流式细胞术检测细胞内细胞因子方法的建立

目的建立流式细胞术检测细胞内细胞因子的方法。方法运用荧光标记的抗细胞表面抗原单抗及抗细胞因子单抗，结合固定、破膜处理技术，检测产生ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４的ＣＤ４＋、ＣＤ8＋细胞以及产生IＬ－１０的ＣＤ３＋细胞。同时以相应同种型ＩｇＧ染色细胞作为阴性对照，以确定细胞团于染色的特异性。结果产生ＩＦＮ－γ的ＣＤ４＋及ＣＤ８＋细胞明显多于产生ＩＬ－４的细胞，并且产生ＩＦＮ－γ的ＣＤ８＋细胞百分比较ＣＤ４＋细胞相对增多；同时产生ＩＦＮ－γ／ＩＬ－４的ＣＤ４＋、ＣＤ８＋细胞以及产生ＩＬ－１０的ＣＤ３＋细胞都较少。结论该方法可从单个细胞水平直接检测全血标本中Ｔ细胞亚群和单核细胞等细胞因子的分泌。

系统性红斑狼疮合并急性冠状动脉综合征4例报道及文献复习

目的 探讨系统性红斑狼疮 (SLE)累及患者冠状动脉的流行病学、病理生理学及临床特点。方法 收集分析 4例SLE合并急性冠状动脉综合征 (ACS)患者的临床和实验室资料并复习相关文献。结果 绝经期前女性SLE患者中ACS发病率明显增高。ACS是病程长的SLE患者的重要合并症。动脉粥样硬化和血栓形成是累及冠状动脉的最主要原因 ,冠状动脉血管炎及其他与SLE活动有关的因素则较为少见。结论 SLE患者存在早发ACS ,冠状动脉病 (CAD)

白介素-10启动子区域基因变异与中国人群狼疮发病相关

目的 采用连锁不平衡方法在中国汉族人群中验证白介素 (IL) 10基因是否与系统性红斑狼疮 (SLE)存在显著相关性。方法 在中国汉族人群中 ,对IL 10启动子区内的 3个单核苷酸 (SNP)位点和IL 10G微卫星标记进行分型 ,并采用病例对照结合传递不平衡检验 (TDT)方法分析分型结果。结果 ①中国汉族人群与其他人群的IL 10启动子区内的遗传标记多态性分布及配对连锁不平衡检验的差异有显著性。②病例对照研究发现 ,SLE患者IL 10G138等位基因频率(5 2 % )较正常对照组 (4 2 % )显著增高 (P =0 .0 0 9) ;类风湿性关节炎 (RA)患者IL 10G136等位基因频率和IL 10G14 4等位基因频率均较正常对照组显著增高 (P值分别为 0 .0 0 0 2和 0 .0 0 3)。③单位点的TDT检测发现 ,IL 10G138bp从父母优势传递给患病后代 (传递∶不传递 =94∶6 1,P =0 .0 0 81) ;多位点的TDT检测发现 ,某些特定的单倍型从父母优势传递给患病后代。结论 本研究显示IL 10基因是SLE的易感位点 ,IL 10基因的多态性标记或者直接参与SLE的发病过程 。

自身核抗原U1RNP 70 kD多肽全长基因克隆及鉴定

应用逆转录ＰＣＲ方法从Ｈｅｌａ细胞中成功地克隆了编码自身核抗原Ｕ１ＲＮＰ７０ｋＤ多肽的全长基因，将此基因重组入原核表达载体系统ＰＧＥＸ－２Ｔ中，以限制性酶切及核苷酸测序鉴定扩增的ＤＮＡ片段，经计算机分析，基因全长１．３ｋｂ，编码４３７个氨基酸，并进行了基因同源性比较。结果表明，克隆得到的基因与Ｇｅｎｂａｎｋ报道的完全一致，蛋白质一级结构分析表明编码的７０ｋＤ多肽在羧基片段有３个可能的抗原性区域，该多肽的抗原表位可能主要存在于羧基半段上，为重组蛋白的表达及抗原表位的定位研究奠定基础。

