上海儿童医学中心WT-99方案诊治儿童肾母细胞瘤临床报告

目的 改善儿童肾母细胞瘤预后。方法 对 1998年 10月～ 2 0 0 1年 10月住院明确诊断为肾母细胞瘤及肾肉瘤的 2 0例病人采用外科手术、内科化疗、选择性放疗 ,病理科、影像学科协作诊断综合治疗 (即上海儿童医学中心WT 99方案 )。按方案中条件根据分期及其他危险因素进行分组 ,并按分组给予不同药物组合和强度的化疗。Ⅰ期及Ⅱ期病理分型预后良好型的不放疗 ,估计手术不能完全切除时给予 2个疗程术前化疗。结果 全组 2 0例 ,年龄 7个月至 12岁。病理分类预后良好型14例 ,预后不良型 3例 ;透明细胞肉瘤 2例 ,横纹肌肉瘤样 1例。临床结合病理分期为Ⅰ期 5例 ,Ⅱ期5例 ,Ⅲ期 6例 ,Ⅳ期 3例 ,Ⅴ期 1例。全组 2 0例中获完全缓解 18例 ( 90 % ) ,2例初治失败 ,缓解后复发1例。无病生存时间平均 2 7个月 17例 ( 11～ 45个月 ) ,占 85 % ,目前均已停药。结论 所采用多专业联合诊断治疗工作模式及上海儿童医学中心WT

血液病儿童输注血制品后病毒感染风险的前瞻性调查

目的 了解血液病儿童输注血制品后的感染情况。方法 用ELISA法检测输血制品前后甲～庚肝的抗原或抗体。结果 63例每人平均接受8.8人次和1250ml的血制品,输前CMV IgG(+)88％,Anti-HBs(+)50％,EBVIgG(+)16％,HEVIgG(+)4.7％,Anti-HBc(+)4.7％,Anti-HBe(+)3.2％,输后总的感染率各自为91.2％,50％,20.7％,4.7％,4.7％,3.2％,前后无统计学差异。输后新出现阳性结果7例,2例CMV IgG,1例HCV IgG,3例EBVIgG,1例HBs-Ag,没有新发现HEV、HGV、CMV IgM、EBV IgM及HBV-Ag阳性。新感染病例与输注量及人次无相关性。结论 提示上海地区血制品相对安全。

上海地区汉族人谷胱甘肽S转移酶基因多态性分析(英文)

目的 测定GST基因在上海地区健康汉族人中的遗传多态性 ,筛选出汉族人的GST候选单核苷酸多态性 (SNP)位点 ,为开展GST基因多态性与汉族人群肿瘤易感性及治疗相关性研究作一初步探索。方法 采用荧光标记自动测序法 ,筛选GSTT1,GSTM1基因在 2 0名上海地区的汉族健康志愿者中的候选SNP位点。结果4例受检者在GSTT1外显子 4和 3之间的第 86 0 5 7位点发生点突变 ,由腺嘌呤A取代鸟嘌呤G ,经与Genebank中SNP数据库比对 ,可能为一新的GSTT1基因候选SNP位点 ;在外显子 5的第 793位点和 92 1位点 ,所有受检者均为G&A的杂合子。GSTM 1在 8个外显子中均发现有候选SNP位点 ,但多为单核苷酸的杂合子。约 4 0 %受检者的外显子 2出现腺嘌呤A缺失 ,所有受检者在第 1383位点和 1385位点分别是A&G受C&G杂合子 ;在第 10 1位点 6 0 %个体为A&T杂合 ,4 0 %个体为腺嘌呤A的纯合子。我们还初步发现在外显子 2的 190bp以后可能存在多个碱基或小片段缺失。结论 上海地区健康汉族人的GST基因具有丰富的遗传多态性。这些多态性是否为汉族人所特有、与肿瘤易感性的关系 ,以及这些可能的候选SNP位点是否会造成其编码氨基酸的改变并引起产物蛋白一级结构的变化、进而导致GST酶活性发生改变而表现为具有不同的表型及基因型 ,尚需深入?

