应用DiI标记犬脐血内皮祖细胞的实验研究

目的 应用DiI标记犬脐血内皮祖细胞，为内皮祖细胞的研究提供细胞标记方法。方法 取犬的脐带血，用添加有EGM-2MV的EBM-2在纤连蛋白包被的六孔板上培养。检测细胞表面抗CD31、CD34、vWF及FLK-1的表达。用DiI标记内皮祖细胞，用荧光显微镜观察内皮祖细胞的荧光情况。结果 4-6d有细胞贴壁生长，7-14d可见贴壁细胞呈克隆型生长，呈典型的“铺路石”样外观。传代后，细胞生长良好。细胞表面抗体检测显示为：CD31（＋），CD34（＋），vW因子（＋），FLK-1（＋）。荧光显微镜下见内皮祖细胞的细胞浆内有红色荧光。阳性率（68．8±1．6）％。结论 应用DiI标记犬脐血内皮祖细胞．方法简单，染色效果好，是内皮祖细胞示踪的好方法。

上海地区新生儿先天性肾上腺皮质增生症的筛查

目的 在上海地区新生儿疾病筛查项目中调查先天性肾上腺皮质增生症的发病率。方法 对来自市郊 5 0家妇婴保健医院、产科医院 5 0 60 0例出生 3d的新生儿足根刺血 ,滴于专用采血滤纸上 ,用酶免疫吸附试验方法测定干血滤纸片上 17 羟孕酮 ( 17 OHP)水平。结果 在 5 0 60 0例新生儿中发现 8例新生儿 17 OHP水平明显升高。经进一步检查 ,3例确诊为先天性肾上腺皮质增生症 2 1羟化酶缺乏 ,患者伴有血钾升高 ,血钠降低 ,睾酮水平增高。另外 5例为早产原因所致 17 OHP升高。结论 干血滤纸片法测定 17 羟孕酮适用于大规模开展先天性肾上腺皮质增生症筛查。本病在上海地区的发病率为 1∶16866。

21-羟化酶基因第1外显子27insCTG(10insL)多态性研究

目的 研究 2 1-羟化酶基因 (CYP2 1)第 1外显子 2 7ins CTG(10 ins L )的发生率及其与先天性肾上腺皮质增生症 (congenital adrenal hyperplasia,CAH)不同临床分型的关系。方法 PCR扩增 ,Kpn 限制性内切酶消化验证 PCR产物为特异性扩增 ,巢式 PCR扩增和 DNA测序 ,用 10 %聚丙烯酰胺凝胶电泳筛查第 1外显子 2 7ins CTG的发生率。结果 DNA测序证实在第 1外显子 2 7位存在 2种等位基因类型 :CTG插入为 型 ;无 CTG插入为 型。等位基因 型和 型的频率 CAH患者分别为 77.8%、2 2 .2 % ;5 0名正常对照者则为 83%、17% ,两组人群中基因型与等位基因频率差异无显著性。 CAH患者中 ,12例失盐型与 15例非失盐型等位基因频率 型和 型分别为 91.7%、8.3%及 6 6 .7%、33.3% ,两组中基因频率分布差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 中国人 CYP2 1基因外显子 1存在 2 7ins CTG多态性 ,其基因频率在正常对照组与 CAH组中差异无显著性。