磷脂抗体阳性红斑狼疮患者周围血T细胞受体基因表达初探

目的：初步探讨ＳＬＥ 患者周围血Ｔ细胞受体Ｖβ基因是否存在偏移。方法：应用荧光ＰＣＲ 定量方法对ＨＬＡＤＲＢ１＊ ０８０３／ＤＱＡ１ ＊ ０１０３ 的抗磷脂抗体阳性ＳＬＥ患者４ 例，病人对照干燥综合征（ＳＳ）１ 例，正常对照３ 例进行周围血ＴＣＲＶβ的分析。结果：健康者和病人对照的ＴＣＲ仅少数Ｖβ（ ＜５ 个Ｖβ基因） 有轻微增高表达。１ 例非活动性ＳＬＥ患者与对照组相仿，但３ 例活动性ＳＬＥ的ＴＣＲＶβ基因谱呈多克隆激活，其中２ 例有１５ ～１７ 个Ｖβ基因呈中度以至高度表达，甚至Ｖβ／Ｃα高达１００５％（Ｖβ４／Ｃα） 和２０８８ ％ （Ｖβ２／Ｃα） 。３ 例活动性ＳＬＥ的Ｖβ７、Ｖβ１２、Ｖβ２２ 都呈现异常增高表达，与正常对照有显著差异（ Ｐ ＜ ００５ ～００１）。结论：选择性的ＴＣＲＶβ基因的优势表达可能对ＳＬＥ的发病和活动起极大的作用。

免疫印迹法检测可提取核抗原多肽抗体谱的临床应用分析

目的 探讨临床应用免疫印迹法 (IBT)检测可提取核抗原 (ENA)多肽抗体谱中出现的常见问题和解决措施。方法 于 98年和 99年相继 3次对上海部分大中型医院相关实验室进行IBT法抗ENA抗体检测的血清交流和测定 (主要为抗Sm、抗U1RNP、抗SS A/Ro、抗SS B/La、抗核糖体P蛋白等 5种自身抗体 ) ,归纳和分析存在的主要问题。结果 1.因缺乏对风湿病自身抗体谱以及IBT技术的了解 ,常导致对抗Sm、抗SS A/Ro、抗U1RNP等抗体的判断有误 ;2 .对国际上尚未公认的IBT法“自身抗体”显色区带不宜出具检验报告。 3.通过交流 ,有关实验室的检测水平得到逐步提高。结论 为保障临床IBT法抗ENA抗体检测质量 ,需对该项目有较全面的了解 ,并有必要建立培训。

小剂量激素合并霉酚酸酯治疗狼疮性肾炎

目的 观察小剂量激素合并霉酚酸酯 (MMF)治疗狼疮性肾炎 (LN)的疗效及不良反应。方法 32例不同病理类型的LN患者中 ,有 2 9例治疗前进行肾穿刺活检。给予小剂量激素 (泼尼松 <0 .5mg·kg-1·d-1)合并MMF(1.5 g/d)治疗 ,持续 6个月 ,观察疗效及不良反应。结果 本组治疗的总有效率为 6 2 .5 %。各病理类型中有效的病例数分别为 :Ⅲ型LN 2 /2例 ,Ⅳ型LN 13/2 1例 ,Ⅴ型LN 4 /6例 ;未作肾穿刺活检组为 3/3例。 7例次 (2 1.8% )发生不良反应。

基因表达研究方法的进展

信使RNA的发现 ,遗传密码的破解 ,人们对蛋白质合成的基因调节有了更深入的理解 ,在此基础上提出了基因表达的现代概念。随之出现了全球性的基因表达研究的热点。在检测和定量分析基因表达水平的过程中 ,出现了很多种方法和技术 ,本文就Northern杂交法、S1核酸酶保护法、差减杂交技术、差异显示法、cDNA文库的序列测定、基因表达的系列分析。