泼尼松诱导试验评估儿童急性淋巴细胞白血病预后

目的探讨泼尼松诱导试验评估儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)预后的价值。方法126例ALL初治患儿按ALLXH99治疗方案行泼尼松诱导试验,口服泼尼松(60mg/m2)7d和氨甲蝶蛉加阿糖胞苷鞘内注射1次后外周血涂片计数幼稚淋巴细胞数。若幼稚淋巴细胞数<1000/μL,为泼尼松反应良好;如幼稚淋巴细胞数≥1000/μL,为泼尼松反应不良。生存分析采用KaplanMeier方法;各组生存的比较采用logrank检验;各生物学特征的比较采用χ2检验或Fisher确切概率法(双尾)。结果110例患儿表现为泼尼松反应良好,16例患儿表现为泼尼松反应不良;5年无事件生存率(pEFS)分别为73%±5%与48%±13%,差异有统计学意义(P=0.0021)。结论泼尼松诱导试验简单,易操作,可方便地评估早期治疗反应。

儿童B系急性淋巴细胞性白血病微小残留病的相关因素及预后分析

目的了解检测儿童B系急性淋巴细胞性白血病(ALL)微小残留病(MRD)在临床上的意义,探讨其相关因素及预后的关系。方法用一种胞浆与胞膜、特异与敏感的标志相结合,CD45/SSC双参数图设门的三色流式细胞术(FCM)对67例儿童B系ALL在诱导治疗结束时(诱导第28～37d)进行MRD监测。结果67例随访病人低危组为18例,中危组为35例,高危组为14例,MRD在3组之间差异有显著性(P<0.005),高危组的MRD(+)率明显较低、中危组高(P<0.005)。MRD与起病时的性别、年龄、白细胞数之间无相关性(P>0.05)。MRD在早期治疗反应上也无明显的统计学差异(P>0.05)。而MRD与复发及中位无事生存期密切相关,MRD(+)组复发率明显较MRD()组高(P<0.05),MRD(+)组中位无事生存期也短于MRD()组(P<0.005)。结论检测MRD有助于了解疗效以及初步判断其预后以便调整治疗策略,是目前随访儿童ALL的有效方法。

中国急性白血病儿童的细胞色素P450-3A4基因型多态性分析

目的阐明中国急性白血病(AL)和健康儿童中细胞色素P450-3A4(CYP3A4)的基因型分布特点,探讨CYP3A4基因型多态性与儿童白血病的易感性及化疗效应之间可能的相关性。方法应用PCR-RFLP及DNA测序法检测120例AL和85例健康儿童的CYP3A4基因型,分析两组CYP3A4基因型差异。结果85例健康儿童中仅1例为CYP3A4*1B的杂合子基因型,均为野生型,杂合子型的突变频率为1.2%;120例AL儿童中5例(4例ALL和1例AML)表现为杂合子基因型,1例ALL为纯合子基因型,其杂合子基因型突变率为4.2%,纯合子基因型突变率为0.8%。经PCR-RFLP检测并经DNA测序验证,所有受检者的CYP3A4*3基因型均为野生型。结论虽然AL患儿的CYP3A4*1B基因突变率高于健康儿童,但差异无显著性,因此尚不能推论CYP3A4*1B基因型与中国儿童AL发病相关。CYP3A4*3基因在中国健康和AL儿童中是一种罕见的等位基因,其对于CYP3A4酶活性的影响及其在白血病发生中的作用有待进一步探讨。

t(8;21)与儿童AML-M_2临床表现及预后的相关性探讨(英文)

