细胞社会学——从细胞生物学研究个体发育的一条途径

前言一、提出细胞社会学的实验基础1.过去关于决定和分化的理解2.我们的离体实验 a.解离实验 b.表皮囊实验3.为什么决定和分化要在细胞团之内进行? a.肌节发育中的细胞连接 b.佛波酯处理的实验4.

反义战略—分子细胞生物学研究的新手段

反义战略(Antisense Strategy)或称反义技术(Antisense Technology)是继重组DNA技术后分子生物学领域的又一重大进展。它从反向生物学(Reverse Biology)的角度来研究结构基因的功能、基因表达的调控等等,从而为阐明分子细胞生物学的某些根本问题提供了又一重要手段。在实践中,反义战略已给人类病毒性疾病和恶性肿瘤的基因治疗、动植物品种的改良等诸多领域带来了曙光,从而吸引了越来越多的临床医学和基础研究科学家的兴趣。

癌症与癌生物学研究

癌症是一个医学问题,也是一个生物学问题,这是人们所公认的。人类对癌的研究已有近一个世纪的时间,但直到今天它的病因和发病机理尚未完全被揭露,早期诊断和治疗也都有待改进。这一方面说明癌的本质和它的发主发展的规律极为复杂,另一方面也说明人类对癌症的认识在相当程度上还受到生物科学本身的发展所制约。人类对癌症的认识过程基本上可以说是对癌细胞的认识过程。近代癌症研究可分属三大范畴;1.癌的流行病学和预防,2.癌的诊断和治疗,3.癌的基础研究。后者主要涉及正常细胞如何转变为癌细胞?癌细胞有哪些生物学特性?在癌的发生和发展过程中癌细胞如何演变?以及癌细胞和宿主整体的关系等基本问题。

中胚层诱导中反应系统的分子生物学研究

中胚层诱导机制的研究大体上应该包括两方面的内容:“诱导”本身的机制,即植物半球细胞是通过怎样的方式诱导动物半球细胞的;目前在这个领域中,主要是对诱导因子的研究。另外是对反应系统的研究,即动物半球细胞受到诱导后,所发生的一系列的变化,还包括对反应能力(competence)的研究等等。第一个方面的内容已在另文中作了较为详细的论述,本文只着重讨论近几年来对反应系统的研究成果。

近两年细胞生物学的进展(1991-1992)

从80年代末期以来,生物大分子结构和功能的研究又取得很大的进展。一批重要的生物大分子(如受体、离子通道、间隙连结、光合作用中心Ⅰ和固氮酶铁钼蛋白等)的三维结构,陆续得到解决。这些成就使细胞的结构和功能活动在分子水平得到更为圆满的解释。另一方面,用各种分子遗传学和基因工程方法(重组DNA技术、PCR、同源重组和转基因动、植物等)对高等生物的细胞分化。

早期发育细胞间相互关系的电子显微学研究

根据电镜观察,结合在两栖类胚胎进行的在体和离体实验的结果,认为,在胚胎发育的早期,"决定"和"分化"两个过程中细胞间的相互关系不同,不但相互作用的细胞类别不同,方式也不一样。在"决定"过程中,主要的影响来自相邻细胞,也就是不同类别的细胞,方式可能是多样的。在"分化"过程中,主要依赖于同类细胞之间的相互影响,间隙连接介导的细胞通讯起主要作用。

大鼠腹水型肝瘤AH66－91的建系及其生物学特性研究

大鼠腹水型肝瘤ＡＨ６６－９１的建系及其生物学特性研究顾淇，孙燮钧中国科学院上海细胞生物学研究所（上海２０００３１）细胞培养是细胞生物学的一种重要实验手段，体外培养的细胞系常常可以成为具有多种用途的实验模型。ＡＨ６６－９１细胞系是为了适用于甲胎蛋白（Ａ...