SLE孕妇子宫动脉及胎儿脐动脉血流测定

本文分析研究了ＳＬＥ孕妇子宫动脉血流量和胎儿脐动脉血流量的变化。ＳＬＥ孕妇其脐动脉血流量收缩期峰值和舒张期峰值之比、阻力指数、搏动指数均大于正常对照组（Ｐ＜０．０５），而每搏输出量、每分输出量均小于正常对照组（Ｐ＜０．０１），病例组左侧子宫动脉血流量收缩期峰值和舒张期峰值比值、阻力指数、搏动指数明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０５），其每搏输出量、每分输出量小于正常对照组但差异无显著性。５例ＳＬＥ孕妇治疗后脐动脉血流收缩期峰值和舒张期峰值之比、阻力指数、搏动指数下降，每搏输出量、每分输出量上升（Ｐ＜０．０５）。

聚类分析在自身免疫病基因表达谱研究中的初步应用

目的 探讨聚类分析方法在自身免疫病基因表达谱研究中的应用价值。方法 从正常对照及自身免疫病患者外周血提取总RNA ,逆转录合成单链、双链cDNA后 ,体外转录合成生物素标记的cRNA与基因芯片进行杂交 ,再经抗原抗体反应和标记荧光染料Cy3标记后 ,用基因芯片扫描仪进行图像扫描。经QuantArray分析软件将扫描的图像信息转化为数据。然后 ,进一步将标准化的数据用GeneSpring分析软件进行试验样本和基因的聚类分析。 结果 10例系统红斑狼疮 (SLE)、1例多发性肌炎 (PM )和 1例类风湿关节炎 (RA)患者与 1名正常对照外周血细胞的基因表达谱是不同的 ,患者之间的表达谱因临床表现的异质性 ,其表达谱也有差别 ,但SLE的聚类可与PM、RA相区分 ,同一SLE患者 ,2次采血所得的表达谱具有极强的相似性。基因聚类分析显示 ,具有相似功能的基因具有相似表达模式 ,据此可发现许多已知基因的免疫功能。结论 聚类分析方法能根据基因表达谱 ,将基因进行功能分类 ,故可将自身免疫病的样本进行疾病分类。因此 。

神经精神狼疮的诊断和治疗

目的对神经精神狼疮患者的诊断和治疗进行临床总结.方法对83例SLE患者进行回顾性分析总结.42例为神经精神狼疮(NPSLE)患者;41例为无临床神经精神症状的SLE对照组.对两组病人实验室检查,包括血液:细胞计数、电解质、肝肾功能、血糖、血脂、血沉;免疫学检测:补体、抗dsDNA抗体、可提取的核抗原(ENA)、间接荧光抗核抗体(IFANA)、抗磷脂抗体等;尿:尿常规、24 h尿蛋白;脑脊液:常规、生化、脑脊液压力、细菌、霉菌学检查、免疫球蛋白检测;影像学检查:脑电图(EEG)、脑CT、脑核磁共振.治疗:对于昏迷、癫痫大发作、急性意识障碍的重症NPSLE患者治疗的甲泼尼龙(MP)起始剂量约200～500 mg/d;对于一般认知障碍、磷脂抗体综合征、局灶性NPSLE(FNPSLE)的泼尼松剂量约1～2mg·kg-1·d-1.当MP剂量渐减至100 mg/d应及时适当应用环磷酰胺(CTX)、甲氨蝶呤(MTX)、硫唑嘌呤(AZA)等免疫抑制剂.统计学分析:Fisher′s精确试验和t检验.结果临床症状方面,NPSLE和SLE对照组比较,面部红斑(71%:44%)和皮肤/胃肠道血管炎的发生率(67%:27%)差异有显著性(P＜0.001).血清学检测,两组比较,仅抗磷脂抗体(aCL)和/或抗β2糖蛋白1(β2GP1)差异有显著性,其发生率分别为43%和22%(P＜0.05).42例NPSLE患者,其中33例为弥漫性NPSLE(DNPSLE),9例为FNPSLE.该两组比较,DNPSLE患者的蛋白尿和皮肤/胃肠道血管炎的发生率显著高于FNPSLE(P＜0.001).42例NPSLE患者,4例死亡;38例NPSLE治疗前后的SLEDAI积分分别为19.71和6.47,经统计分析差异有非常显著性(P＜0.001).结论①NPSLE的确诊必须排除感染、电解质等其他原因所致的SLE中枢神经系统损害;②结合CSF、EEG、脑MRI分析可提高NPSLE诊断的敏感性;③对重症NPSLE患者,静脉滴注MP 500 mg/d×3 d是有益的,对临床和MRI呈现轻度至中等度损害的NPSLE患者,基本激素(泼尼松)剂量1～2mg·kg-1·d-1;④APS所致的NPSLE患者,中等剂量的激素和抗血小板以及抗凝治疗.