目的 探讨t(8;2 1)对儿童AML -M2 的疗效和预后的影响。方法 对 14例有t(8;2 1)和 2 1例无t(8;2 1)的M2 患儿的临床特征、疗效、复发率、死亡率及无病生存率进行分析。结果 14例t(8;2 1)和 2 1例无t(8;2 1)的M2 患儿在年龄、白细胞数等临床特征上的差异无统计意义 (P >0 .0 5 )。t(8;2 1)组的完全缓解 (CR)率明显高于无t(8;2 1)组 (92 .9%vs 5 7.1% ) (P <0 .0 5 ) ,而两组的复发率和死亡率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。总的无事生存率t(8;2 1)组低于无t(8;2 1)组 (6 9.2 %vs 77.8% ) (P <0 .0 5 )。结论 t(8;2 1)的儿童M2 并不一定具有良好的预后。t(8;2 1)对M2 预后的影响可能存在人种及地区的差异。

转录因子PAX5在儿童急性白血病细胞中的表达

为了观察了解儿童急性白血病细胞中转录因子PAX5的表达特性,采用实时定量RT-PCR方法测定了6个血液肿瘤细胞株以及6例正常儿童、58例初发和4例复发急性白血病儿童(其中包括39例B-ALL,10例T-ALL和13例AML)骨髓细胞中PAX5和CD19mRNA的表达水平。结果表明:在Namalwa(B细胞系)细胞株中,PAX5和CD19mRNA相对表达量分别为2.35%和2.52%;而在T-和髓系细胞株中几乎不表达。在临床样本中B-ALL组比T-ALL组和AML组的PAX5mRNA表达高(P=0.029和P=0.013)。T-ALL组和AML组的PAX5mRNA表达水平均低于正常对照组,而T-ALL组与AML组之间的表达差异无显著意义。在B-ALL患儿中,PAX5mRNA表达的个体差异很大。此外还发现,初发治疗前组和复发组的B-ALL患儿PAX5mRNA表达高于化疗完全缓解组(P=0.011和P=0.006)。由于在CD19基因的启动子上有B细胞特异性激活蛋白的结合位点,研究发现在B-ALL中PAX5表达水平与同样用实时定量RT-PCR检测的CD19表达水平之间存在明显的相关性。结论:运用实时定量RT-PCR方法能快速准确地在B-ALL的临床标本中检测和定量PAX5基因的表达。研究中发现部分B-ALL中PAX5mRNA表达明显升高,因此它可将其作为进一步研究B-ALL发病机理的另一个切入点。

高效液相色谱法测定急性白血病儿童细胞色素P450 3A4活性的探讨

目的细胞色素P450 3A4(CYP3A4)参与了许多环境毒物及包括多种常用化疗药物在内的人体中50%以上的药物代谢,多态性研究表明,CYP3A4的活性具有广泛的个体差异,并显示出明显的种族和疾病分布特征.目前国内外尚无进行大样本CYP3A4活性测定方法的报道.本研究旨在建立简便、稳定、可靠的CYP3A4活性的检测方法,探讨健康儿童和急性白血病儿童CYP3A4的活性分布特点,为临床开展相关的药效学研究奠定基础.方法采用高效液相色谱法(HPLC),同时检测85名健康儿童和120名急性白血病儿童的CYP3A4活性.结果以峰面积内标法定量,线性范围0.01～5 mg/L,检测限:氢化考的松(HC)为0.01 mg/L,6β-羟基氢化考的松(6β-OHC)为0.03mg/L.HC的日内、日间误差分别小于2%和5%,6β-OHC的日内、日间误差则分别小于7%和屯10%,绝对回收率为98%～106%.健康儿童的CYP3A4活性范围为2.34～48.88,平均活性为9.76±6.99,急性髓细胞白血病(AML)患儿的CYP3A4活性为13.97±10.84,两组之间无显著性差异(P>0.05).急性淋巴细胞白血病(ALL)儿童的CYP3A4活性范围变化很大,从2.00～585.72不等,平均活性为53.52,明显高于AML组和健康儿童(P1=0.0066,P2=0.0065).结论该方法可简便、快速地测定CYP3A4活性,灵敏度和准确性较高,重复性好.ALL儿童的平均CYP3A4活性明显高于AML组和健康儿童,而后两者之间差异无显著性.

儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病的检测及其临床意义

现代联合化疗方案使儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)的治愈率得到了显著提高 ,但复发是阻碍长期无病生存的主要原因。个体化治疗可极大地提高ALL患儿的预后及长期生活质量。近年来 ,随着免疫学及分子生物学技术的发展 ,作为制定个体化治疗重要依据的微小残留病检测大规模用于临床已成为可能。该文总结分析了目前检测微小残留病的常用技术 ,特别是聚合酶链反应的原理、优缺点及微小残留病检测的临床意义。

基因治疗应用于肿瘤的研究进展

基因治疗在基因异常性疾病的治疗中潜在作用很大 ,尤其是在肿瘤治疗中。目前 ,基因替代、基因剔除、肿瘤疫苗和反义核苷酸等方法正得到广泛的研究。虽然受到载体转染效率的影响 ,体内外研究的发展仍使许多基因治疗药物进入了I期临床试验 ,甚至是Ⅱ期和Ⅲ期临床试验 ,其中又以反义核酸类药物居多 ,并有部分基因治疗药物已经进入临床应用。

儿童异基因造血干细胞移植术后感染的实验观察

目的了解儿童异基因造血干细胞移植的感染率和特点。方法对上海儿童医学中心从2002年11月到2004年8月共18例异基因造血干细胞移植的血液肿瘤患儿,发生移植后感染的所有病例进行回顾性分析。结果18例异基因造血干细胞移植患儿,发生细菌、真菌感染的13例,感染率为72·2%;在28株分离菌中,革兰阳性菌14株,革兰阴性菌8株和真菌6株。主要细菌为凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌属、大肠埃希氏菌和克雷伯菌属,且大多数细菌耐药。实时定量PCR监测移植后人类巨细胞病毒(HCMV)感染发现:有16例患儿发生至少一次的HCMV感染,感染率为88·9%。结论感染是儿童异基因造血干细胞移植术后主要的并发症,临床早期诊断、定期监测、及时地合理治疗对降低移植术后感染和提高移植成功率至关重要。

PAX5/BSAP在儿童急性白血病细胞和血液肿瘤细胞株中的表达研究

目的了解儿童急性白血病细胞和血液肿瘤细胞株中转录因子PAX5/BSAP的表达特性。方法采用实时定量RTPCR方法,检测了6个血液肿瘤细胞株以及6例正常儿童、58例初发和4例复发急性白血病儿童骨髓细胞中PAX5和CD19mRNA的表达水平。采用WesternBlotting分析了6个血液肿瘤细胞株和4个临床样本中BSAP表达水平。采用RNAi(RNA干扰)技术特异性阻断NAMALWA细胞株(B细胞系)中PAX5的表达。结果在NAMALWA细胞株中,PAX5和CD19mRNA相对表达量分别为2.35%和2.52%;而在T和髓系细胞株中几乎不表达。同时运用WesternBlotting在B系细胞中检测到一52KD的BSAP条带,但在T和髓系细胞中为阴性。在临床样本中BALL(急性B淋巴细胞白血病)组比TALL(急性T淋巴细胞白血病)组和AML(急性髓细胞性白血病)组的PAX5mRNA表达高(P=0.029和P=0.013)。在BALL患儿中,PAX5mRNA表达的个体差异很大。RNAi技术抑制NAMALWA细胞株中PAX5基因表达达35%,但不影响细胞增殖效率(P<0.05)。结论部分BALL中PAX5mRNA表达明显升高,可作为进一步研究BALL发病机理的另一个切入点。RNAi技术可进一步用于B系血液恶性肿瘤细胞的观察研究。