时间分辨免疫荧光分析的最新研究和分子生物学

时间分辨免疫荧光分析的最新研究和分子生物学廖锦民（中国科学院上海细胞生物学研究所２０００３１）１９６０年Ｙａｌｏｗ和Ｂｅｌｓｏｎ创立放射免疫分析（ＲＩＡ），这个方法有极高灵敏度（１０－１５－１０－１８ｍｏｌｅ）特异性又强，准确性也高，重复性又好，因此...

荧光漂白恢复技术在细胞生物学中的应用

荧光漂白恢复(FPR)技术已发展成为定量测定细胞膜分子的流动性的方法之一。本文着重介绍了FPR技术应用于测定细胞膜中和细胞质内分子的运动,这些测定将有助于研究活细胞中膜分子的运动方式、功能及其相互关系。

花鲢卵球受精的细胞学研究

花鲢卵球属端黄卵,局部分裂。正常情况下,为单精虫受精;接受精虫的适当时期,从细胞核的标帜来说,是卵母细胞第二次成熟分裂中期。在排离卵巢的成熟卵母细胞上,有精孔、精孔细胞以及精孔细胞和卵母细胞之间的通路。精虫是经过精孔细胞进入卵球的。在26—27℃时,受精5—10分钟,精虫头部逐渐核化,星光发展,卵球第二次成熟分裂进入后期和末期,皮质小泡大量外排;10—15分钟,雌雄原核形成,精虫星光扩大,并移向胚盘中央区域,皮质小泡已排除殆尽;15—20分钟,雌雄原核在胚盘中央区接合,一对新发展的子星光出现;20—25分钟,第一次胚胎分裂图形建成;30分钟左右,卵裂开始;续后的分裂,大概每次间隔10分钟。本文比较分析了花鲢、白鲢、金鱼、鳊鱼和草鱼五种鲤科鱼类的受精过程,为它们之间杂交的可能性和困难性,提供了实验依据。

推进早期胚胎发育正常调控过渡的输卵管细胞因子的初步研究

本研究对兔输卵管上皮细胞（ＲＯＥＣ）分泌蛋白（ＲＯＰｓ）的特征及功能作了初步研究和分析。ＲＯＲｓ分子量介于１３５—４４ｋＤ，可分为３组，其中第２、３组为酸性糖蛋白。经糖苷酶消化，第３组ＲＯＰｓ显著地降解为分子量接近３０ｋＤ的蛋白。利用制备的抗总ＲＯＰｓ多抗（Ａｒｏｐ－Ｔ）以及针对不同分子量ＲＯＰ的抗血清（Ａｒｏｐ－Ⅰ、Ａｒｏｐ－Ⅱ和Ａｒｏｐ－Ⅲ），分别进行功能分析发现，Ａｒｏｐ－Ｔ和Ａｒｏｐ－Ⅰ能使受精卵发育完全阻断；Ａｒｏｐ－Ⅱ阻断受精卵发育的百分率为７５％；Ａｒｏｐ－Ⅲ无特异性地阻断受精卵发育的作用。结合我们已报道的研究结果，推测ＲＯＰ－６８和ＲＯＰ－５５就是具备启动早期胚胎合子型基因开放、实现正常发育调控过渡功能的输卵管细胞因子。

hNIS基因转导黑色素瘤细胞介导^(125)I摄取的实验研究

目的 探讨克隆的人钠 碘同向转运体 (hNIS)基因cDNA的生物学性能及其用于黑色素瘤放射治疗的可能性。方法 用反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)从人甲状腺组织总RNA中扩增出hNIS基因cDNA序列 ,将其克隆至pUCm T载体并亚克隆至真核载体pcDNA3中 ,电击法将重组质粒导入黑色素瘤细胞 (B16 )建立新细胞系 (B16 A) ,在体外培养条件下研究其对放射性碘的摄取及外流情况。结果 成功克隆了hNIS基因 ,建立了能稳定表达hNIS基因的新型细胞系B16 A和单转空质粒pcDNA3的细胞系B16 B。B16 A细胞的摄碘能力较B16细胞高 17倍 ,较单转空质粒pcDNA3细胞系B16 B高 19倍。碘的外流过程十分迅速 ,有效半衰期 (T1 2 )仅 10min。结论 体外培养条件下 ,hNIS基因转导黑色素瘤细胞其本身足以介导碘的摄取 ,但有效半衰期较短 ,有待进一步研究如何增加放射性碘的摄取量及延长其细胞内滞留时间 ,从而提高放射生物学效应。

