实时定量逆转录-聚合酶链反应监测慢性粒细胞白血病患者融合基因转录本水平及其变化

目的探讨实时定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)在监测慢性粒细胞白血病(慢粒)患者微小残留病变、考核疗效以及预测疾病预后方面的应用。方法应用实时定量RT PCR对11例慢粒患者治疗前后融合基因(BCR ABL)转录本水平的变化进行监测,对55例不同病期患者之间的转录本水平进行比较。结果对于慢性期患者,造血干细胞移植后其BCR ABL转录本水平明显下降,甚至检测不到,甲磺酸伊马替尼(格列卫)治疗可获得类似结果,而羟基脲、干扰素α或三尖杉酯碱治疗后,其BCR ABL转录本水平虽有下降但仍维持在较高水平;患者发生急变时,其BCR ABL转录本水平升高约10倍;急变期患者的转录本水平明显高于慢性期或加速期患者。结论实时定量RT PCR方法准确可靠,对于监测慢粒患者的微小残留病变、考核疗效以及预测慢粒急变具有重要的临床应用价值。

白血病致病基因产物靶向治疗:从急性早幼粒到其他类型白血病

近20年来,上海血液学研究所应用全反式维甲酸(ATRA)作为分化诱导剂治疗急性早幼粒细胞性白血病(APL)获得了重大突破,使肿瘤细胞逆转的设想从理论走向实践,也使ATRA治疗APL成为肿瘤诱导分化疗法最成功的典范.本研究组在国际上首先发现了APL变异型染色体易位t(11;17)(q23;q21),并克隆了APL特异的染色体易位t(15;17),t(11;17)和t(5;17)所形成的PML-RARα,PLZF-RARα与NPM-RARα融合基因,建立了APL系列转基因小鼠,证实了其在白血病发病中的作用.核受体共抑制物(CoR)与PML-RARα形成的复合物受ATRA调控,而ATRA不能使PLZF-RARα与CoR形成的复合物发生解离,不仅从分子水平阐明了ATRA治疗APL疗效的差异,还开辟了针对细胞转录调控治疗的新途径.从1994年起,本研究组应用三氧化二砷(As2O3)治疗复发的APL取得成功,完全缓解率可达70%-80%,还发现As2O3对APL的治疗呈剂量依赖性的双重作用,即小剂量时诱导细胞发生部分分化,而较高剂量时诱导细胞凋亡.进一步研究发现,As2O3可使PML的第160位赖氨酸与泛素样SUMO-1结合,导致PML-RARα降解.虽然ATRA与As2O3的作用靶点均为异常转录因子PML-RARα,但前者通过针对RARα受体,后者通过PMLSUMO化后使PML-RARα致病蛋白发生降解,进而诱导APL细胞分化或凋亡.由于ATRA和As2O3作用途径?

多重荧光原位杂交技术体系的建立及其在检测白血病复杂核型异常中的应用

目的 建立多重荧光原位杂交技术 (multiplex fluorescence in situ hybridization,M- FISH)体系 ,探讨其在检测白血病复杂核型异常中的应用。方法 联合应用常规核型分析、染色体涂抹 (chromo-some painting,CP)、染色体荧光原位杂交 (fluorescence in situ hybridization,FISH)和 M- FISH方法分析了两例白血病复杂核型。结果 对其中 1例常规核型分析显示为 4 6 ,XY,der(9) t(9;12 )的急性淋巴细胞白血病 - L 2型病例 ,M- FISH检出其具有复杂的染色体易位 :4 6 ,XY,der(2 ) t(2 ;9) ,der(9) t(9;12 ;2 2 )。对另 1例常规核型难以分析的急性单核细胞白血病 - M5型病例 ,M- FISH检出其复杂核型是 4 6 ,XY,der(2 ) t(2 ;17) ,der(10 ) t(10 ;11;17) ,der(11) t(11;?)。进一步用染色体涂抹和双色 FISH证实了 M- FISH的结果 ,并发现 ML L基因 (mixed lineage leukemia gene)受累。结论 M- FISH是筛选白血病复杂染色体异常的理想方法 ,对阐明所有白血病、乃至其它肿瘤性疾病和遗传性疾病的染色体易位和基因改变有广阔的应用前景。

t(8;21)相关急性髓系白血病受累蛋白ETO中NHR3与NHR4结构域的寡聚化

在急性髓系白血病中, t(8;21)染色体易位占12%～15%, 这种易位造成AML1-ETO融合蛋白. 随着AML1-ETO融合蛋白在白血病中发病作用的研究进展, 目前人们对ETO蛋白的功能有了深入的认识. ETO蛋白含有4个与Nervy蛋白同源的结构域(NHR 1～4). 其中NHR1结构域与果蝇TAF110因子同源; NHR2为二聚化结构域, 并能募集mSin3A/HDAC; NHR4结构域含有2个锌指结构, 它在ETO与N-CoR/SMRT/HDAC之间的相互作用中起关键作用. 而有关NHR3结构域的功能尚不清楚. 为了探讨NHR3结构域能否介导寡聚化, 克隆并纯化了该结构域. 通过分子筛凝胶排阻层析、动态光散射分析及晶体溶解后SDS-PAGE电泳, 结果显示NHR3结构域是一个紧密四聚体. 为研究NHR3和NHR4结构域的聚合性, 克隆并纯化了NHR3+4结构域(即NHR3和NHR4结构域). 通过分子筛凝胶排阻层析与蛋白非变性凝胶电泳, 结果表明NHR3+4结构域在溶液中能够形成二聚体. NHR3和NHR4结构域参与寡聚化作用的生物功能可能在于: (ⅰ) 以聚合体的形式募集核共抑制复合物; (ⅱ) 通过NHR2, NHR3和NHR4结构域的共同作用来稳定ETO蛋白的二聚体状态, 从而有利于ETO蛋白稳定募集核共抑制复合物. 这些有关NHR3和NHR4结构域参与寡聚化的功能推测及在白血病中的发病作用非常值得进一步探讨.