自身造血干细胞移植治疗儿童晚期恶性实体肿瘤

目的 评价自身干细胞移植治疗儿童晚期恶性实体肿瘤的安全性及疗效。方法13例次患儿直接采集骨髓 ,另 15例患儿经粒细胞集落刺激因子 (G CSF)动员后从外周血获取单个核细胞 ,对 1例疑有肿瘤细胞浸润的采集物经CliniMACS进行了CD+3 4 细胞分选的净化处理。除 2例霍奇金淋巴瘤患儿经CBV方案 (CTX +BCNU +VP16 ) (环磷酰氨、卡氮芥及依托泊甙 )治疗外 ,其余患儿均采用VP16 +卡铂 +马法兰的预处理方案。结果 采集骨髓及外周血得到的单个核细胞分别为 ( 5 4± 2 1)× 10 8/kg和 ( 4 1± 1 9)× 10 8/kg。所有患儿移植后均获得造血重建 ,中性粒细胞恢复至 0 5×10 9/L的时间为 ( 11 8± 5 7)d ,血小板大于 2 0× 10 9/L的时间为 ( 2 1 0± 9 3)d。移植过程中 3例患儿分别合并表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌和枯草杆菌败血症 ,无一例因移植相关并发症而死亡。但 1例出现急性肾功能不全、肺水肿、心包积液并发展为呼吸窘迫综合征 ,经机械通气、应用肺表面活性物质等积极治疗后康复 ;另 1例出现BCNU相关的肺损伤 ,导致严重的肺动脉高压、嗜酸性细胞增多 ,经皮质激素等治疗后逐渐好转。本组平均随访 13个月 ,2 7例患儿中 5例移植后 5个月内因疾病复发而死亡 ;1例非霍奇金淋巴瘤患儿移植后

ALK^+非霍奇金淋巴瘤的研究进展

NPM—ALK融合基因的发现使非霍奇金淋巴瘤在分子生物学上有了一类明确的亚型。NPM—ALK融合基因来源于t(2;5),NPM基因位于5q35,而ALK基因位于2p23,两个基因的突变位点几乎不变。通过特异的抗体和PCR等方法可以鉴别出该亚型。近年来,研究发现了不同的ALK融合基因,而在其它疾病中也发现存在该融合基因。NPM—ALK融合基因的确切生物学功能及其作用废物尚未完全明确,通过对其机制的研究,将为该亚型的非霍奇金淋巴瘤的靶向治疗开辟新的途径。

RNAi阻断NPM-ALK基因表达及对大细胞间变性淋巴瘤细胞的影响(英文)

目的应用RNA干扰技术抑制大细胞间变性淋巴瘤细胞系(Karpas299)中NPMALK融合基因表达,观察其对肿瘤细胞生长的影响。方法针对NPMALK融合位点设计两个siRNA序列siRNAI与siRNAII,经PCR反应构建含U6启动子siRNA正义和反义线性表达载体,通过脂质体转染Karpas299细胞,应用实时荧光定量RTPCR、Westernblot检测siRNA片段对NPMALKmRNA和蛋白表达的抑制作用,MTT、Hoechst荧光染色检测siRNA对肿瘤细胞生长的影响。结果siRNAI可导致NPMALKmRNA下降约75%(P<0.05),转染72h后可导致蛋白表达下降;转染siRNAII细胞NPMALKmRNA下降为35%(P<0.05),但蛋白水平无明显改变。转染siRNAI的细胞可抑制Karpas299细胞的增殖和诱导凋亡发生,siRNAII则无明显的抑制增殖和诱导凋亡作用。结论含有针对NPMALK融合位点特异siRNA序列的U6表达载体,可特异地抑制NPMALK基因mRNA和蛋白的表达,并能抑制大细胞间变性淋巴瘤肿瘤细胞株Karpas299细胞的增殖,导致肿瘤细胞凋亡增加,提示NPMALK融合基因的异常表达与大细胞间变性淋巴瘤形成密切相关,为研究NPMALK基因功能和大细胞间变性淋巴瘤基因靶向治疗提供了新策略。

大细胞间变性淋巴瘤中间变性淋巴瘤激酶基因异常研究进展

间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因异常存在于半数以上的大细胞间变性淋巴瘤(ALCL)患者中,其编码的融合蛋白具有酪氨酸激酶活性,ALK蛋白的异常激活被认为与ALCL的发生有关。对ALK基因及其信号转导通路的研究有利于阐明肿瘤的分子病理机制,并为ALCL的治疗提供新的靶点,成为目前研究的热点之一。