋白水平在SLE患者中有升高趋势。结论 IFN α、 β、 ω和

寡腺苷酸合成酶家族基因的定表达与系统性红斑狼疮的临床特征

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中寡腺苷酸合成酶(OAS)1、OAS2和OASLmRNA的实时定量表达水平与SLE疾病特异性和病情活动度的相关性。方法收集144例SLE患者、27例非SLE患者与59名正常对照人群的临床资料,取外周血抽取总RNA并反转录成cDNA,运用sybrgreendyeⅠ实时定量聚合酶链反应(PCR)法在ABIPRISM7900H基因测序仪上检测患者组和对照组的OAS1、OAS2的OASLmRNA表达水平的差异,并与病情活动度进行分组比较,分析其意义。结果①SLE患者的总体OAS1mRNA定量表达水平显著高于非SLE对照组和正常对照组,差异有非常显著性(P=0郾016,P=0郾000);OAS2mRNAP定量表达水平高于正常对照组(P=0郾015);而OASLmRNA定量表达水平与非SLE对照组和正常组之间差异无显著性(P=0郾698,P=0郾396)。②SLE活动组的OAS1和OASLmRNA定量表达水平均显著高于SLE非活动组,差异有非常显著性(P=0郾011,P=0郾001)。但SLE活动组的OAS2表达水平与SLE非活动组之间差异无显著性(P=0郾109)。③SLE患者组的OAS2和OASLmRNA定量表达水平与SLEDAI积分呈正相关性(P=0郾001,P=0郾006)。④SLE患者的肾、肺、脑、血液等器官的有无受累与OAS1、OAS2和OASLmRNA表达水平无相关性。⑤SLE患者组和正常对照组组内的OAS1。

干扰素诱导蛋白3基因在系统性红斑狼疮发病中的意义及其真核表达载体的构建

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中干扰素诱导蛋白3(IFIT3)基因mRNA的实时定量表达水平与SLE疾病特异性和病情活动度的相关性,同时构建IFIT3基因的真核表达载体pGFP-IFIT3以备研究其免疫学功能。方法收集144例SLE患者、27例非SLE患者与59名正常对照人群的临床资料,取外周血抽提总RNA并逆转录成cDNA,运用SYBRgreen实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测患者组和对照组的IFIT3mRNA表达水平的差异,并与病情活动度进行分组比较,分析其意义。用gateway基因克隆技术,将含有IFIT3开放阅读框(ORF)序列的穿梭质粒与GFP融合蛋白表达载体pGFP-DEST53连接为重组子,构建IFIT3基因的真核表达载体pGFP-IFIT3,并进行酶切电泳和测序鉴定。结果①SLE患者组的IFIT3mRNA-ΔΔCT值显著高于非SLE对照组(P=0.012)和正常对照组(P=0.000)。②SLE活动组的IFIT3mRNA-ΔΔCT值显著高于SLE非活动组(P=0.036),SLE患者组的IFIT3mRNA-ΔΔCT值与SLE疾病活动指数(SLEDAI)积分有非常显著的正相关性(P=0.005)。③构建的重组真核表达pGFP-DEST53质粒经酶切电泳和测序鉴定,分子大小与序列均正确。结论作为干扰素诱导表达的基因,IFIT3mRNA定量表达水平的升高对SLE患者的诊断有一定的意义,同时对SLE患者的病情活动度和病情严重度的判断有一定价值。成功构建了IFIT3基因的真核表达载体pGFP-IFIT3,为以后研究其免疫学功能提供了基础。