子宫平滑肌瘤细胞增殖与表皮生长因子受体关系研究

目的 探讨子宫肌瘤细胞增殖及与表皮生长因子受体 (EGF R)水平的关系。方法 用流式细胞仪测定 5 0例子宫肌瘤组织的细胞周期DNA指数 (DI)、S期细胞百分比 (SPF)、细胞增殖指数 (PI) ,其中 2 8例测定肌瘤内EGF R水平 ,以子宫肌瘤邻近的正常子宫平滑肌为对照。结果 子宫肌瘤SPF、PI、EGF R水平显著高于正常子宫平滑肌 ;DI差异无显著性 ;肌瘤EGF R水平与PI、SPF呈正相关。结论 肌瘤细胞内高水平的EGF R与肌瘤细胞过度增殖有关。

人外周血γδT细胞选择性增殖及其体内抗肿瘤的特性研究

观察人外周血γδＴ细胞在裸鼠体内的抗肿瘤效应。方法用ＭＥＰ和ＩＬ┐２共刺激培养方法，扩增人外周血γδＴ细胞，与人肠癌细胞系（ＬｏＶｏ）细胞混合接种于裸鼠体皮下。结果经共刺激培养１０天后，细胞总数可增加１００～３００倍，γδＴ细胞的比率上升到７０％以上。给裸鼠接种１×１０６ＬｏＶｏ细胞１个月后，不接种γδＴ细胞的对照组裸鼠皮下瘤块重量为０．４ｇ～０．９ｇ，瘤块病理切片显示有明显肿瘤细胞堆积；而同时接种１×１０７γδＴ细胞的实验组裸鼠瘤块重量仅为０～０．００５ｇ，瘤块病理切片显示其中除肿瘤细胞外，还伴有增生性淋巴细胞。结论人外周血γδＴ细胞能有效地抑制人肠癌细胞ＬｏＶｏ在裸鼠体内的生长。

小鼠原生殖细胞建系过程及其分化特性的研究

以小鼠8.5dpc、10.5dpc、12.5dpc胚胎为材料,分离其中包含PGC的胚胎组织,使其生长于饲养层细胞上,在生长因子LIF、SCF和bFGF的共同作用下存活增殖,形成PGC克隆,经过几次分散转移至新的饲养层细胞,产生稳定增殖的EG干细胞克隆,共建成5株EG细胞系,AKP染色以及oct-4基因表达产物的免疫荧光检测均显示阳性。EG1、EG2、EG3、EG4、EG5,分别来自8.5、10.5dpc的胚胎,没有得到长期培养的12.5dpc的EG细胞系。EG细胞系在有饲养层细胞或添加LIF的环境中可稳定传代,保持不分化状态,至少15代内正常核型细胞所占比例80%以上。去除抑制分化因素的前提下,悬浮培养的EG细胞形成胚体,分化出类似胚胎内胚层和外胚层的细胞结构;贴壁生长的胚体能产生不同类型的分化细胞,包括上皮细胞、成纤维细胞、神经细胞等。EG细胞在裸鼠体内形成畸胎瘤。以上结果证实我们建立的EG细胞系具发育多能性,为研究早期胚胎和生殖细胞生长分化提供了模型。