三色法流式细胞术检测胞内细胞因子的建立

运用荧光标记的抗细胞表面抗原单抗及抗细胞因子单抗， 结合固定、破膜处理技术， 建立了三荧光染色法流式细胞术检测细胞内细胞因子的方法， 探讨了不同刺激剂及细胞培养时间的选择， 并对５ 例正常人产生ＩＦＮγ、ＩＬ４ 的ＣＤ４ 及ＣＤ８ 细胞进行测定。结果表明： 产生ＩＦＮγ的ＣＤ４ 及ＣＤ８ 细胞明显多于产生ＩＬ４ 的细胞， 并且产生ＩＦＮγ的ＣＤ８ 细胞百分数比较ＣＤ４ 细胞相对增多； 同时产生ＩＦＮγ／ＩＬ４ 的ＣＤ４ 、ＣＤ８ 细胞较少。此方法可从单个细胞水平直接用于Ｔ细胞亚群及其细胞因子的检测。

系统性红斑狼疮患者及其家庭成员外周血基因表达谱的研究

目的研究家族性SLE患者、一级亲属和正常人外周血基因表达谱的改变,探讨家族性SLE发病机制。方法首先从外周血提取总RNA,逆转录合成单链、双链cDNA后,体外转录合成生物素标记的cRNA与基因芯片进行杂交,再通过抗原抗体反应机制标记上荧光染料Cy3后,使用基因芯片扫描仪进行图像扫描。使用分析软件进行表达差异和聚类分析。结果在3000多个基因中,鉴定出59个基因存在表达差异,其中有34个基因表达上调,25个基因表达下调,这与散发性SLE患者的表达差异基因基本相同。在34个表达上调基因中,有22个基因在SLE患者和其未患病的姐妹中都表达上调;在25个表达下调的基因中,有17个基因在SLE患者和其未患病的姐妹中都表达下调。聚类分析显示根据外周血基因表达谱可明确地将SLE患者、未患病亲属及正常人对照区分开。结论该基因芯片技术有较高的重复性和稳定性,能有效地进行家族性SLE疾病相关基因的初步筛选。

SLE患者自身抗体单链噬菌体抗体库构建及抗体活性检测

本文用ＳＬＥ病人外周血淋巴细胞抽提ＲＮＡ，采用ＲＴＰＣＲ反应以人的特异性ＨｕＶＨＢＡＣＫ、ＨｕＪＨＦＯＲ和ＨｕＶＬＢＡＣＫ、ＨｕＶＬＦＯＲ引物扩增人抗体的ＶＨ和ＶＬ基因片段，并将其与ｌｉｎｋｅｒ拼接成ＳｃＦｖ片段克隆于大肠杆菌，使其与噬菌体基因Ⅲ的产物以融合蛋白的形式在噬菌体表面表达，从而构建了ＳＬＥ病人的单链噬菌体抗体库，ＥＬＩＳＡ检测证明ＳｃＦｖ基因产物具有抗体活性。ＳＬＥ噬菌体抗体库的构建为ＳＬＥ发病机理、诊断和治疗研究打下了良好的基础。

并发肺间质变临床无肌炎皮肌炎的研究进展

特发性炎性肌病是以骨骼肌炎症为特征的一组异质性疾病，包括皮肌炎、多肌炎。这类疾病的患者存在不同程度的肌肉、皮肤和肺脏等脏器累及。本文主要集中于临床上少见的，但病情进展又十分凶险的皮肌炎的亚类——临床无肌炎皮肌炎。本文着重对并发肺间质变的临床无肌炎性皮肌炎做一简单综述。