大鼠肝癌模型CBRH-3的建立及其生物学特性

用ＤＥＮＡ诱发近交系Ｗｉｓｔａｒ大鼠，经三个月后得原发性肝癌，移植于同品系幼鼠，从而建立了 一株染色体众数正常，ＡＥＰ阳性的大鼠移植性肝癌模型，命名为ＣＢＲＨ－３，病理鉴定为肝细胞型肝 癌。至今已传至６０余代，目前生长稳定。

二氧化碳气腹对肿瘤细胞生长和播散影响的研究

目的 研究静脉使用 5 %NaHCO3 纠正CO2 气腹造成的酸中毒能否改善其对肿瘤细胞的促生长和播散作用。方法 观察静脉推注 5 %NaHCO3 的CO2 气腹组、CO2 气腹组及对照组带瘤Wister大鼠的肿瘤生长及穿刺点转移情况。结果 静脉推注 5 %NaHCO3 的CO2 气腹组、CO2 气腹组及对照组肿瘤的重量、体积和腹水体积有差异 ,但无统计学意义。穿刺点转移率无明显差异。结论 CO2 气腹影响肿瘤细胞生长和播散的机制复杂 ,不能完全以CO2 引起机体酸中毒解释。未找到通过静脉推注 5 %NaHCO3 可改善CO2 气腹对肿瘤细胞生长影响的基础理论依据。

TGF_α-PE40对胶质瘤细胞生长抑制的实验研究

目的观察基因重组转化生长因子α┐绿脓杆菌外毒素融合蛋白（ＴＧＦα┐ＰＥ４０）对表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）表达水平高的胶质瘤细胞生长的导向抑制作用。方法通过结晶紫染色和３Ｈ┐亮氨酸掺入量的测定，观察基因重组ＴＧＦα┐ＰＥ４０对培养脑胶质瘤Ｕ２５１细胞生长及其蛋白质合成的影响。结果ＴＧＦα┐ＰＥ４０浓度为１～１００ｎｇ／ｍｌ时，对脑胶质瘤Ｕ２５１细胞生长及其蛋白质的合成是呈剂量依赖性抑制。结论这表明ＴＧＦα┐ＰＥ４０对脑胶质瘤Ｕ２５１细胞的生长具有较强的抑制作用。

胰岛素促进血管内皮细胞产生一氧化氮的实验研究

目的 :探讨胰岛素对血管内皮细胞增殖、NO产生和NOS基因表达的影响。方法 :培养牛主动脉内皮细胞 ,测定培养上清液中NO氧化产物NO-2 的水平并应用定量RT/PCR技术检测内皮细胞NOSmRNA的表达水平。结果 :①胰岛素对大血管内皮细胞无细胞毒作用 ,也不影响细胞增殖 ;②在 1～ 15 μg/ml浓度范围内 ,胰岛素加强内皮细胞释放NO ,且呈剂量依赖的方式 ,NOS特异性抑制剂L NAME可阻抑之 ;③胰岛素轻度增加NOSmRNA表达水平 ,但无统计学意义。结论 :胰岛素既不影响大血管内皮细胞增殖 ,也不影响内皮细胞NOSmRNA表达水平 ,但以剂量依赖的方式加强内皮细胞产生NO ,推测其诱导NO产生的机制可能是通过酶活性的诱导 。

小鼠原生殖细胞体外培养及其应用研究

原生殖细胞（ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌｇｅｒｍｃｅｌｌ，ＰＧＣ）是胚胎生殖谱系最原始形式的细胞，在体胚胎迁移期ＰＧＣ增殖极为旺盛。体外培养的小鼠迁移期ＰＧＣ在饲养层细胞和三种生长因子（干细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及白血病抑制因子）的共同作用下，可发展为长期增殖并维持不分化状态的胚胎性干细胞，即胚胎生殖细胞（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｇｅｒｍｃｅｌｌ，ＥＧ），具全能性发育潜能。ＥＧ建系成功对于研究生殖细胞发育以及寻找新的转基因动物操作的有效载体具有重要价值。